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免疫印迹法检测牛海绵状脑病和羊瘙痒病被引量：15: 2001年; 用大肠杆菌表达的牛朊病毒正常成熟蛋白 (BoPrPC)免疫新西兰白兔 ,获得了与朊病毒蛋白 (PrP)反应的抗体T1。根据致病型朊病毒 (PrPSC)能抵抗蛋白酶消化的特性 ,用蛋白酶K消化脑组织提取物 ,以抗体T1进行免疫印迹反应 ,结果表明从接种羊瘙痒病朊病毒 2 6 3K的金黄地鼠脑组织提取物内检测到抗蛋白酶K消化的致病型PrPSC ,而正常金黄地鼠脑组织中没有抗蛋白酶消化的蛋白。以我国正常牛羊为材料 ,制备其脑组织提取物 ,用上述方法和抗体T1进行检测 ,结果没有发现抗蛋白酶K的任何蛋白存在 ,说明没有牛海绵状脑病和羊瘙痒病存在。用 1A8抗体也获得了同样的结果。这些结果表明可以用自制的抗血清检疫牛海绵状脑病和羊瘙痒病。; 李运敏田波张宝云董小平; 关键词：牛海绵状脑病羊瘙痒病抗体免疫印迹

用马立克氏病病毒强毒的BamH-L片段核酸鉴定血清1型毒株: 2001年; 马立克氏病病毒 (MDV) GA强毒株的 Bam H - L 片段 DNA全长为 2 892 bp,G+C比率为 5 5 .91%。用内切酶将其亚克隆为 6个片段 :Bam H - Pst 、Pst - Pst 、Pst - Cla 、Cla - Sm a 、Sm a - Sma 和 Sm a - Bam H 。用地高辛标记 L 片段 DNA或者分别标记其 6个亚片段核酸 ,通过斑点杂交试验都可将 MDV血清 1型毒株与 2型和 3型的毒株区分开来 ,应用 PCR方法可获得相同结果。但 PCR方法更敏感、更快捷。结果表明 ,MDV GA强毒株的Bam H - L片段 DNA对 MDV血清; 陈溥言李运敏陈德胜张雪莲魏荣潘杰彦戴亚斌范伟兴姜焱丁巧玲; 关键词：马立克氏病病毒

马立克氏病病毒分子生物学诊断技术研究: 通过与SDS-蛋白酶K法、高纯度PCR模板提取试剂盒(宝灵曼公司产品)、NP<,40>-蛋白酶K法比较,研究小组建立了用TLS(三乙醇胺月桂酸硫酸盐)代替传统的SDS-蛋白酶K提取DNA的方法,对细胞培养物、血液样品提...; 李运敏; 关键词：马立克氏病病毒基因探针 MEQ基因

微量PCR检测鸡马立克氏病病毒早期感染被引量：2: 1998年; 为了建立一种监测鸡群马立克氏病病毒（ＭＤＶ）早期感染的微量ＰＣＲ方法，根据血清Ⅰ型马立克氏病病毒（ＭＤＶ１）基因组ＢａｍＨＩ－Ｌ片段的核酸序列设计了１对寡核苷酸引物，用含０．３ＵＴａｑ酶的１０μＬ反应体系分别扩增了ＭＤＶ１型（京－１株、ＭＤ１１／７５ｃ株）、ＭＤＶ２型（ＳＢ－１株）和ＨＶＴ（ＦＣ－１２６株）的核酸，并用京－１株感染细胞ＤＮＡ作了敏感性试验。结果显示，该引物对ＭＤＶ１型病毒特异，京－１株和ＭＤ１１／７５ｃ株都扩增到４２５ｂｐ的核酸条带，而ＳＢ－１株、ＦＣ－１２６株和正常ＣＥＦ细胞的ＤＮＡ都没有得到任何条带；敏感性试验结果表明，微量ＰＣＲ能够检测到０．１ｐｇ的京－１株感染细胞ＤＮＡ；对京－１株感染鸡，在接种后第５天就能在血液细胞中检测到ＭＤＶＤＮＡ。微量ＰＣＲ可望成为监测鸡群ＭＤＶ早期感染的一种快速、有效的方法。; 李运敏陈溥言蔡宝祥楚文彬; 关键词：马立克氏病病毒

