于明懂
- 作品数：24 被引量：53H指数：4
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- DNA甲基转移酶在脓毒症小鼠急性肺损伤中的作用被引量：1
- 2022年
- 目的评价DNA甲基转移酶在脓毒症小鼠急性肺损伤中的作用。方法健康雄性C57BL/6小鼠48只,6~8周龄,体重20~25 g,采用随机数字表法分为4组(n=12):假手术组(Sham组)、假手术+DNA甲基转移酶抑制剂组(Sham+5-Aza组)、脓毒症组(Sepsis组)和脓毒症+DNA甲基转移酶抑制剂组(Sepsis+5-Aza组)。采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制备脓毒症小鼠急性肺损伤模型。于CLP后24 h时处死小鼠取肺组织,提取DNA利用比色法测定全基因组DNA甲基化水平,提取RNA采用实时荧光定量PCR法检测DNA甲基转移酶(DNMTl、DNMT3a、DNMT3b)的mRNA表达,确定肺湿重/干重比值,HE染色观察肺组织病理学结果,采用ELISA法测定IL-6、TNF-α、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、MDA含量、SOD和过氧化氢酶(CAT)活性。结果与Sham组比较,Sepsis组和Sepsis+5-Aza组小鼠CLP后24 h时肺组织全基因组甲基化水平升高,DNMT1和DNMT3a的mRNA表达上调,肺组织病理学损伤评分和肺湿重/干重比值升高,IL-6、TNF-α、HMGB1和MDA含量升高,SOD和CAT活性降低(P<0.05),Sham+5-Aza组上述各指标差异无统计学意义(P>0.05);与Sepsis组比较,Sepsis+5-Aza组小鼠肺组织全基因组甲基化水平降低,DNMT1和DNMT3a的mRNA表达下调,肺组织病理学损伤评分、肺湿重/干重比值、IL-6、TNF-α、HMGB1和MDA含量降低,SOD和CAT活性增加(P<0.05)。结论DNMT1和DNMT3a介导的DNA高甲基化参与了脓毒症小鼠急性肺损伤的过程。
- 李佩于明懂于明懂张英立余剑波
- 关键词：DNA甲基化脓毒症急性肺损伤
- BDNF基因启动子区DNA甲基化在氢气治疗脓毒症相关性脑病中的作用
- 目的脓毒症相关性脑病(sepsis-associated encephalopathy,SAE)是脓毒症中枢神经系统并发症,能造成急性和长期的认知功能障碍,并能显著增加脓毒症患者的死亡率。DNA甲基化是一种表观遗传学修饰...
- 于明懂
- 关键词：DNA甲基化氢气脑源性神经营养因子
- 富氢液对人肾小管上皮细胞缺氧复氧损伤时Akt/Nrf2信号通路的影响
- 2021年
- 目的评价富氢液对人肾小管上皮细胞缺氧复氧损伤时丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)/核因子-E2相关因子2(Nrf2)信号通路的影响。方法体外培养的人肾小管上皮细胞系,以1.5×10^(4)个/ml的密度接种于96孔培养板(200μl/孔)或以2×10^(5)个/ml密度接种于6孔培养板(2 ml/孔),采用随机数字表法分为5组(n=30):对照组(C组)置于常氧恒温培养箱(37℃、5%CO2-21%O2-74%N2)中培养28 h;富氢液组(H组)加入含0.6 mmol/L富氢液的培养基,置于常氧恒温培养箱中孵育28 h;缺氧复氧组(H/R组)置于厌氧恒温培养箱(37℃、5%CO2-1%O2-94%N2)中缺氧24 h,取出后置于常氧恒温培养箱复氧4 h;缺氧复氧+富氢液组(H/R+H组)置于厌氧恒温培养箱中缺氧24 h,取出后加入含0.6 mmol/L富氢液的培养基,置于常氧恒温培养箱中复氧4 h;缺氧复氧+富氢液+Akt抑制剂Uprosertib组(H/R+H+U组)加入终浓度为10μmol/L的Uprosertib孵育1 h,其余处理同H/R+H组。各组细胞处理结束后,采用MTT法测定细胞活力,流式细胞术测定细胞凋亡率,黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性,硫代巴比妥酸法测定MDA含量,Western blot法检测Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、总Nrf2、核Nrf2和活化的caspase-3表达,RT-PCR法检测Nrf2 mRNA表达。