翟朝阳
- 作品数：25 被引量：139H指数：6
- 供职机构：四川大学华西基础医学与法医学院更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人源性神经营养素-6成熟肽基因融合表达载体的构建及表达产物的纯化被引量：1
- 2005年
- 为了得到人源性神经营养素-6(N eurotroph in-6,NT-6)成熟肽片段,本研究以经测序鉴定的人源性NT-6 cDNA为模板,通过聚合酶链式反应(Po lym erase cha in reaction,PCR)扩增得到NT-6蛋白成熟肽编码区基因片段;将该基因克隆到融合表达载体pGEX 1-λT,构建重组原核融合表达质粒pGEX-NT-6;在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropy l-βD-th ioga lactos ide,IPTG)诱导的条件下,观察融合蛋白在大肠杆菌JM 109中的表达情况;利用蛋白回收试剂盒对表达产物进行纯化。结果表明经PCR扩增后,得到一分子量为460 bp左右的片段;含有该片段的重组质粒经电泳及双酶切鉴定表明,所得到的重组质粒即为含有目的片段的pGEX 1-NT-6;与带有pGEX 1-λT质粒的细菌相对照,pGEX 1-NT-6质粒转化的大肠杆菌JM 109,在IPTG诱导下表达了特异性的融合蛋白,该蛋白分子量为41 KD。获得的融合蛋白经凝血酶酶切后,得到了分子量大约为15 KD的NT-6成熟肽。本研究成功构建了人源性NT-6成熟肽编码区基因融合表达载体,并纯化了其表达产物,为研究人源性NT-6的生物学功能奠定了基础。
- 张承武蔡青松李自成翟朝阳郑煜
- 关键词：成熟肽
- 推定编码嗜麦芽黄单胞菌整合酶类蛋白基因片段的克隆
- 2004年
- 目的 扩增编码嗜麦芽黄单胞菌 CG类受体的核酸序列。方法 根据 Grover报道的嗜麦芽黄单胞菌CG类受体的 342 bp部分核酸序列设计的一特异引物 P1和随机引物进行 PCR扩增 ,将 PCR产物克隆到 p UCm - T载体上 ,对经酶切鉴定筛选的重组质粒上的插入片段进行测序和分析。结果 将约 5 0 0 bp PCR产物克隆到p UCm - T载体上 ,经酶切鉴定筛选得到重组质粒 p U Cm- Int。 p UCm - Int上插入片段经 M13通用引物测序 ,5 10 bp克隆片段 (Gen Bank注册号为 :AY36 396 2 )的 4 10～ 4 86 bp与柑橘黄单胞菌质粒 p XAC6 4上的 XACb0 0 0 9基因的90 34～ 895 8bp部分有 84 %同源序列 ,由 5 10 bp核酸序列编码的 16 9氨基酸 (aa)序列的 4～ 16 6 aa部分与柑橘黄单胞菌 XACb0 0 0 9基因编码的 4 2 4 aa整合酶类蛋白的 38～ 2 0 0 aa序列有 6 2 %同源序列。结论 克隆到的 5 10
- 梁淑芳陈曼玲翟朝阳
- 关键词：嗜麦芽黄单胞菌随机引物PCR扩增
- 嗜麦芽黄单胞菌CG样受体跨膜域克隆与分析
- 2004年
- 根据已知生物LH/CG受体同源性较大的跨膜域序列设计引物,以嗜麦芽黄单胞菌基因组DNA为模板进行PCR扩增,将约600bp目的产物克隆到pUCm T载体上,经酶切及PCR扩增筛选鉴定得到重组质粒pUCm Rec.以DIG标记的PCR扩增片段作为探针进行DNA斑点杂交,确证目的PCR扩增片段与该菌染色体DNA有同源性.克隆到的593bpCG样受体跨膜域序列在GenBank中的注册号为AY355346.再以地高辛标记的593bp跨膜域序列为探针,从构建的该菌基因组文库中,筛选到可能与CG样受体属于同一跨膜受体家族的编码组氨酸激酶/效应调节杂合蛋白部分序列的685bp核酸片段(其在GenBank中的注册号为AY359445).
- 梁淑芳陈曼玲翟朝阳
- 关键词：嗜麦芽黄单胞菌基因组文库
- 喉癌患者血细胞线粒体DNA控制区发现高频率变异
- 2002年
- 利用PCR SSCP技术检测线粒体DNA(mtDNA)复制控制区中 16 4bp的片段 ,在 2 2例喉癌患者的血细胞中发现 3例同质性突变 ,5例异质性突变 ,而在 12例正常人中未发现带型改变 (0 /12 ) .序列分析发现其中一个样本有T146A ,T199C和T2 0 4C的变异 ,T146A为新发现的线粒体DNA多态性 ;这个研究结果提示血细胞线粒体DNAD Loop区的变异 ,可能与喉癌发生有一定的联系 ,对线粒体DNA突变的更深入的研究可以考虑与细胞内信号传导联系起来 ,这将有助于理解线粒体DNA在实体瘤和恶性血液病的研究以及肿瘤细胞中线粒体DNA的复制机制 ,这对寻找新的肿瘤基因诊断的标志物和监测肿瘤发生的遗传易感性是有意义的 .
