董婉维
- 作品数：58 被引量：168H指数：8
- 供职机构：中国医科大学实验动物部更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省科学技术计划项目国家科技部专项基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学文化科学更多>>
- 胚胎冷冻技术应用于抗菌肽转基因小鼠的保种传代被引量：1
- 2007年
- 目的研究胚胎冷冻在抗菌肽转基因FVB小鼠保种传代中的应用。方法对6~8周正常雌性FVB小鼠进行超排分别与雄性杂合子抗菌肽转基因FVB小鼠交配，收集2-cell胚胎，进行胚胎冷冻。1周后进行胚胎复苏移植，通过PCR方法对仔代鉴定。结果冻存胚胎140枚，复苏获得存活胚胎98枚，移植85枚，产仔38只，获得阳性后代12只。结论通过胚胎冷冻技术保种及复苏移植技术可对抗菌肽转基因小鼠进行传代。
- 周生来董婉维郑志红杨葳张梅英史晓萍王禄增
- 关键词：小鼠超排卵胚胎冷冻胚胎移植
- 富氢液对脓毒血症大鼠肠黏膜损伤及TLR4/Myd88/NF-κB信号分子的影响被引量：6
- 2017年
- 目的探讨富氢液(HRS)对脓毒血症大鼠肠黏膜损伤及其对TLR4/Myd88/NF-κB信号通路表达的影响。方法 SD大鼠30只,随机分为假手术组(sham组)、脓毒症组(SEP组)和富氢液处理组(C组),每组10只;Sham组仅开腹,暴露盲肠,C组和SEP组行盲肠结扎穿孔术,再分别静脉给予富氢水和等量生理盐水;三组均于模型建立后4h处死大鼠,观察小肠组织病理学结果;ELISA检测血浆中肠脂肪酸结合蛋白(I-FABP)、D-乳酸和炎症因子TNF-α、IL-6、IL-10浓度;Western blot检测肠组织TLR4、Myd88和NF-κB表达。结果富氢液可以减轻脓毒血症大鼠肠黏膜损伤,降低血浆中I-FABP、D-乳酸含量,降低炎症因子TNF-α、IL-6表达,促进IL-10升高(P<0.05),抑制肠组织中TLR4、Myd88、NF-κB表达(P<0.05)。结论富氢液对脓毒血症大鼠肠黏膜屏障有保护作用,可能与TLR4/Myd88/NF-κB信号通路有关。
- 陈克研董婉维
- 关键词：SD大鼠
- Wistar大鼠L-蛋氨酸灌胃后血脂变化观察被引量：2
- 2002年
- 目的 应用普通级Wistar雄性大鼠灌胃给药L 蛋氨酸 (L met)后对其血脂变化进行了研究。方法 模型实验组给药 (L met)剂量分别为 2 30mg 只、45 0mg 只 ,持续给药时间为 8周 ,每隔 7d对模型组动物进行血清总胆固醇 (TC)、甘油三脂 (TG)、低密度脂蛋白 (LDL C)及载脂蛋白B(apoB)检测。结果 各给药组随着服用L 蛋氨酸时间的增加 ,TC、TG、LDL C、apoB值基本呈上升趋势 ,且实验组血清中各血脂检测平均值与对照组相比差异有显著或极显著性 (P <0 0 5或P <0 0 1)。结论 Wistar大鼠服用L
- 王禄增张梅英季勇董婉维
- 关键词：WISTAR大鼠血脂灌胃高脂血症动物模型
- 富氢液对脓毒血症大鼠肠黏膜屏障保护作用及机制研究被引量：2
- 2016年
- 目的探讨富氢液对脓毒血症大鼠肠黏膜屏障的影响及其可能机制。方法清洁级SD大鼠30只,随机分为假手术组(sham组)、脓毒血症组(SEP组)及富氢液处理组(C组),每组10只。sham组仅开腹,显露盲肠;C组和SEP组行盲肠结扎穿孔术,再分别静脉给予富氢液和等量生理盐水。3组大鼠均于模型建立4 h后处死,观察小肠组织病理学结果;酶联免疫吸附法(ELISA)检测肠脂肪酸结合蛋白(I-FABP)、D-乳酸、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)浓度;蛋白质印迹(Western-blot)法检测B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bax、Caspase-3蛋白表达水平。结果光镜下sham组未出现病理损伤,SEP组损伤较重,C组损伤较轻。与sham组比较,SEP组I-FABP、D-乳酸升高[(817.12±50.39)ng/ml比(378.54±40.50)ng/ml;(513.84±42.91)ng/ml比(329.98±38.11)ng/ml,P<0.05]。