结果与C组比较,H/R组和H/R+H组细胞活力和SOD活性下降,细胞凋亡率和MDA含量升高,p-Akt、核Nrf2、总Nrf2、活化的caspase-3和Nrf2 mRNA表达上调(P<0.05);与H/R组比较,H/R+H组细胞活力和SOD活性升高,细胞凋亡率和MDA含量降低,p-Akt、核Nrf2、总Nrf2和Nrf2 mRNA表达上调,活化的caspase-3表达下调(P<0.05);与H/R+H组比较,H/R+H+U组细胞活力和SOD活性下降,细胞凋亡率和MDA含量升高,p-Akt、核Nrf2、总Nrf2和Nrf2 mRNA表达下调,活化的caspase-3表达上调(P<0.05)。结论富氢液减轻人肾小管上皮细胞缺氧复氧损伤的机制与促进Akt/Nrf2信号通路激活,降低氧化应激水平,抑制细胞凋亡有关。
- 杨春梅于明懂陈君王慧星
- 关键词：肾小管蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶
- POCD小鼠海马组织中差异表达miRNA的筛选、靶基因预测和生物信息学分析及其调控机制探讨被引量：4
- 2021年
- 目的采用生物信息学方法分析术后认知功能障碍(POCD)小鼠海马组织中差异表达miRNA(DEMs)及其靶基因(DEGs),并构建POCD小鼠海马组织中差异表达miRNA-mRNA的调控网络图,探讨其机制。方法在GEO数据库中搜索下载POCD小鼠海马组织与正常小鼠海马组织基因表达谱芯片数据GSE95070,采用R软件lim⁃ma函数包筛选出差异表达的miRNA,即DEMs。将DEMs分别输入到miRTarBase、TargetScan、miRDB数据库中,三个数据库中皆存在的靶基因为差异表达的DEMs靶基因,即DEGs。使用R软件中的ggplot2、enrichplot函数包对DEGs进行了基因本体(GO)功能富集分析和KEGG信号通路分析。通过STRING在线工具构建DEGs蛋白互作网络(PPI),将蛋白间相互作用得分>0.4的节点输入到可视化工具Cytoscape软件中,利用cytoHubba插件筛选出节点度值排名前10的节点,即为可能参与小鼠POCD发生发展的枢纽基因。选取枢纽基因及其相应的DEMs,利用Cyto⁃scape软件构建POCD小鼠海马组织中差异表达miRNA-mRNA调控网络图。结果共筛选出19个显著差异表达的DEMs,得到448个DEGs。GO功能富集分析结果显示,DEGs在DNA结合的转录因子激活活性、特异性RNA聚合酶Ⅱ、微小GTP酶结合等分子功能中显著富集,在树突的形成以及调节、促进神经胶质细胞的增殖等生物学过程中显著富集,在突触膜的有机组成成分、细胞边缘以及囊泡运输等细胞组分中显著富集。KEGG信号通路分析结果显示,DEGs在Cushing综合征相关通路、cGMP-PKG信号通路、Hepatitis C信号通路、Apelin信号通路等通路中显著富集。小鼠POCD发生发展的10个枢纽基因分别为Gsk3β、Igf1、Cd34、Ubxn7、Smad2、Smarca4、Stat1、Grb2、Sin3a、Ncam1,相应的6个DEMs分别为mmu-miR-362-3p、mmu-miR-3065-5p、mmu-miR-592-3p、mmu-miR-28a-3p、mmu-miR-181c-5p、mmu-miR-351-5p,成功构建了POCD小鼠海马组织中差异表达miRNA-mRNA调控网络图,其中mmu-miR-362-3p调控Gsk3β�
- 张英立刘乘麟于明懂王莹胡南卢悦淳吕国义
- 关键词：认知功能障碍术后认知功能障碍微小RNA信使RNA
- Nrf2/HO-1信号通路在右美托咪定减轻小胶质细胞氧糖剥夺-复氧复糖损伤中的作用被引量：5
- 2021年
- 目的评价核因子-E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)信号通路在右美托咪定减轻小胶质细胞氧糖剥夺-复氧复糖损伤中的作用。方法BV-2小胶质细胞加入含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基,以1.5×104个/ml的密度接种于96孔培养板(200μl/孔)或以2×105个/ml密度接种于6孔培养板(每孔2 ml),置于37℃、含5%CO_(2)-21%O_(2)-74%N_(2)的正常培养箱中培养。