孙剑
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 供职机构：四川大学华西基础医学与法医学院更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 简化的人纤溶酶原饼环区5基因的克隆及其在大肠杆菌中的融合表达被引量：1
- 2006年
- 从正常人肝脏组织中提取总RNA,合理设计引物,利用RT-PCR直接得到简化的hPK-5基因.将该基因克隆至原核表达质粒pGEX-1λT,将此重组载体转化大肠杆菌JM109,经PCR、酶切及测序鉴定阳性克隆.用IPTG诱导阳性克隆表达融和蛋白,SDS-PAGE观察表达产物.再通过Western-Blotting鉴定.简化的hPK-5基因的RT-PCR产物为264bp.通过酶切、测序等方法鉴定简化的hPK-5基因正确克隆至原核表达质粒pGEX-1λT中.重组质粒pGEX-1λT/predhPK-5在大肠杆菌中成功地表达出了GST/predhPK-5融合蛋白,并通过免疫学测定,相对分子质量约为3.6×104,与理论值3.58×104相符.目的蛋白表达量占菌体总蛋白的23.6%.
- 王健琪翟朝阳孙剑
- 关键词：基因重组
- 不相容双质粒共表达人内皮抑素及简化人纤溶酶原饼环区5
- 目的：构建人内皮抑素(human Endostatin)原核表达质粒pET28a/hES，并与简化人纤溶酶原饼环区(predigested human PlasminogenKringle5，predhPK-5)在大肠杆...
- 孙剑
- 关键词：抗血管生成人内皮抑素
- 文献传递
- 不相容双质粒共表达人内皮抑素及简化人纤溶酶原饼环区5被引量：3
- 2006年
- 目的构建人内皮抑素(humanendostatin,hES)原核表达质粒pET28a/hES并与简化人纤溶酶原饼环区5(predigestedhumanplasminogenkringle5,predhPK-5)在大肠杆菌中实现共表达。方法RT-PCR法从人肝癌组织中扩增人内皮抑素基因,利用基因克隆技术构建原核表达质粒pET28a/hES。在卡那霉素与氨苄青霉素的选择压力下,将其与pGEX-1λT/predhPK-5共同转化E.coliBL21(DE3),并诱导表达重组蛋白。同时从连续培养时间与传代次数两方面检测了共转化子的稳定性。结果成功构建了重组质粒pET28a/hES,其与pGEX-1λT/predh-PK-5的共转化子在双抗生素压力下可以共存,并在E.coliBL21(DE3)中成功共表达了人内皮抑素及简化的人纤溶酶原饼环区5,其表达量分别占蛋白总量的20%和21%。在双抗性培养基中培养16h及传代120代,共转化子存活率均大于75%,具有较好的稳定性。结论不相容质粒pET28a/hES与pGEX-1λT/predhPK-5在大肠杆菌中的成功共表达,对基因共表达方法作了有益探索,验证了不相容质粒共表达方法的可行性。
- 孙剑王健琪翟朝阳
- 关键词：抗血管生成人内皮抑素共表达