与SEP组比较,C组I-FABP、D-乳酸降低[(548.92±42.19)ng/ml比(817.12±50.39)ng/ml;(437.89±36.12)ng/ml比(513.84±42.91)ng/ml,P<0.05]。与sham组比较,SEP组TNF-α、IL-6、IL-10升高[(196.51±30.31)ng/ml比(75.54±10.21)ng/ml;(68.69±3.39)ng/ml比(20.97±2.38)ng/ml;(149.61±20.21)ng/ml比(80.69±13.51)ng/ml,P<0.05];与SEP组比较,C组TNF-α、IL-6降低,IL-10升高[(118.47±10.14)ng/ml比(196.51±30.31)ng/ml;(45.36±5.14)ng/ml比(68.69±3.39)ng/ml;(178.52±26.31)ng/ml比(149.61±20.21)ng/ml,P<0.05]。与sham组比较,SEP组Bcl-2蛋白表达升高,Bax与Caspase-3降低(P<0.05);与SEP组比较,C组Bcl-2蛋白表达降低,Bax与Caspase-3升高(P<0.05)。结论富氢液对脓毒血症大鼠肠黏膜屏障有保护作用,其机制与抑制凋亡相关因子有关。
- 陈克研董婉维郑志红
- 关键词：脓毒血症肠黏膜屏障细胞凋亡
- 5-脂氧化酶转基因小鼠表型初步研究
- 2015年
- 目的建立5-脂氧化酶（5-LO）高表达转基因小鼠模型，为动脉粥样硬化（AS）发病分子机制的研究提供有应用价值的动物模型。方法对5-LO转基因及正常对照小鼠分别选用RT—PCR、免疫组织化学、血脂、血压监测等方法进行分析实验。结果5-LO及大鼠5-脂氧合酶激活蛋白（FLAP）免疫组织化学实验结果显示，在肾和肺中5-LO及FLAP的表达，转基因小鼠高于正常对照组小鼠：RT—PCR实验结果显示，转基因小鼠与正常对照小鼠比较在骨髓细胞、腹腔细胞、脾脏、肾脏中白三烯介质及其受体均有不同程度的高表达。其中，两种小鼠的腹腔细胞和骨髓细胞中白三烯A4（LTA4）、白三烯B4（LTB4）和半胱酰胺-白三烯受体2（Cys—LTR2）的表达存在差异（P〈0．05），脾和肾脏中LTB4、白三烯C4（LTC4）及Cys—LTR2的表达存在差异（P〈0．05），肾脏中半胱酰胺-白三烯受体1（Cys-LTR1）的表达存在差异（P〈0．05）。C反应蛋白（CRP）、白介素-1β（IL-1β）、血小板衍生因子（PDGF）、坏死因子-κB（NF-κB）等细胞因子检测结果显示，在肾组织中转基因小鼠的各项指标显著高于正常对照小鼠（P〈0．05）；血压测定结果显示，转基因小鼠高于正常对照小鼠（P〈0．05）；血脂检测结果显示，两种小鼠未见明显差异（P〉0．05）。结论成功建立5-LO高表达转基因小鼠模型。
- 张梅英杨葳吴红联董婉维周生来于洋王惟郭晓冲郑志红
- 关键词：转基因小鼠
- eNOS基因敲除大鼠模型的建立及表型初步研究
- 2015年
- 目的建立内皮型一氧化氮合酶（eNOS）基因敲除大鼠模型。方法利用锌指核酸酶（ZFN）技术，通过显微注射的方法将编码eNOS特异性锌指酶的mRNA注入SD大鼠受精卵并移植到同期受孕的SD受体母鼠输卵管内。出生后仔鼠用PCR产物测序的方法鉴定基因型。对敲除大鼠进行外观观察，HE染色分析组织结构形态。通过Westernblot分析敲除大鼠模型的心脏和肾脏组织中eNOS的表达情况。测量8～16周大鼠体质量，分析eNOS基因敲除对体质量的影响。采用尾套法测量大鼠心率、血压、收缩压和舒张压，比较与野生型大鼠的差异。结果通过显微注射方法共注射441枚受精卵，存活365枚，分别移入12只SD大鼠输卵管，共产出23只F0代大鼠。PCR产物测序分析获得4只阳性原代大鼠，对8号大鼠筛选获得纯合子。阳性纯合子大鼠表现为肢体缺损，HE染色显示动脉血管结构形态异常。Westernblot结果显示，eNOS敲除大鼠的心脏和肾脏组织中不表达eNOS蛋白。敲除大鼠的体质量明显低于野生型大鼠，体质量增长幅度慢。血压、收缩压、舒张压均高于野生型SD大鼠，有极显著差异（P〈0．01）。eNOS敲除雌鼠心率低于野生型SD雌鼠（P〈0．05）。eNOS敲除雄鼠心率与野生型SD雄鼠相比无统计学差异。结论成功建立eNOS基因敲除大鼠模型，该模型或可成为高血压疾病研究的理想动物模型。