与酵母Ure2p朊病毒结构域融合表达的谷胱苷肽-S-转移酶结构的改变: 2001年; 酵母朊蛋白Ure2蛋白(Ure2P)具有动物脱蛋白类似的构象转变特点,其N-端65个氨基酸是朊病毒结构域(PrD),对酵母朊病毒的发生起关键性作用,将PrD基因与谷胱苷肽-S-转移酶(GST)基因重组,在大肠杆菌中表达了可溶性的GST-PrD融合蛋白(sGST-PrD),sGST-PrD在体外自发地聚合成纤维,这种蛋白纤维的圆二色谱呈典型的β-折叠,对蛋白酶K的抵抗力增加,并具有淀粉样纤维的光学特性,聚合的GST-PrD(aGST-PrD)能促进sGST-PrD聚合成纤维,这些结果显示PrD能使与其融合的GST蛋白的构象发生变化,形成一种新的朊蛋白样嵌合蛋白,这是PrD改变其他蛋白构象的证据。; 李运敏饶子和田波; 关键词：谷胱苷肽-S-转移酶构象 Β折叠

酵母Ure2p朊病毒结构域功能的研究及疯牛病和羊瘙痒病的诊断: 用PCR技术从具有[URE3]表型的酵母菌3687的基因组DNA中扩增到Ure2p朊病毒结构域(PrD)基因,克隆到pGEM-T载体中,序列测定结果表明克隆到正确的PrD基因.用硫酸铵分级沉淀、疏水层析、阴离子交换层析和...; 李运敏; 关键词：疯牛病羊瘙痒病; 文献传递

鸡马立克氏病检测试剂盒: 陈言赵军李运敏钱健飞魏荣; 一、技术关键、主要技术经济指标，与国内外同类技术的比较和获奖情况：研制出地高辛标记的MDV I型强毒检测试剂盒，可区分MDV I、II、III型毒株，能区分MD I型的致瘤毒株与非致瘤毒株。研制成功的试剂盒在强毒MDV攻...; 关键词：; 关键词：鸡马立克氏病诊断试剂盒鸡病血清诊断

冻融、温度等理化因素对卵黄抗体AGP效价的影响被引量：3: 1995年; 按常规方法制备抗鸡传染性法氏囊炎卵黄抗体（ｙｏｌｋａｎｔｉｂｏｄｙ，ＹＡ），经冻融、温度、机械振荡、光照和防后剂（０．０１％流柳汞、０．０１％叠氮钠和０．５％苯酚）等处理后测定其琼脂扩散试验（Ａｇａｒｇｅｌｎｒｅｄｒｉｔａｔｉｏｎ，ＡＧＰ）效价的变化．实验结果表明，冻融毛次后卵黄抗体的ＡＧＰ效价自１：６４降至１：３２，冻融６次降至１：１６，０．５％苯酚的存在使ＹＡ的ＡＧＰ效价自１：６４降至１：１６；其它物理因素对ＹＡ的ＡＧＰ效价影响不明显．; 王成明李运敏柳卫国; 关键词：AGP 效价

马立克氏病血清I型致瘤株病毒感染的早期检测被引量：2: 2001年; 马立克氏病 (MD)是养禽业最重要的疫病之一 ,一直缺少有效的早期诊断方法。根据血清I型马立克氏病毒(MDV1)meq基因的核酸序列设计了一对寡苷酸核引物 ,分别对MDV1致瘤株 (京 - 1株 )、非致瘤株 (MD11/ 75C株、CV1988株 )、MDV2 (SB 1株 )、HVT(Fc 12 6株 )的核酸进行扩增。结果表明 :京 - 1株扩增到约 1 15kb核酸片段 ,MD11/ 75C株和CVI988株扩增到约 1 0kb核酸片段 ,而SB 1株、Fc 12 6株没得到任何扩增产物。PCR产物Dotblot结果显示 ,京 - 1株、MD11/ 75C株和CVI988株的扩增产物都与Digoxigenin标记的meq基因探针杂交 ,说明都是特异性的扩增产物。对MSB1细胞DNA及MDV感染鸡的血液及肝、肾肿瘤等DNA扩增都得到 1 15kb条带。将京 - 1株和CVI988株感染的细胞DNA混合再扩增 ,同时得到 1 15kb和 1 0kb的核酸条带 ,所以根据扩增产物大小可以区别致瘤株京 - 1株及非致瘤株CV1988株 ,这表示可从CVI988株病毒免疫鸡体内检测到MDV强毒 ,适于早期确诊强毒感染。; 李运敏黄兵蔡宝祥陈溥言; 关键词：马立克氏病病毒 MEQ基因

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李运敏