毛国强
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学附属儿童医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人抗黏液病毒A基因重组腺病毒体外抗乙型肝炎病毒的作用被引量：1
- 2011年
- 目的:研究人抗黏液病毒A(MxA)基因重组腺病毒AdMxA体外抗乙型病毒性肝炎病毒(HBV)的作用效果。方法:以1倍感染复数(MOI)(1倍MOI感染组)及5倍MOI(5倍MOI感染组)的重组腺病毒AdMxA分别转染HepG2.2.15细胞,以未感染HepG2.2.15细胞为对照(未感染组),利用RT-PCR检测3组HepG2.2.15细胞内MxAmRNA水平表达,并检测3组HepG2.2.15细胞内HBsAg及HBeAg滴度变化。结果:3组HepG2.2.15细胞内MxAmRNA水平比较差异有统计学意义(F=226.294,P<0.001),3组细胞内HBsAg、HBeAg水平比较差异有统计学意义(F值分别为94.519和44.065,P均<0.001),而1MOI及5MOI感染组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:重组腺病毒AdMxA感染HepG2.2.15后其MxAmRNA表达水平明显升高,并能显著抑制HepG2.2.15细胞中HBV的复制及表达,重组腺病毒AdMxA有望成为一种有效的基因治疗方法。
- 毛国强彭明利赵瑞秋黄琴刘爱平任红许红梅
- 关键词：重组腺病毒
- 含人MxA基因重组腺病毒抗乙型肝炎病毒作用的实验室研究
- 目的从健康中国人外周血单个核细胞中克隆人类MxA基因,应用腺病毒载体系统AdEasy system构建重组腺病毒质粒pAdMxA。研究重组腺病毒AdMxA体外抗HBV作用效果,为后续体内实验研究提供实验和理论基础。方法从...
- 许红梅毛国强黄琴赵瑞秋
- 文献传递
- 人MxA基因重组腺病毒载体的构建及鉴定被引量：4
- 2006年
- 目的:克隆中国人MxA基因并构建含有MxA基因的重组腺病毒载体,为下一步应用其进行抗乙型肝炎基因治疗研究奠定基础。方法:从健康中国人外周血中分离单个核细胞,用Trizol试剂提取总RNA。应用逆转录PCR(RT-PCR)方法,以自行设计的引物扩增全序列MxA基因,应用基因克隆技术将MxA基因克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrack(携带有绿色荧光蛋白基因)中,将线性化的pAdTrack-MxA和腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共同电转化入新鲜感受态大肠杆菌BJ5183中,两者在其中完成同源重组,MxA重组腺病毒质粒经卡那霉素抗性鉴别和PacI酶切确证,验证正确的MxA重组腺病毒线性化转染入293细胞中包装成完整病毒颗粒,观察绿色荧光蛋白(GFP)表达并检测重组腺病毒的病毒滴度。结果:重组腺病毒穿梭质粒pAd-Track-MxA连接成功,测序结果表明克隆的MxA基因序列与GenBank中人MxA基因序列仅有5个核苷酸不同但所编码氨基酸仅1个发生改变,且此氨基酸位于非功能区。MxA重组腺病毒经PacI酶切后产生30kb和4.5kb大小2个片段表明同源重组成功。重组腺病毒经293细胞包装后可观察到绿色荧光,收获病毒并测感染滴度为1.59×108(pfu/ml),具有较高感染效率。结论:我们已成功克隆了中国人的MxA基因,并成功构建重组腺病毒质粒,为进一步应用此基因进行抗乙型肝炎基因治疗研究奠定了基础。
- 毛国强彭明利黄琴赵瑞秋朱朝敏任红许红梅
- 关键词：逆转录基因克隆腺病毒
- 人Mx基因重组腺病毒载体的构建及鉴定
- 目的:克隆中国人Mx基因并构建含有Mx基因的重组腺病毒载体,为下一步应用其进行抗乙型肝炎基因治疗研究奠定基础。方法:从健康中国人外周血中分离单个核细胞,用Trizol试剂提取总RNA。应用逆转录聚合酶链反应法,以自行设计...
- 毛国强朱朝敏许红梅彭明利任红
- 文献传递
- 慢性乙肝病毒B亚型感染儿童不同HBeAg状态下CP基因变异测定被引量：3
- 2006年
- 目的了解HBV基因型B/adw2型的慢性HBV感染儿童不同血清HBeAg状态下HBVC区启动子基因的变异。方法选择HBV基因型为B型/血清型adw2的慢性HBV感染儿童64例,按血清HBeAg不同状态分为血清e抗体阳性组(n=34)和e抗原阳性组(n=30)2组,以HBVDNA为模板行PCR反应扩增S区序列(确定HBV基因型)及C区启动子(CP)基因片断,CP基因片断经胶回收纯化后,应用T-A克隆技术构建重组质粒pGEM-CP,经蓝白斑筛选,阳性克隆以凝胶电泳、双酶切及PCR验证后将鉴定正确的克隆测序,将测序结果与Entrezdata-base中血清亚型及基因型相同的HBV序列相比较并进行分析。结果S区基因测序结果证实64例儿童感染的HBV基因型均为B型/血清型adw2。CP基因测序结果证实2组均有CP基因变异,血清e抗体阳性组CP变异率(29.41%)高于e抗原阳性组(6.67%)(P<0.05)。e抗体阳性组有4个变异热点,而e抗原阳性组无变异热点。结论慢性乙肝病毒B亚型感染儿童存在CP基因变异,且可能与e抗原血清转换有关。
- 毛国强朱朝敏许红梅
- 关键词：乙型肝炎病毒儿童