采用随机数字表法分为5组(n=30):正常对照组(C组)、右美托咪定组(D组)、氧糖剥夺/复氧复糖组(OGD/R组)、氧糖剥夺/复氧复糖+右美托咪定组(OGD/R+D组)和氧糖剥夺/复氧复糖+右美托咪定+ML385组(OGD/R+D+ML组)。C组在正常培养箱中继续培养26 h;D组加入终浓度为10μmol/L的右美托咪定孵育2 h,随后在正常培养箱中培养26 h;OGD/R组、OGD/R+D组、OGD/R+D+ML组更换为无糖DMEM培养基,置于37℃、含5%CO_(2)-1%O_(2)-94%N_(2)的培养箱中培养2 h,然后换为含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基,在正常培养箱中培养24 h;OGD/R+D组和OGD/R+D+ML组于氧糖剥夺前2 h时加入终浓度为10μmol/L的右美托咪定,OGD/R+D+ML组于加入右美托咪定前30 min时,加入终浓度为4μmol/L的Nrf2抑制剂ML385。采用MTT法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,ELISA检测上清液TNF-α、IL-6和IL-10的浓度,Western blot法检测细胞核Nrf-2、细胞Nrf-2和HO-1表达,RT-PCR法检测细胞HO-1 mRNA表达。结果与C组比较,OGD/R组和OGD/R+D组细胞活力降低,细胞凋亡率和上清液TNF-α、IL-6、IL-10浓度升高,细胞核Nrf2、细胞Nrf-2、HO-1及其mRNA表达上调(P<0.05),D组上述各指标差异无统计学意义(P>0.05);与OGD/R组比较,OGD/R+D组细胞活力和上清液IL-10浓度升高,细胞凋亡率和上清液TNF-α、IL-6浓度降低,细胞核Nrf2、细胞Nrf2、HO-1及其mRNA表达上调(P<0.05),OGD/R+D+ML组上述差异无统计学意义(P>0.05);与OGD/R+D组比较,OGD/R+D+ML组细胞活力和上清液IL-10浓度降低,细胞凋亡率和上清液TNF
- 杨春梅李佩于明懂高春霖陈君
- 关键词：右美托咪啶小神经胶质细胞NF-E2相关因子2血红素加氧酶-1
- 含左西孟旦的心脏停搏液对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用的实验研究
- 目的：观察含左西孟旦(levosimendan，Levo)的St.Thomas’Ⅱ(STH-2)心脏停搏液对大鼠离体心脏缺血-再灌注损伤(Myocardical ischemia reperfusion injury，M...
- 于明懂
- 关键词：心脏缺血心肌保护左西孟旦实验药理
- 吸入氢气对脓毒症小鼠海马组织DNA甲基化的影响被引量：4
- 2020年
- 目的评价吸入氢气对脓毒症小鼠海马组织的DNA甲基化状态的影响.方法54只健康雄性C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为3组:假手术组(Sham组)、脓毒症组(Sepsis组)和氢气治疗组(Sepsis+H2组),每组18只.Sepsis组和Sepsis+H2组采用盲肠结扎穿孔法(CLP)制备小鼠脓毒症模型,Sepsis+H2组小鼠于手术后1 h和6 h吸入用空气混合的2%氢气1 h,Sham组只开腹不进行盲肠结扎和穿孔.3组小鼠于假手术或CLP后1、3、7 d取小鼠海马组织,比色法测定全基因组DNA甲基化水平;实时定量PCR法检测DNA甲基化转移酶(DNMTs,包括DNMT1、DNMT3a和DNMT3b)的mRNA水平;Western blot法检测DNMT1、DNMT3a和DNMT3b蛋白表达水平.结果与Sham组比较,Sepsis组小鼠在建模后1、3、7 d海马组织全基因组甲基化水平明显下降(P<0.05),DNMT1和DNMT3a的mRNA和蛋白表达水平升高,DNMT3b的mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05);与Sepsis组比较,Sepsis+H2组全基因组甲基化水平升高(P<0.05),DNMT1和DNMT3a的mRNA和蛋白表达水平下降,DNMT3b的mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05).结论吸入氢气可纠正脓毒症小鼠海马组织的DNA甲基化紊乱状态,改善DNA甲基化紊乱状态是氢气治疗脓毒症相关性脑病的重要机制之一.
