刘高勤
- 作品数：55 被引量：121H指数：7
- 供职机构：苏州大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省医学重点人才培养基金苏州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学更多>>
- 重组鼠TNF-α对碱烧伤角膜新生血管作用的研究
- 金辉刘高勤陆培荣
- 小鼠角膜新生血管内皮细胞的分离培养及其趋化因子受体的表达被引量：4
- 2016年
- 背景研究角膜新生血管生成的病理机制对角膜新生血管的治疗具有重要意义，但目前的相关研究多采用非角膜新生血管来源的血管内皮细胞，研究结果的可靠性受到一定影响。目的探索从碱烧伤诱导实验性小鼠角膜新生血管组织中分离和培养血管内皮细胞的方法，并检测新生血管内皮细胞中趋化因子受体的表达，为角膜新生血管内皮细胞的生物学特性研究奠定基础。方法7—8周龄SPF级健康雄性BALB／c小鼠10只，采用NaOH碱烧伤法构建小鼠实验性角膜新生血管模型，采用免疫荧光技术检测CD31在角膜新生血管中的表达。在碱烧伤后2周摘取眼球分离角膜组织，眼科手术剪剪碎角膜组织后应用胶原酶D消化获取单个细胞，使用包被CD31抗体的磁珠分选获取血管内皮细胞。采用免疫组织化学染色法检测CD31在细胞中的表达以鉴定培养的细胞，采用逆转录PCR法检测血管内皮细胞中趋化因子受体基因的表达。结果碱烧伤后7d裂隙灯显微镜下可见小鼠左眼角膜出现新生血管，碱烧伤后2周角膜新生血管的形成达高峰，免疫荧光检测可见角膜组织内特异性CD31染色的血管网。角膜新生血管血管内皮细胞培养后2h贴壁生长，形态呈扁平多边形，体积较大，传代培养后细胞生长速度明显加快。培养的角膜新生血管内皮细胞CD31表达阳性，细胞质中呈棕黄色染色，而角膜基质细胞中CD31表达阴性。逆转录PCR结果显示分离培养的血管内皮细胞中CCR1、CCR2、CCR3和CCR4mRNA相对表达量最高，CXCR3、CCR6、CCR10和CX3CRlmRNA呈中等强度表达，CCR5、CCR8mRNA相对表达量较低，而CCR9、CXCR4和CXCR5mRNA表达未检测到。结论CD31抗体的磁珠分选法可有效分离纯化小鼠角膜新生血管内皮细胞，并可进行体外培养且培养的细胞可表达趋化因子受体。
- 刘高勤肖艳辉陈志刚徐静陆培荣
- 关键词：趋化因子受体
- “一箭双星法”构建Flt3转基因细胞株
- 2005年
- 目的构建稳定表达Flt3分子的转基因细胞株。方法将Flt3基因重组入逆转录病毒载体pEGZ-term,通过293T细胞的包装获得具有感染能力的完整重组病毒载体,进而采用“一箭双星法”即同时感染BaF和L929细胞,构建Flt3转基因细胞株。结果成功获得稳定表达Flt3的转基因细胞株BaF/Flt3和L/Flt3。结论采用“一箭双星法”成功构建Flt3转基因细胞株,为以Flt3为靶分子的研究奠定了物质基础,也为类似的高难度的转基因细胞株的构建提供了有价值的经验。
- 居颂光居颂文仇红霞傅晋祥周斌王凤鸣胡玉敏朱华亭刘彤刘高勤张学光
- 关键词：FLT3
- FL转基因细胞的构建及膜型FL对U937细胞的体外促增殖效应被引量：3
- 2005年
- 目的构建稳定表达人膜型FL分子的转基因细胞株,观察膜型FL和可溶性FL对单核细胞性(M5型)白血病细胞株的体外促增殖效应。方法利用PCR方法克隆人FL全长基因,继而重组入逆转录病毒表达载体pEGZ-Term,转染包装细胞293T,用含有完整重组逆转录病毒颗粒的293T细胞培养上清感染L929细胞,筛选获得Zeocin抗性的转基因细胞。采用RT-PCR和流式细胞仪表型分析等方法进行鉴定。MTT法分析了L929/FL细胞和可溶性FL体外刺激U937细胞的增殖效应。结果成功构建了稳定表达人膜型FL的转基因细胞L929/FL,膜型FL在体外能够有效促进U937细胞增殖,而可溶性FL并不能有效促进U937细胞的体外增殖。结论成功构建了稳定表达人膜型FL的转基因细胞,并且提示膜型FL在白血病发病机理中可能具有重要作用。
- 居颂光居颂文傅晋翔仇红霞王明元周斌王凤鸣刘彤刘高勤邱玉华张学光
- 关键词：FL转基因细胞U937细胞转基因细胞FL细胞膜型L929细胞
- BCL-10在实验性角膜新生血管发生中的作用和机制
- 背景:生理条件下角膜是无血管的透明组织,但在炎症、化学烧伤、感染等病理状态下,角膜组织的结构和屏障功能受损,导致病变组织的炎症细胞和血管内皮祖细胞浸润,最终引起角膜新生血管形成。研究发现NK细胞具有调节病理性新生血管发生...
