张海
- 作品数：13 被引量：5H指数：1
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- FGF21通过FGFRl-ERKI／2-Elk-1通路抑制HepG2细胞载脂蛋白（a）表达
- 2013年
- 目的探讨FGF21对HepG2细胞中载脂蛋白（a）[Apo（a）]表达的影响及其作用机制。方法以HepG2细胞为研究对象，用不同浓度FGF21（O、50、100、200及400μg／L）或相同浓度FGF21（200μg／L）处理细胞不同时间（0、6、12、24及48h），用免疫组化、Westernblot观察细胞Apo（a）蛋白水平的变化，real—timePCR观察Apo（a）mRNA变化、ELISA观察培养基中Apo（a）分泌情况，
- 林小龙何兴兰马小峰张凯张海莫学靓危当恒姜志胜王佐
- 关键词：HEPG2细胞
- 5-Aza-CR调节FXR基因去甲基化抑制载脂蛋白（a）表达被引量：1
- 2013年
- 目的观察5-Aza—CR的DNA去甲基化作用对HepG2细胞载脂蛋白（a）[Apo（a）]表达的影响，并探讨其作用机制。方法选取Apo（a）高表达细胞株HepG2细胞为研究对象，MTT法测定不同浓度的5-Aza—CR处理细胞72h后细胞相对存活率，选取合适药物作用浓度范围；通过Westernblot检测5-Aza—CR不同浓度组和不同处理时间组HepG2细胞Apo（a）、FXR的表达水平，用RT—PCR检测Apo（a）、FXR的mRNA水平；MSP检测5-Aza-CR不同浓度组及不同时间组FXR基因启动子甲基化水平。
- 谭剑凯谭小进赵岳林小龙何兴兰马小峰张凯张海危当恒姜志胜王佐
- 关键词：DNA甲基化FXR
- FGF21对THP-1源性巨噬细胞胆固醇流出的影响及其机制
- 2013年
- 目的探讨FGF21对THP-1源性泡沫细胞胆固醇流出的影响及机制。方法采用体外培养的THP-1细胞作为研究对象，用PMA诱导为巨噬细胞，加入OX-LDL（50mS／L）诱导泡沫细胞。同时加入不同浓度的FGF21处理，油红0观察细胞的脂质蓄积情况，高效液相色谱法测定细胞内总胆固醇（TC）、游离胆固醇（FC）、胆固醇酯（CE）变化，液体闪烁计数仪测定胆固醇流出率，低pH值EUSA测定细胞内cAMP水平，采用实时定量PCR和蛋白印迹法分别检测细胞中ABCAl、ABCGl、LXRα、PPA脚的表达变化。结果泡沫细胞模型组脂质蓄积远多于正常组。而FGF21处理组（200ng／L、400ng／L）与泡沫细胞模型组相比脂质蓄积明显减少，并可以显著减少细胞内TC、FC、CE及CE／TC，同时显著提高细胞胆固醇流出率、细胞内cAMP水平及ABCAl、ABCGl表达。结论FGF21可以促进THP-1源性巨噬细胞ABCAl、ABCGl表达促进细胞内胆固醇流出，抑制泡沫细胞形成。其机制可能是通过上调细胞内cAMP水平起作用。
- 唐雅玲林小龙何兴兰张海张凯谭建凯莫学靓危当恒姜志胜王佐
- 关键词：胆固醇流出脂质蓄积泡沫细胞
- FGF21通过FGFR1-ERK1/2-Elk-1通路抑制HepG2细胞载脂蛋白(a)表达
- 目的 探讨FGF21对HepG2细胞中载脂蛋白(a)[Apo(a)]表达的影响及其作用机制.方法 以HepG2细胞为研究对象,用不同浓度FGF21(0、50、100、200及400 μg/L)或相同浓度FGF21(200...
