金丹婷
- 作品数：28 被引量：73H指数：5
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家中医药管理局基金资助项目国家中医药管理局课题更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- JTV1对K562细胞增殖和凋亡的影响及其机制被引量：4
- 2011年
- 目的观察上调JTV1基因的表达对人白血病K562细胞系增殖与凋亡的影响并探讨其机制。方法将携带有JTV1基因的pcDNA3.1-JTV1载体转染人K562细胞作为阳性转染组,转染pcDNA3.1空载体作为空载体转染组,未转染的K562细胞为未转染组。通过集落形成实验检测各组K562细胞的增殖能力,采用流式细胞术与Annexin-PI双染色结合分析细胞周期和细胞凋亡率,同时采用RT-PCR法检测JTV1基因及凋亡相关基因Bcl-2、Bax、C-myc mRNA水平的变化,采用Western blotting检测基因JTV1及凋亡相关基因Bcl-2、Bax、C-myc蛋白水平的变化。结果集落形成实验结果显示上调JTV1基因表达后K562细胞的增殖能力明显降低。流式细胞术与Annexin-PI双染色检测结果显示,与空载体转染组及未转染组相比,阳性转染组K562细胞的G期细胞比例明显升高(P<0.05);阳性转染组中Bax基因的mRNA水平和蛋白水平较空载体转染组及未转染组均明显上升,而Bcl-2基因和C-myc基因的mRNA水平和蛋白水平则明显下调(P<0.05)。结论 JTV1基因过表达可能通过抑制基因Bcl-2和C-myc的表达增强基因Bax的表达,从而抑制K562细胞系的增殖并促进其凋亡。
- 吴燕刘北忠王翀钟梁朱丹王春光金丹婷高艳军黎亮
- 关键词：基因基因BCL-2基因C-MYC基因BAXK562细胞
- 大黄素诱导白血病K562细胞凋亡的实验研究被引量：8
- 2009年
- 目的:探讨大黄素对人白血病K562细胞的增殖抑制与诱导凋亡作用。方法:采用MTT法检测大黄素对K562细胞的增殖抑制作用;通过Wight-Giemsa染色(W-G染色),在普通光镜下观察细胞的形态学变化;运用AnnexinV/PI双标记法检测大黄素对K562细胞的凋亡效应;采用流式细胞技术检测细胞周期变化与凋亡情况;通过比色法检测Caspase-3、8、9的相对活性,分析大黄素诱导K562细胞凋亡的信号途径。结果:大黄素能显著抑制K562细胞的增殖,作用24、48、72h后的半数抑制率浓度分别为80、50、40μmol/L;处理组细胞在普通光镜下可见典型的凋亡形态学改变;AnnexinV/PI双标记法检测到K562细胞在大黄素的诱导下出现早期凋亡并呈剂量依赖性(P<0.01);流式细胞仪结果分析发现,处理组的K562细胞被阻滞于G0/G1期,与对照组相比,凋亡率明显升高并呈现剂量依赖性(P<0.01);大黄素可触发Caspase-3、8、9的活性增高(P<0.01)。结论:大黄素能有效地抑制K562细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制和Caspase信号途径的活化有关。
- 金丹婷刘北忠刘畅王春光王翀王东生郝坡钟梁
- 关键词：大黄素K562细胞细胞凋亡半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶
- 大黄素及其三甲氧基衍生物抑制K562细胞增殖及诱导其凋亡的机制研究
- 目的:
1.观察大黄素对K562细胞增殖和凋亡的影响。探讨大黄素抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡的分子机制。
2.通过甲基化反应对大黄素进行结构改造,并对新衍生物的抗肿瘤活性及其作用的分子机制进行...
