田泽维
- 作品数：9 被引量：23H指数：3
- 供职机构：解放军第458医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金军队医药卫生科研基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HBc与HBV多表位复合基因在肝癌细胞中的转染与表达被引量：1
- 2003年
- 目的观察HBc与HBV多表位复合基因在肝癌细胞株nepG2细胞内表达情况。方法将构建的HBc与HBV多表位复合基因真核表达质粒pHBcMep以Lipofectamine介导转染HepG2细胞,通过间接免疫荧光、Western-blot检测表达产物。结果经G418筛选的阳性转染细胞经间接免疫荧光染色后在紫外光激发时发出明显的荧光,而未转染质粒或转染pcDNA3.1的HepG2细胞则无明显荧光。Western-hot结果显示表达产物约为33kDa,并能与抗preS2多抗特异性结合。结论HBc与HBV多表位复合基因在肝癌细胞内获得正确表达。
- 田泽维董文其刘朝霞李明黄建生
- 关键词：HBCHBV肝癌转染
- HBV多表位复合基因在NS-1细胞的表达
- 2003年
- 目的 研究HBc颗粒为呈现载体的HBV多表位复合基因在哺乳动物细胞NS - 1内的表达。方法 PCR扩增HBc 1～ 72aa及 93～ 1 83aa编码序列并合成HBV多表位复合基因 ,定向克隆至pcDNA3 .1 (+)。经双酶切及核苷酸序列测定等方法筛选阳性克隆。阳性质粒以Lipofectamine介导转染NS - 1细胞 ,通过ELISA及间接免疫荧光等方法检测细胞表达产物。结果 双酶切及测序结果证实阳性质粒正确克隆了约 890bp的HBc与HBV多表位复合基因的杂合基因。重组子成功转染NS - 1细胞并表达HBc-Mep融合蛋白。 结论 HBc颗粒为呈现载体的HBV多表位复合基因在哺乳动物细胞NS - 1内正确表达目的蛋白。为研究pHBc -Mep作为DNA疫苗的免疫活性奠定基础。
- 田泽维董文其王萍吴英松李林海李明黄建生
- 关键词：HBVHBC细胞转染CELL
- 慢性乙型肝炎基因治疗若干进展被引量：1
- 2005年
- 基因治疗是极具潜力的慢性乙型肝炎治疗策略。具体包括:DNA疫苗、核酶、RNA干扰等。
- 邵亚明罗发兴田泽维陈光明杨富强
- 关键词：慢性乙型肝炎基因治疗
- 恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶的表达及免疫活性鉴定被引量：3
- 2002年
- 目的在大肠杆菌中表达恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶(GDH)与谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白,测定重组蛋白的免疫活性。方法采用PCR方法特异性扩增恶性疟原虫(海南株)GDH基因,双酶切后克隆入pGEX-4T-1载体中进行诱导表达,重组蛋白纯化后免疫小鼠制备特异性血清,并用琼脂双向扩散法检测效价,ELISA、Western blotting检测重组抗原的免疫活性。结果获到了重组表达的抗原蛋白,表达产物能与鼠抗恶性疟原虫血清发生特异反应,并能诱导小鼠产生特异性体液免疫应答,免疫琼脂扩散法检测抗体滴度为1∶16。结论恶性疟原虫GDH在大肠杆菌中获得高效表达且表达产物具有良好的抗原性。
- 李林海李明吴英松王萍田泽维
- 关键词：疟原虫恶性谷氨酸脱氢酶免疫活性
- 稳定表达含HBV多表位短肽的杂合HBc颗粒的重组NS-1细胞株的筛选与鉴定被引量：2
- 2003年