- 杨葳周生来董婉维王惟于洋郭晓冲张婀娜王宏宇郑志红
- 关键词：基因敲除高血压
- 金黄仓鼠Apoa5基因表达载体的构建及在不同组织器官中的差异表达
- 2015年
- 目的构建金黄仑鼠载脂蛋白A5（Apoa5）基因表达载体以及在不同组织中的表达差异分析，为深入研究Apoa5基因在金黄仓鼠不同组织中功能奠定基础。方法提取金黄仓鼠肝脏组织总RNA，采用RT—PCR方法对金黄仓鼠Apoa5基因的cDNA进行克隆，构建Apoa5基因表达载体并将其转染293T细胞，分别采用RT—PCR和Westernblot方法检测mRNA及蛋白质表达水平。采用荧光定量PCR检测并分析Apoa5mRNA在8个组织中的表达量。结果经PCR检测鉴定，Apoa5基因表达载体构建成功，经测序分析金黄仓鼠Apoa5基因cDNA全长1243bp，编码366个氨基酸，与人、大鼠、小鼠等物种比对，核苷酸和氨基酸序列均具有较高的同源性，金黄仓鼠与人、大鼠、小鼠的氨基酸同源性分别为75％、84％、84％。转染293T细胞48h后，RT—PCR和Westernblot结果表明，Apoa5基因在mRNA和蛋白质水平都有表达。荧光定量PCR结果显示，Apoa5mRNA在肝脏表达量最高，在脑和睾丸中中度表达，在心、脾脏、肺、肾、卵巢组织中低度表达。结论成功构建Apoa5基因表达载体并分析其在不同组织中的表达差异，为制备Apoa5转基因金黄仓鼠动物模型以及研究Apoa5基因在金黄仓鼠脂类代谢中的功能奠定基础。
- 董婉维张婀娜郭晓冲魏政立杨葳周生来赵文郑志红
- 关键词：金黄仓鼠基因表达
- 磁小体介导制备转基因猪模型
- 2015年
- 目的以磁小体（BMP）和聚乙烯亚胺（PEI）为载体，通过睾丸注射精子介导法建立转基因猪模型。方法将实验室保存的脂蛋白磷脂酶A2（Lp．PLA2）绿色荧光蛋白（GFP）质粒与BMP和PEI混匀，制备BMP—PEI-PLA2-GFP混合物，采用睾丸多点注射法接种巴马小型猪，于接种后第2周、4周、6周至第20周采集精液，分别用RT—PCR和免疫荧光鉴定外源基因的表达情况；取阳性精液，对母猪实施人工授精；PCR及RT—PCR对所产仔猪进行鉴定。结果精液中GFP基因于接种后第4周首现并持续至第16周；荧光显微镜检查可观察到GFP蛋白主要表达于精子项体后区及精子尾颈部；经人工授精所产21头仔猪中，9头猪用PCR可检测GFP片段，用RT—PCR检测PLA2表达，该9头猪的表达量明显高于其它猪，总阳性率达42．86％。结论BMP和PEI结合可作为良好的携带外源基因的非病毒性载体，用该载体通过精子介导法可以达到迅速制备转基因猪的目的，其成本低、方法简单、便捷。
- 陈克研陈振文董婉维郑志红
- 关键词：转基因
- 应用Dicer1转基因小鼠建立黑色素瘤模型的研究
- 2015年
- 目的应用D妇r1（编码蛋白属于RNA酶Ⅲ家族）转基因小鼠建立黑色素瘤模型。方法将小鼠黑色素瘤细胞株分别移植于Dicer1转基因鼠和C57BL／6J小鼠前肢腋下，观察两种小鼠的荷瘤情况，包括移植瘤生长情况、移植瘤生长曲线。结果与C57BL／6J小鼠组肿瘤比较，Dicer1转基因小鼠组的肿瘤成瘤时间短、肿瘤生长速度快、肿瘤体A（P〈0．05）。结论应用Dicer1转基因小鼠建立了黑色素瘤模型，结果显示Dicer1基因对黑色素瘤荷瘤有明显影响。
- 李兆阳姜川郭晓冲杨葳董婉维郑志红
- 关键词：转基因小鼠黑色素瘤
- 大／小鼠组织DNA两种提取方法的比较被引量：1
- 2015年
- 目的获取质量稳定的基因组DNA，快速鉴定模型动物基因型。方法以鼠尾组织为实验材料，采用苯酚／氯仿法和改良煮沸法提取鼠基因组DNA；分别用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量，采用PCR检测两种方法获得DNA的扩增效果。结果酚／氯仿提取法提取的基因组DNA质量优于改良煮沸法，但两种方法获得的DNA模板均能成功应用PCR扩增进行基因型鉴定，且改良煮沸法DNA提取具有无毒、简单、高效、便捷的优点。结论大批量转基因大／小鼠基因型鉴定可以优先选择改良煮沸法提取基因组DNA。
- 陈雪婷郎雪楠李兆阳张婀娜赵文董婉维周生来张梅英郑志红
- 关键词：DNA提取PCR基因型鉴定