- 林小龙何兴兰马小峰张凯张海莫学靓危当恒姜志胜王佐
- 关键词：HEPG2细胞
- miR23b-3p和miRl25b-5p通过Etsl下调载脂蛋白（a）水平被引量：1
- 2013年
- 目的探讨miR23b-3p和miRl25b-5p对HepG2细胞中载脂蛋白（a）[Apo（a）]表达的影响及其作用机制。方法以HepG2细胞为研究对象，EtslsiRNA通过Lipo2000转染HepG2细胞，Westernblot检测细胞内Etsl及Apo（a）蛋白水平；通过Lipo2000分别将miR23b一3pmimic和miRl25b-5pmimic转染HepG2细胞，
- 赵岳林小龙何兴兰马小峰谭剑凯张凯张海危当恒姜志胜谭小进王佐
- 关键词：靶基因
- FGF21对THP-1源性巨噬细胞胆固醇流出的影响及其机制
- 目的 探讨FGF21对THP-1源性泡沫细胞胆固醇流出的影响及机制。方法 采用体外培养的THP-1细胞作为研究对象,用PMA诱导为巨噬细胞,加入ox-LDL(50 mg/L)诱导泡沫细胞,同时加入不同浓度的FGF21处理...
- 唐雅玲林小龙何兴兰张海张凯谭建凯莫学靓危当恒姜志胜王佐
- 关键词：胆固醇流出脂质蓄积泡沫细胞
- 胆酸通过FXR／miR-23b-3p／HNF4途径下调载脂蛋白（a）表达
- 2013年
- 目的前期研究发现miR-23b-3p高效降HepG2细胞载脂蛋白（a）[Apo（a）]表达，本研究拟在基础上分析胆酸降Apo（a）效用与miR．23b．3p的关系，并检测胆酸调控miR．23b．3p表达的机制，分析miR一23b一3p作用靶基因。研究胆酸降Apo（a）作用新机制。方法首先用miRanda、Targetscan、PITA三个生物信息学在线工具对miR-23b一3p与调控筛选调控LPA基因的转录因子HNF4进行靶基因分析，然后验证胆酸对高表达Apo（a）细胞株HepG2的降Apo（a）效用的时间（0h、6h、12h、24h、48h）和量效（0、0．5、2、8、32mtg／L）关系，然后分析胆酸抑制Apo（a）表达与MAPK和miR-23b一3p的关系，分析胆酸活化MAPK并上调miR-23b．3p表达作用，分析胆酸调控miR-23b．3p表达与FXR及MAPK的关系，分析FXR、MAPK结合转录miR一23b-3p的基因启动子情况，最后使用荧光素酶报告系统对miR-23b一3p与调控筛选调控LPA基因的转录因子HNF4进行靶基因验证实验。用Westernblot检测Apo（a）表达水平、p38MAPK及p-p38MAPK、实时定量PCR检测miR-23b一3p表达水平。结果miRanda、Targetscan、PITA三个生物信息学分析工具表明HNF4G可作为miR-23b-3p的靶基因，胆酸呈时间和剂量依赖性调控HepG2细胞Apo（a）的表达，以32mg／L和24h的作用效果最显著，48h作用效果下降，胆酸抑制Apo（a）表达与MAPK和miR-23b．3p有关，胆酸能活化MAPK并上调miR-23b．3p表达，胆酸调控miR-23b-3p表达与FXR及MAPK，FXR在转录miR-23b-3p的基因启动子区域有8个结合位点，未发现MAPK的结合位点，MAPK可能通过间接作用于转录miR-23b-3p的基因启动子区域而发挥下调miR-23b-3p作用。使用FXR拮抗剂抑制miR-23b-3p表达的效用要强于抑制MAPK，可能胆酸更多地通过FXR来介导其上调miR-23b．3p效用，而MAPK只是胆酸发挥效用的信号途径的一个分支，转染miR-23b-3p处理组细胞裂解后荧光强度显著低于对照组，验证了HNF