- 目的建立稳定表达含HBV多表位短肽的杂合HBc颗粒的重组NS-1细胞株。方法将以HBV多表位复合基因取代脊区基因的杂合HBc真核表达质粒转染NS-1细胞,经G418及亚克隆筛选高表达阳性细胞株,并以RT-PCR、ELISA、间接免疫荧光及Western blotting等方法检测、鉴定重组细胞表达产物。结果筛选所得稳定表达细胞株经RT-PCR、ELISA、间接免疫荧光及Western blotting等方法检测均呈阳性反应,而阴性对照及空白对照未出现相应阳性反应。结论筛选获得稳定表达含HBV多表位短肽的杂合HBc颗粒的重组细胞株,命名为NS/HBc-Mep。为建立HBc-Mep特异的cELISA及CTL活性测定等实验方法提供可靠的靶细胞。
- 田泽维董文其刘朝霞
- 关键词：乙型肝炎病毒核心抗原
- 疟疾诊断靶抗原的研究进展被引量：10
- 2003年
- 李林海田泽维吴英松李明
- 关键词：疟疾
- HCVC区与HBc融合蛋白在大肠杆菌中表达及鉴定
- 2003年
- 目的HCVC119与HBc融合蛋白在大肠杆菌中的表达与鉴定。方法PCR扩增HCVC1～119编码序列并取代HBc脊区基因,杂合HBc基因定向克隆至pET28b+NheⅠ/XhoⅠ位点,经双酶切及核酸序列测定筛选、鉴定阳性克隆。工程菌BL21(RIL)-pET28-BCc经IPTG诱导后,10%SDS-PAGE电泳及Westernblot检测、鉴定目的蛋白。结果重组子经NheⅠ/XhoⅠ双酶切获得约880bp目的基因片段,DNA序列测定证实HCVC119基因正确插入并取代HBc脊区基因,杂合基因与HBVadr亚型及HCV日本株相应序列同源性超过97%,工程菌BL21(RIL)-pET28-BCc经IPTG诱导后表达约33kDa目的蛋白,并与HCV血清呈阳性反应。结论正确克隆、表达了HCVC119与HBc融合蛋白pBCc。
- 刘朝霞田泽维张彦明
- 关键词：乙型肝炎病毒丙型肝炎病毒核心蛋白
- 丙型肝炎病毒核心蛋白基因的克隆及其高效表达被引量：2
- 2003年
- 目的在大肠杆菌中表达丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白基因片段。方法利用PCR技术,扩增出357 bp的HCV核心蛋白基因片段,双酶切后将其插入到原核表达载体pET-32a,构建重组表达质粒pET-32a/HCVc。转化到大肠杆菌BL21中,IPTG诱导表达。SDS-PAGE鉴定表达情况,Western blot鉴定表达产物的抗原性。结果经IPTG诱导后获得了目的蛋白的融合表达;SDS-PAGE电泳显示其在32 000处有一条融和表达条带;Western blot结果显示其具有HCV抗原特异性。结论HCV核心蛋白在大肠杆菌中获得高效表达,而且表达产物有良好的抗原性。
- 张彦明李明董文其吴英松田泽维吴娴波
- 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白克隆大肠杆菌丙型肝炎
- 以HBc颗粒为呈现载体的HBV多表位复合基因真核表达载体的构建被引量：6
- 2002年
- 目的 构建以HBVHBc颗粒为呈现载体的HBV多表位复合基因真核表达质粒 ,以探讨HBV基因免疫的新途径。方法 PCR扩增HBc第 1～ 72aa及 93～ 183aa编码序列并定向克隆至pcDNA3.1的NheⅠ /XhoⅠ位点 ,构建真核表达载体pHBcdM。合成HBV多表位基因并插入HBc原脊区基因位点 ,构建HBc Mep融合基因真核表达质粒。经PCR、酶切及序列测定等方法筛选阳性质粒。结果 双酶切及测序结果证实阳性质粒正确克隆了约 885bp、编码HBc与HBV多表位的复合基因。结论 成功构建了以HBc颗粒为呈现载体的HBV多表位复合基因真核表达载体pHBc Mep ,为研究pHBc Mep作为DNA疫苗的免疫活性奠定基础。
- 田泽维董文其李明王萍黄建生
- 关键词：HBVDNA疫苗
