余大海
- 作品数：7 被引量：33H指数：3
- 供职机构：北京大学更多>>
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- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 结核分枝杆菌DNA疫苗的免疫原性和保护效率的比较研究被引量：1
- 2005年
- 对结核分枝杆菌两种DNA单价疫苗的免疫应答和保护效果进行了评价和比较.将结核分枝杆菌抗原蛋白MPT70(22kDa)和PstS-3(40kDa)克隆到原核表达载体pET22b中,酶切和测序鉴定正确后转化入E.coli BL21(DE3)PLysS宿主菌株内中,通过诱导表达纯化获得目的蛋白用于DNA疫苗效价鉴定.用真核表达载体pJW4303构建了MPT70,PstS-3(包括信号肽的全基因)两种重组真核质粒(DNA疫苗),进行了酶切鉴定和序列分析, 确定含有正确的读码框.用上述DNA疫苗分别肌注免疫小鼠,三免小鼠后21天MPT70 和PstS-3抗体均达到为1∶12800.三免后21天小鼠的脾脏细胞诱导产生较高水平的MPT70和PstS-3特异性的细胞因子γ-干扰素,浓度分别为16872.82pg/ml和11460.98pg/ml.三次免疫后经静脉强毒攻击,两组DNA疫苗免疫鼠的肺脏和脾脏的载菌数均比阴性对照组少,表明这两种疫苗都能诱导机体产生细胞免疫和体液免疫应答,而且以前者为主.综合各项指标发现,DNA疫苗MPT70要优于PstS-3.
- 顾田园蔡宏田霞余大海朱玉贤
- 关键词：DNA疫苗结核分枝杆菌免疫原性免疫后强毒核质
- DNA疫苗初免-BCG加强免疫法提高小鼠抗结核分枝杆菌感染效率的研究被引量：2
- 2007年
- 对结核分枝杆菌DNA四价疫苗(编码Ag85B,MPT64,MPT70和TB10.4抗原)初发免疫、卡介苗(BCG)加强免疫后小鼠产生免疫应答的能力和抗结核杆菌感染效率进行了分析.攻毒后细菌计数结果显示,DNA初免、BCG加强组肺脏和脾脏载菌数的对数值比阴性对照组下降1.0～1.3(P<0.01),且显著低于DNA四价苗和BCG组(P<0.05).3次免疫后,BCG加强组外周血中CD4+和CD8+T淋巴细胞显著增多(P<0.05);经4种抗原分别刺激,BCG加强组脾细胞产生的抗原特异性IFN-γ和IL-2水平显著高于其他免疫组,其中Ag85B抗原诱导产生的IFN-γ浓度为1250ng/L,IL-2浓度为230ng/L,分别是DNA四价苗组的1.6,1.7倍(P<0.05),是BCG组PPD诱导产生相应细胞因子浓度的2.6倍和2.2倍(P<0.05);此外,BCG加强组肺脏中分泌穿孔素的淋巴细胞数量也显著增加(P<0.05).结果表明,DNA初发免疫、BCG加强免疫法能显著提高小鼠CD4+,CD8+T细胞介导的免疫应答,增强小鼠抗结核杆菌感染能力,是提高结核病疫苗免疫效果的新途径.
- 李敏余大海蔡宏
- 关键词：结核分枝杆菌DNA疫苗BCG疫苗TH1型细胞因子
- 佐剂DDA和MPL对提高结核杆菌组合DNA疫苗免疫效果的比较研究被引量：9
- 2005年
- 编码结核杆菌3种抗原Ag85B,MPT64,MPT83的基因片段插入真核表达载体作为组合疫苗免疫小鼠,DDA和MPL作为佐剂分别提高了此三价苗的免疫原性和免疫保护效果,且相比之下DDA优于MPL.添加DDA后,Ag85B,MPT64,MPT83抗原特异的IFN-γ含量分别为(265.37±79.2)U/ml,(185.31±58.3)U/ml,(108.13±54.4)U/ml,分别比非佐剂组的高16U/ml,45U/ml和2U/ml,与MPL组3种抗原特异性IFN-γ的含量无显著差异.IL-4的含量在各组中无显著差异.攻毒后细菌计数结果显示,添加佐剂的三价苗组小鼠的肺脏和脾脏的载菌量分别比空载体组降低了2￣3个数量级,且佐剂DDA组显著优于佐剂MPL组和未加佐剂组.病理切片结果与载菌量数据相一致,添加佐剂组,特别是DDA组小鼠肺部淋巴细胞相对减少,巨噬细胞增多.因此,DDA作为佐剂能显著提高核酸疫苗的免疫效率,佐剂MPL不能提高结核杆菌多价核酸疫苗的免疫效率.