- 于明懂李佩于泳浩卢悦淳陈会敏王新谢克亮
- 关键词：氢脓毒症DNA甲基化海马
- 右美托咪定对脑缺血再灌注损伤保护作用的研究现状被引量：1
- 2022年
- 脑组织能量储备力低下,代谢率及耗氧率高,所以发生脑缺血后的首要处理方式一般是积极恢复其血供,但其再灌注造成缺血组织的再次损伤是临床面临的重要问题,严重影响患者的生活质量。脑缺血再灌注损伤是一个极其复杂的病理生理过程,近些年来,脑缺血再灌注在围手术期的神经保护已经成为研究热点。右美托咪定作为围手术期常用的镇静药物,是特异性、高选择性的α2肾上腺素能受体激动剂,主要用于重症监护室和手术患者的镇痛和镇静,具有维持血流动力学稳定的优势。相关研究已证实其对脑缺血再灌注所致的脑损伤具有神经保护作用。现对脑缺血再灌注的发病机制以及国内外右美托咪定对脑缺血再灌注损伤保护作用机制研究现状进行总结,为临床研究提供参考。
- 杨春梅于明懂
- 关键词：脑缺血再灌注自噬炎症氧化应激凋亡
- 基于RNA-seq的脓毒症相关性脑病小鼠海马转录组分析及竞争性内源性RNA调控网络的构建
- 2023年
- 目的采用转录组测序技术(RNA-seq)筛选脓毒症相关性脑病(SAE)小鼠海马差异表达的长链非编码RNA(lncRNA)及mRNA,构建竞争性内源性RNA(ceRNA)调控网络。方法清洁级健康雄性C57BL/6小鼠10只,6~8周龄,体质量20~25 g,采用随机数字表法分为2组(n=5):假手术组(Sham组)和脓毒症组(Sepsis组)。Sepsis组采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制备小鼠脓毒症模型,Sham组只开腹不进行盲肠结扎和穿孔。分别于术前1 d及术后3 d时行Morris水迷宫实验和条件恐惧实验检测小鼠认知功能。随后Sham组随机处死3只小鼠,Sepsis组处死认知功能测试最差的3只小鼠,取海马组织,通过BGISEQ-500平台行转录组测序,得到差异表达的mRNA和lncRNA,测序结果通过深圳华大基因科技服务有限公司提供的Dr.Tom平台行可视化分析,利用Cytoscape软件构建ceRNA调控网络。结果与Sham组比较,Sepsis组逃避潜伏期延长,靶向限停留时间百分比和僵直时间百分比降低(P<0.05)。转录组数据分析共获得差异表达的lncRNA 62个,其中45个lncRNA表达上调,17个lncRNA表达下调;差异表达的mRNA 282个,其中173个mRNA表达上调,109个mRNA表达下调。对差异表达的mRNA进行生物学过程的GO富集分析,结果显示差异表达的mRNA参与了记忆、学习或记忆、炎症应答、衰老相关行为减退的调空、突触可塑性调节等生物学过程;对差异表达的mRNA进行KEGG通路富集分析,结果显示差异表达的mRNA富集于IL-17信号通路、TNF信号通路、NF-κB信号通路等。对差异表达的mRNA进行KDA分析,结果示Ch25h、Il6ra、Lcn2、Sgk1、Nr4a3、Osm、Saa3、Ccl7、Sqle、Dhcr24为SAE的关键基因。基于9个lncRNA、28个mRNA和134个miRNA成功构建了SAE小鼠海马的ceRNA调控网络。结论RNA-seq结果分析发现Ch25h、Il6ra、Lcn2、Sgk1、Nr4a3、Osm、Saa3、Ccl7、Sqle、Dhcr2410个mRNA以及Rian、Gm35874、Gm34347等lncRNA是调控小鼠SAE的关键基因;同时成功构建了SAE小鼠海马
- 张英立于明懂刘乘麟李佩王慧星张婧魏立国于泳浩谢克亮卢悦淳
- 关键词：基因表达谱RNA
- 基于超声影像的神经麻醉穿刺辅助定位方法
- 本发明公开了基于超声影像的神经麻醉穿刺辅助定位方法，具体涉及超声影像技术领域，包括以下步骤：步骤一、获取目标麻醉神经超声影像集；步骤二、构建目标麻醉神经的初始立体图像，进行活动监测，更新立体图像；步骤三、确定穿刺角度和路...
- 于明懂李佩刘乘麟张英立