- 蔡青松张楠张艳翟朝阳
- 新型抗菌肽分子的计算机辅助设计被引量：13
- 2002年
- 目的 通过计算机辅助设计 ,获得具有高活性的新型抗菌肽分子序列 ,为合成这类抗菌肽和通过基因工程方法生产新型药物提供理论依据。方法 通过互联网和计算机软件比较和分析了大量有关抗菌肽的序列和空间结构 ,根据分析结果 ,设计了可能具有很好抗菌活性的抗菌肽分子 ,并用空间结构分析软件观察其可能的结构 ,进行三维结构的计算和预测 ,与已知的抗菌肽分子进行比较。结果 分析发现抗菌肽一般在肽分子的两头分别形成螺旋 ,螺旋趋势强弱与抗菌肽的活性呈一定的正相关。根据这些资料和分析结果 ,设计了一些抗菌肽序列。其中一个序列为 :GWL RKIGKRIKRIGQYFSDAAL EVL GVA。经一级结构分析和空间构象分析显示 ,这一设计的抗菌肽分子可能具有较强的抗菌活性。结论 随着各种数据库和分子生物学软件的完善和丰富 ,充分利用它们进行新分子的设计成为可能。
- 蔡青松张艳翟朝阳
- 关键词：抗菌肽分子序列
- 利用RAPD技术绘制不同病原微生物基因指纹图
- 传染性疾病是严重危害人类健康的一类疾病,但目前尚缺乏一种相对通用的检测方法对感染性因子做出准确的鉴定,因此,利用分子生物学技术从染色体水平上测定各类感染性因子的特征,从而建立新的分子诊断方法,具有重要意义。一、材料与方法...
- 刘刚陶传敏翟朝阳
- 文献传递
- 嗜麦芽黄单胞菌基因组DNA快速提取方法被引量：2
- 2002年
- 目的 建立一种快速简便提取嗜麦芽黄单胞菌 (X anthomonas maltophilia)基因组 DNA的方法。方法 用去污剂 SDS和 CTAB破坏细胞膜结构 ,使胞内核酸释放 ,用酚 /氯仿 /异戊醇去除蛋白质 ,异丙醇沉淀DNA,TE溶解 DNA。结果 提取的 DNA琼脂糖电泳图谱与 Hauben及 Dufresne方法提取的 DNA图谱相同 ,DNA含量为 34 2～ 388μg/ m l,OD2 60 / OD2 80 为 1.88～ 1.90。 DNA能被 Eco R 酶切消化。结论 本方法能快速简便提取 X.maltophilia DNA,提取的 DNA含量较高、纯度较好 ,可用于酶切分析、构建文库及 PCR操作。
- 梁淑芳翟朝阳李蓉晖廖英陈曼玲
- 关键词：嗜麦芽黄单胞菌基因组DNA快速提取方法
- 缺氧缺血性脑损伤新生猪海马皮层细胞色素C氧化酶活性变化被引量：16
- 2004年
- 目的 研究缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)新生猪海马皮层细胞色素C氧化酶 (COX)活性变化。方法 50只 3d新生猪随机分为实验组和对照组 (假手术组 )。实验组制成HIBD模型后置空气中 ,根据在空气中放置时间分 4组 (0h组 ,2 4h组 ,48h组 ,72h组 ) ,每组 10只。每只新生猪分离左侧海马皮层线粒体 ,用分光光度计测定其COX活性 ;采用SDS -PAGE分析线粒体蛋白改变。结果 1.0h组COX活性与对照组无显著性差异(P >0 .0 5) ,再灌注时开始下降 ,2 4h组活性最低 (P <0 .0 5) ,然后逐渐回升 ,但 72h组仍未恢复至对照水平(P <0 .0 5)。 2 .SDS -PAGE示 2 4h组、48h组和 72h组线粒体蛋白成分和结构与对照组比较有明显差异。结论 HIBD后再灌注线粒体COX活性下降 ,线粒体蛋白成分和结构发生明显变化 ,此为线粒体能量代谢障碍的直接原因 ,也是HIBD中线粒体对神经元凋亡起关键作用的理论基础。
- 付雪梅李炜如姚裕家翟朝阳向龙石晶杨惠明唐军
- 关键词：脑缺氧脑缺血
- 乳铁多肽,一种具有潜在抗菌能力的活性多肽被引量：11
- 2004年
- 乳铁多肽 (lactoferricin ,Lfcin)是具有广谱杀菌 ,抑真菌 ,抑病毒 ,抑杀肿瘤细胞等作用的一类活性多肽 ,是乳铁蛋白 (lactoferrin ,Lf)经蛋白酶水解而产生的。该文主要介绍Lfcin的来源、结构特征。
- 石芳翟朝阳
- 关键词：抗菌肽结构特征
- 抗菌肽的抗肿瘤作用被引量：24
- 2006年
- 抗菌肽是宿主免疫防御系统的重要成分,具有广谱杀菌、相对分子量较小、热稳定性及水溶性好等优点,更重要的是抗菌肽能选择性杀灭肿瘤细胞,对人畜毒副作用小。因此,抗菌肽在生物和医药等方面,尤其是抗肿瘤方面有很好的开发前景。
- 韩玉萍翟朝阳
- 关键词：抗菌肽抗肿瘤