- 余大海蔡宏朱玉贤
- 关键词：结核分支杆菌佐剂DDAMPL免疫效果
- 牛结核病鉴别诊断的方法研究被引量：12
- 2006年
- 目的构建含结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)tb10.4基因片断的原核表达载体,在E.coli中诱导表达带组氨酸标记的该融合蛋白。分别以TB10.4蛋白,PPD蛋白以及TB10.4与MPT83混合蛋白为抗原,用间接ELISA法鉴别牛结核病。方法PCR法扩增tb10.4基因片段,连接到pET-22b(+)原核表达载体中,将重组子转化到大肠杆菌蛋白酶缺陷型菌株BL21(DE3)/PolysS,用IPTG诱导,进行蛋白表达、纯化。之后将TB10.4,PPD,TB10.4及MPT83混合蛋白作为抗原用间接ELISA法检测牛结核病。结果使用结核杆菌早期分泌蛋白TB10.4作为抗原用间接ELISA方法快速检测牛结核病,并区分BCG免疫的健康牛和感染牛的结果显示灵敏度为23%,没有假阳性反应。结论用PPD作为抗原进行检测灵敏度达到48%,但假阳性率达到21%;用TB10.4与MPT83混合抗原检测时灵敏度下降到6%,假阳性率1%。
- 余大海韦一然蔡宏朱玉贤
- 关键词：牛结核病间接ELISA法
- 结核分枝杆菌四价DNA疫苗免疫原性和保护效率研究被引量：10
- 2005年
- 对结核杆菌四价DNA疫苗的免疫应答和保护效果进行了评价.用编码结核分枝杆菌Ag85B、MPT64、MPT70和PstS-3等4种抗原蛋白的基因分别构建的单价DNA疫苗混合成四价苗免疫小鼠.3次免疫后21天,四种抗原特异性抗体滴度分别达到1:6 400、1:51 200、1:6 400、1:6 400.四种蛋白质均能诱导脾脏细胞产生较高水平的抗原特异性IFN-γ,浓度分别为10 582.14 ng/L、13 635.97 ng/L、14 213.15 ng/L和9 657.35 ng/L.三次免疫后经静脉强毒攻击,四价苗组小鼠肺脏和脾脏的载菌数分别减少到阴性组的1/650和1/130.对肺组织的病理形态特征观察表明,空载体免疫的小鼠肺部严重损伤,肺实质干酪样坏死,坏死结节占肺实质的70%～80%,而四价苗免疫的小鼠,肺组织结构正常,肺泡轮廓清晰.研究首次证实,Ag85B、MPT64、MPT70和PstS-3 4种结核杆菌抗原蛋白编码基因组成的四价DNA疫苗,具有很高的免疫应答水平和保护效率.
- 顾田园蔡宏田霞余大海朱玉贤
- 关键词：结核分枝杆菌抗原蛋白免疫原性
- DDA提高结核杆菌组合DNA疫苗免疫效果的研究被引量：2
- 2006年
- 将编码结核杆菌的三种抗原Ag85B，MPT64，MPT83的基因片段分别插入到真核表达载体中，混合后作为组合疫苗免疫小鼠，DDA作为佐剂提高了三价疫苗的免疫原性和免疫保护效果。添加DDA后Ag85B，MPT64，MPT83抗原特异的IFN-γ的含量分别为（265．37±79．2）U／ml，（185．31±58．3）U／ml，（108．13±54．4）U／ml，分别比非佐剂组高16U／ml，45U／ml，2U／ml。IL-4的含量在各组中相差不多，仅为纳克级。攻毒后细菌计数结果显示，肺脏和脾脏的载菌量在添加佐剂的三价组中降低了三个数量级，都达到了未加佐剂组相应脏器的一半菌量。病理切片显示结果与载菌量一致，添加佐剂组肺部淋巴细胞相对较少，巨噬细胞增多。因此，DDA作为佐剂提高了组合疫苗的免疫效果。
- 余大海田霞蔡宏朱玉贤
- 关键词：结核分支杆菌免疫效果
- 结核杆菌和布鲁氏杆菌多价DNA疫苗的研究
- 结核病和布鲁氏病是严重危害人类健康和畜牧业发展的人畜共患传染病。疫苗是控制结核病和布鲁氏病的有效方法。目前，BCG是预防结核病的唯一疫苗，但其免疫效力不稳定，且对成年人无保护;S19疫苗是在牛布鲁氏病中使用的疫苗，但血清...
- 余大海
- 关键词：结核病免疫效力分子生物学多价DNA疫苗
- 文献传递