- 金丹婷
- 关键词：大黄素K562细胞增殖凋亡
- 文献传递
- 地塞米松对K562细胞增殖抑制作用及诱导凋亡机制的研究被引量：1
- 2008年
- 目的:研究地塞米松对K562细胞的增殖抑制作用及诱导细胞凋亡的机制。方法:用不同浓度的地塞米松对K562细胞进行处理,检测细胞增殖抑制率,观察细胞凋亡的形态学变化,测定细胞端粒酶活性,Fas表达及NO产生情况。结果:地塞米松能抑制K562细胞的增殖,降低端粒酶活性,使Fas表达上调,诱导细胞凋亡。但对NO的生成不具有显著性差异。结论:地塞米松可能通过抑制端粒酶的活性而诱导K562细胞的凋亡。同时,Fas也可能参与了凋亡的调节。
- 刘畅金丹婷钟梁刘北忠王东生郝坡王翀王春光
- 关键词：地塞米松凋亡端粒酶K562细胞
- 抑制JTV1基因表达对大黄素引起的K562细胞凋亡的影响及其机制被引量：4
- 2011年
- 目的探讨抑制JTV1基因表达对大黄素引起的人白血病K562细胞系凋亡的影响及其机制。方法将pGene-Sil-1-JTV1-1.1 siRNA重组质粒、pGeneSil-1-N.1阴性对照质粒及pGeneSil-1空载体分别转染人K562细胞,通过集落形成试验检测细胞的增殖能力;各组转染K562细胞经80μmol/L大黄素处理后,流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡率,RT-PCR法检测细胞中凋亡相关基因Bcl-2、Bax、C-myc转录水平的变化,Western blot法检测Bcl-2、Bax、C-myc翻译水平的变化。结果抑制JTV1基因的表达后,K562细胞的增殖能力明显提高;抑制JTV1基因表达可使经80μmol/L大黄素处理的K562细胞G1期细胞比例下降,并减轻大黄素引起的细胞凋亡,同时,细胞Bax基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平均明显下降,而Bcl-2基因和C-myc基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平则明显上调。结论抑制JTV1基因表达可能通过上调Bcl-2和C-myc基因的表达,下调Bax基因的表达,促进K562细胞的增殖,并阻止细胞凋亡。
- 吴燕刘北忠王翀朱丹王春光金丹婷高艳军黎亮
- 关键词：K562细胞细胞凋亡BCL-2基因C-MYC基因BAX基因
- 大黄素三甲氧基衍生物合成及体外抗肿瘤活性试验被引量：4
- 2010年
- 目的:以天然存在的大黄素为原料合成了甲基化衍生物三甲氧基大黄素,并进行体外抗肿瘤活性的研究。方法:利用硫酸二甲酯/丙酮甲基化组合合成目标化合物1,3,8-三甲氧基-6-甲基蒽醌;通过常规方法,对其理化性质进行鉴定。采用HPLC及ESI-MS对其结构进行表征;通过MTT比色法与流式细胞术检测其对K562细胞增殖及细胞周期分布的影响。结果:三甲氧基大黄素为淡黄色粉末,mp:226～227℃,溶于氯仿等有机溶剂。其结构经HPLC及ESI-MS检测得到确证;浓度依赖性地抑制K562细胞的增殖,并使G0/G1期的细胞比例增加。结论:以大黄素为原料,成功合成了其新的衍生物。三甲氧基大黄素具有抑制K562细胞增殖及阻滞细胞周期由G0/G1期向S期移行的抗肿瘤活性。
- 金丹婷钟梁刘北忠袁佩刘畅王翀王春光朱丹吴燕
- 关键词：大黄素抗肿瘤活性
- 带核定位信号的RARα与谷氨酸氨连接酶蛋白相互作用的胞内外验证被引量：4
- 2010年
- 目的通过胞内外实验验证谷氨酸氨连接酶(GLUL)与带有核定位信号的维甲酸受体α(NLS-RARα)之间的相互作用。方法将表达GLUL靶蛋白和NLS-RARα诱饵蛋白的两种重组表达质粒共同转化入AH109酵母菌,采用一对一的酵母双杂交技术验证它们在活细胞内的相互作用;通过构建GLUL及NLS-RARα蛋白标签融合表达载体,共转染至人胚肾HEK293细胞,利用免疫共沉淀技术在细胞外验证它们之间的相互作用。结果 GLUL靶蛋白和NLS-RARα诱饵蛋白质粒共转化AH109酵母菌后,可见蓝色的阳性克隆;GLUL蛋白及NLS-RARα标签融合表达载体构建成功,共同转染至HEK293细胞,采用抗HA多克隆抗体免疫沉淀HA-NLS-RARα相互作用蛋白复合物后,抗c-Myc单克隆抗体免疫印迹检测,检测到GLUL-cMyc蛋白。结论采用酵母双杂交和免疫共沉淀技术成功地在胞内外验证了GLUL与NLS-RARα之间存在特异性的相互作用。