- 莫学靓林小龙何兴兰马小峰张凯张海危当恒姜志胜王佐
- 关键词：胆酸HEPG2细胞靶基因
- 5-氮杂-2'-脱氧胞苷通过上调法尼酯X受体启动子甲基化水平抑制HepG2细胞载脂蛋白A表达
- 2014年
- 目的探索5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）的DNA去甲基化作用对Hep G2细胞载脂蛋白A（Apo A）表达的影响,并探讨其作用机制。方法选取Apo A高表达细胞株Hep G2细胞为研究对象。噻唑蓝法测定Hep G2经不同浓度（0、10、20、40、80μmol/L）的5-Aza-CdR处理不同时间（12、24、48、72、96 h）后细胞相对存活率;Western blot检测5-Aza-CdR不同浓度组Hep G2细胞Apo A、法尼酯X受体（FXR）的表达水平;逆转录聚合酶链反应检测Apo A、FXR的mRNA水平;亚硫酸氢盐测序PCR检测FXR基因启动子在5-Aza-CR不同浓度组的甲基化水平。结果与对照组相比,5-Aza-CR 10、20、40μmol/L组在12、24、48、72 h各组间细胞存活率无统计学差异（P〉0.05）,而在20μmol/L 96 h组、40μmol/L 96 h组、80μmol/L 24 h组、80μmol/L 48 h组、80μmol/L 72 h组以及80μmol/L 96 h组Hep G2细胞存活率存在统计学差异（P〈0.05）,选取0~40μmol/L为5-Aza-CdR的安全浓度范围,0~72 h为合适作用时间。与对照组相比,5-Aza-CdR呈剂量和时间依赖性上调FXR蛋白、下调Apo A蛋白表达,其中以40μmol/L组最为明显（P〈0.05）;与对照组相比,5-Aza-CdR呈剂量依赖性上调FXR mRNA、下调Apo A mRNA表达,其中以40μmol/L组最为明显（P〈0.05）。随着5-Aza-CdR浓度的递增,FXR基因启动子甲基化水平呈下降趋势,其中对照组FXR基因启动子甲基化率为58.3%,而40μmol/L组FXR基因启动子甲基化率仅为8.3%。结论 5-Aza-CdR通过DNA去甲基化作用促进FXR表达,从而下调Apo A的表达。
- 马小峰谭剑凯张海何兴兰瞿凯雷建军王佐
- 关键词：载脂蛋白A法尼酯X受体
- DNA甲基化与miRNA相互调节与动脉粥样硬化被引量：3
- 2014年
- 动脉粥样硬化是一类严重危害人类健康的心血管疾病,其发病机制一直是研究的热点.随着近年表观遗传学研究的深入,特别是人类表观基因组计划(Human Epigenome Project,HEP)的实施,以及国际人类表观基因组协会(Human Epigenome Con-sortium,HEC)的成立,DNA甲基化和miRNA在动脉粥样硬化中的调控作用机制被逐渐认识.它们不仅能够作为独立因子在动脉粥样硬化的发生发展过程发挥作用,而且最新研究发现,它们可以相互形成交叉网络调控,但其具体过程尚未阐明.本文拟就DNA甲基化、miRNA在动脉粥样硬化发生发展中相互作用的最新研究进行综述.
- 张海张凯王佐
- 关键词：动脉粥样硬化DNA甲基化微小RNA
- 胆酸通过FXR/miR-23b-3p/HNF4途径下调载脂蛋白(a)表达
- 目的 前期研究发现miR-23b-3p高效降HepG2细胞载脂蛋白(a)[Apo(a)]表达,本研究拟在基础上分析胆酸降Apo(a)效用与miR-23b-3P的关系,并检测胆酸调控miR-23b-3p表达的机制,分析mi...
- 莫学靓林小龙何兴兰马小峰张凯张海危当恒姜志胜王佐
- 关键词：胆酸HEPG2细胞靶基因