- 刘高勤陆培荣
- 关键词：BCL-10新生血管角膜NK细胞巨噬细胞
- 文献传递
- 一氧化氮合成酶及其抑制剂在碱烧伤诱导的角膜新生血管中的作用被引量：6
- 2013年
- 背景 研究发现一氧化氮（NO）及一氧化氮合成酶（NOS）参与新生血管的发生、发展,但其在角膜新生血管（CNV）发生过程中的具体作用机制是眼科界值得关注的问题. 目的 研究NOS及其抑制剂NW-硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME）在实验性CNV发生过程中的作用,并通过体外研究验证NOS及L-NAME对人血管内皮细胞（RECs）血管管腔形成的作用,为眼科新生血管性疾病的防治提供实验依据.方法7～8周龄雄性BALB/c小鼠36只用NaOH滤纸贴附角膜中央的方法构建小鼠左眼CNV模型,然后用随机数字表法将小鼠分为L-NAME干预组和PBS对照组,L-NAME干预组小鼠于造模前1周开始腹腔内注射10 g/LL-NAME 0.5 ml,每周3次,持续3周,而PBS对照组小鼠以同样的方法注射PBS.分别于造模后2、4、7、14 d在裂隙灯显微镜下观察CNV形成情况,用全角膜铺片法检测CD31在CNV中的表达以鉴定CNV面积；采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测2个组小鼠角膜组织中NOSmRNA的表达；采用Western blot法检测人RECs中血管内皮生长因子（VEGF）蛋白的表达；利用体外实验,观察人RECs的管腔形成能力.采用独立样本t检验对2个组小鼠上述各检测指标的结果进行差异比较,分类资料采用X2检验. 结果裂隙灯显微镜下可见小鼠造模后2周CNV生长达高峰,而L-NAME干预组小鼠CNV明显少于PBS对照组.造模后2、4、7 d,L-NAME干预组小鼠角膜中NOS mRNA的相对表达量均明显低于PBS对照组,差异均有统计学意义（t=19.481、22.059、10.961,P＜0.01）.全角膜铺片法检测显示,L-NAME干预组被CD31标记的RECs面积与总面积的比值为0.59 ±0.01,明显小于PBS对照组的0.78±0.10,差异有统计学意义（t=3.078,P＜0.05）.Western blot法检测表明,造模0、2、4、7d,L-NAME干预组人RECs中VEGF蛋白的相对表达量均明显降低,造模后4d、7d两组比较差异均有统计学意义（-7.696、17.953,P＜0.01）.管腔形成实验中,L-NAM
- 刘高勤陈源陈磊肖艳辉陈志刚陆培荣
- 关键词：角膜新生血管一氧化氮合成酶血管内皮生长因子碱烧伤
- 4-1BBL介导的逆向信号对人外周血T细胞体外活化的调节作用被引量：1
- 2006年
- 目的探讨表达于活化T细胞上的4-1BBL分子对T细胞的调节作用及可能机制。方法鼠抗人4-1BBL单克隆抗体1F1加入CD3单抗联合CD28单抗激发的T细胞培养体系。细胞计数分析T细胞的增殖;PI/AnnexinⅤ双染法分析T细胞的凋亡;ELISA法测定培养上清中细胞因子的分泌水平;流式细胞仪分析T细胞的表型。结果单抗1F1能够有效地抑制活化T细胞的体外增殖并诱导其凋亡,同时单抗1F1还可抑制活化T细胞分泌IL-2和IFN-γ及上调T细胞表面CD95和PD-1分子的表达。结论在T细胞活化过程中,活化T细胞表达的4-1BBL分子通过逆向信号抑制其细胞因子的分泌和上调负性调控分子,进而抑制T细胞的过度活化和下调T细胞介导的免疫应答。
- 居颂文居颂光仇红霞王凤鸣王明元胡玉敏刘彤刘高勤张学光
- 关键词：4-1BBL逆向信号共刺激分子T细胞活化
- 人重组IL-17蛋白的表达及其生物学特性的初步分析
- Th1-Th2的经典分类的提出已经有20年了，它为我们深入理解固有免疫和适应性免疫之间的相互联系提供了新的思路和研究模型。然而随着IL-17和IL-12两个家族的细胞因子的发现和研究，这种分类方法逐渐被予以改变：认为机体...
- 刘高勤
- 关键词：IL-17TH17融合蛋白包涵体复性HELA
- 文献传递
- 非小细胞肺癌患者胸腔积液中浸润巨噬细胞趋化因子受体CX3CR1,CCR2和CCR5的表达
- 蒋军红刘高勤陆培荣黄建安
- 白内障术后生物学参数变化及IOL计算公式的准确性研究被引量：1
- 2022年
- 目的:运用新型光学生物测量仪IOL Master 700测量白内障超声乳化手术前后眼部生物学参数的变化,并探讨人工晶状体(IOL)屈光度数计算公式的选择。方法:前瞻性研究。收集2021-01/06在苏州大学附属第一医院就诊的白内障患者52例57眼。术前和术后3mo使用IOL Master 700完成眼轴长度(AL)、前房深度(ACD)、角膜曲率(Km)的测量并分析。对不同IOL公式计算时预留的目标屈光值与术后3mo全自动验光仪实际屈光值结果进行比较并分析。结果:手术前后测量的AL平均值分别为24.20±1.86、24.09±1.86mm,术后AL缩短了0.11mm;ACD值分别为3.08±0.44、4.55±0.36mm(P<0.001),术后ACD加深1.49mm;Km值分别为44.14±1.86、44.14±1.82D(P>0.05)。术前选用Barrett UniversalⅡ公式所测结果的屈光误差最小,其次是HolladayⅡ及SRK/T公式,HolladayⅠ公式所测结果的误差最大(P<0.05)。结论:白内障术后AL缩短以及ACD加深,度数测算时可考虑增加0.1mm的校正因子。IOL屈光度数计算公式中Barrett UniversalⅡ公式预测性最佳,其次是HolladayⅡ及SRK/T公式。
- 陈志刚刘高勤
- 关键词：生物学参数白内障