- 吴燕刘北忠王翀钟梁朱丹王春光金丹婷
- 关键词：维甲酸受体Α核定位信号蛋白质相互作用双杂交系统技术免疫共沉淀
- 大黄素诱导白血病K562细胞凋亡及对Caspase-3基因表达的影响被引量：5
- 2009年
- 目的:探讨大黄素对人白血病K562细胞的增殖抑制与诱导凋亡作用.方法:采用四唑蓝比色试验(MTT)检测大黄素对K562细胞的增殖抑制作用;通过电子显微镜观察细胞的形态学变化;运用原位缺口末端标记技术检测大黄素对K562细胞的凋亡效应;采用流式细胞技术检测细胞周期变化与凋亡情况;通过比色法检测Caspase-3的相对活性,RT-PCR检测细胞内凋亡相关基因Caspase-3的转录水平.结果:大黄素能显著抑制K562细胞的增殖,作用24,72 h后的半数抑制率浓度分别为80,40μmol/L;处理组细胞可见典型的凋亡形态学改变;TUNEL法检测到K562细胞在大黄素的诱导下出现凋亡;流式细胞仪结果分析发现,处理组的K562细胞被阻滞于G0/G1期,与对照组相比,凋亡率明显升高并呈现时间-剂量依赖性(P<0.01);大黄素可触发Caspase-3的活性增高(P<0.01),并呈现剂量依赖性;RT-PCR结果显示,Caspase-3mRNA表达上调.结论:大黄素能有效地抑制K562细胞的增殖并诱导其凋亡,可能与Caspase-3活化有关.
- 金丹婷刘北忠刘畅王春光王翀王东生郝坡钟梁
- 关键词：大黄素K562细胞白血病细胞凋亡半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶
- 糖皮质激素受体结合域诱饵表达载体的构建及鉴定
- 2008年
- 目的构建糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)结合域的诱饵表达载体。方法RT-PCR扩增GR结合域,克隆入pMD18-T,测序正确后,再亚克隆入诱饵载体pGBKT7中,再把构建好的诱饵载体pGBKT7-GR转化到酵母AH109细胞中,并用Western blot分析诱饵蛋白的表达情况,同时检测诱饵蛋白的毒性和自激活作用。结果成功扩增了GR结合域,并分别成功克隆到pMD18-T和pGBKT7中,测序结果正确。诱饵载体成功转化到酵母AH109细胞中,无毒性和自激活作用,Western blot分析结果也证实了酵母细胞高表达诱饵蛋白。结论成功构建了GR结合域的酵母诱饵表达载体。
- 郝坡刘北忠欧阳峰王东生刘畅钟梁金丹婷王翀
- 关键词：诱饵载体诱饵蛋白
- 人HL-60细胞GR-αLBD诱饵表达载体的构建和鉴定
- 2008年
- 目的:构建糖皮质激素(Glucocorticoid,GC)受体α配体结合域(GRα-LBD)的诱饵表达载体,为小分子配体酵母三杂交系统的建立奠定基础。方法:RT-PCR扩增HL-60细胞的GRα-LBD,克隆入诱饵载体pGBKT7中,测序正确后,再把构建好的诱饵载体pGBKT7-GRα-LBD转化到酵母AH109细胞中,提取酵母蛋白,并用Western blot分析诱饵蛋白的表达情况。同时检测诱饵蛋白的毒性和自激活作用。结果:成功扩增了GRα-LBD,并成功亚克隆到pGBKT7中,测序结果正确。诱饵载体成功转化到酵母AH109细胞中,无毒性和自激活作用,Western blot分析也证实了酵母细胞高表达诱饵蛋白。结论:成功构建了GRα-LBD酵母诱饵表达载体,为建立小分子配体酵母三杂交系统奠定了基础。
- 钟梁郝坡刘北忠王东生刘畅金丹婷王翀王春光
- 关键词：HL-60诱饵载体诱饵蛋白
