李小雷
- 作品数：12 被引量：14H指数：3
- 供职机构：中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市科技新星计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 激光显微切割技术用于子宫内膜异位组织DNA的提取及其完整性分析
- 2013年
- 目的:探索一套激光显微切割(LCM)分离子宫内膜异位症腺体细胞后提取微量DNA并进行完整性分析的操作流程。方法:分别对20例石蜡标本及20例冰冻标本进行LCM,收集切割后的腺体细胞;2组标本各取10例提取微量DNA,检测DNA浓度并通过PCR扩增进行验证;余20例标本分别进行全基因组扩增,检测产物浓度并利用8种常见管家基因作为引物通过PCR扩增进行验证,对比分析其结果。结果:石蜡标本与冰冻标本在LCM获取腺体细胞及提取微量DNA两个环节中均可获得满意效果;但经全基因组扩增后,石蜡标本无法保留完整DNA信息。结论:LCM获取子宫内膜异位症腺体细胞提取微量DNA是一种操作简单、结果稳定的方法,可作为日后子宫内膜异位症基因组研究的常规方法;冰冻切片相对石蜡切片,更能保留完整的DNA信息。
- 赵路阳李小雷张燕赵亚力韩为东孟元光
- 关键词：子宫内膜异位症激光显微切割
- HeLa细胞中LRP16影响电离辐射诱导的NF-κB核转位被引量：3
- 2011年
- 前期研究显示抑制LRP16的表达可以明显增加肿瘤细胞对辐射诱导凋亡的敏感性,但具体机制尚不清楚.大量研究表明,NF-κB信号通路在肿瘤产生辐射抵抗中起着重要的作用.为研究LRP16影响肿瘤细胞对辐射敏感性的可能机制,首先通过免疫荧光技术检测电离辐射刺激后不同时间点NF-κB的核转位情况;然后分别过表达和抑制LRP16的表达,采用Western印迹方法检测NF-κB在核蛋白与浆蛋白中的表达情况、IκB-α总体蛋白水平及磷酸化水平.结果发现,电离辐射后1 h,可见NF-κB明显入核;过表达LRP16可以促进NF-κB入核、提高IκB-α的磷酸化水平、促进IκB-α的降解;反之,抑制LRP16的表达可以抑制NF-κB入核、降低IκB-α的磷酸化水平、阻碍IκB-α的降解.上述研究结果表明,在HeLa细胞中LRP16可以影响电离辐射诱导的NF-κB核转位,该研究为LRP16参与肿瘤细胞产生辐射抵抗现象提供一种可能的机制.
- 马晓星伍志强段玉坤赵亚力李小雷韩为东孟元光
- 关键词：LRP16NF-ΚB电离辐射核转位
- 抑制LRP16基因的表达显著下调TNF-α介导的NF-κB转录活性被引量：1
- 2011年
- LRP16是1个雌激素(E2)通过其受体α(ERα)诱导表达的靶基因.研究表明,LRP16可以作为多种核受体(包括AR、ERα)的转录共激活因子.采用荧光素酶报告检测显示,抑制LRP16基因表达显著削弱了TNF-α(10 ng/mL)介导的NF-κB转录活性;采用免疫荧光和Western印迹法研究抑制LRP16对NF-κB/p65亚基核转位的影响,结果显示,抑制LRP16表达并不能参与影响p65亚基核转位.上述结果提示,LRP16可能以核激活因子角色参与了NF-κB介导的信号途径.RT-PCR实验检测抑制LRP16基因表达对TNF-α诱导NF-κB靶基因调控作用,检测的靶基因包括IκB、A20、IL-8、FLIP、XIAP.结果表明,在这些靶基因中只有XIAP、cIAP2产生了明显的下调趋势.因此,LRP16是NF-κB的1个共激活因子,通过调控NF-κB与靶基因的结合能力,从而增强了NF-κB的转录活性.
- 李小雷伍志强马晓星赵亚力韩为东
- 关键词：LRP16SIRNANF-ΚB转录调控
- LRP16转基因小鼠的繁殖与鉴定
- 2014年
- 目的繁殖和鉴定携带有外源LRP16基因的转基因小鼠,为体内研究LRP16的生物学功能提供动物模型。方法首先将构建好的LRP16转基因重组质粒转染到293T细胞,鉴定该质粒是否可以有效表达目的蛋白,随后利用原核显微注射方法将线性化的重组质粒注射入品系为FVB的小鼠受精卵中,获得F0代小鼠。应用PCR方法对F0代小鼠进行鉴定,并将阳性F0代小鼠继续繁殖。结果 LRP16转基因重组质粒在293T细胞中可以有效表达,经PCR鉴定获得3只阳性F0代小鼠,阳性率为6.23%,选取其中1只整合有LRP16基因的F0代雄鼠,通过其与野生型FVB小鼠杂交获得7只F1代子鼠,其中4只为阳性鼠,阳性率为57.14%。从F1代中再次选取其中1只阳性雄鼠与野生型小鼠杂交繁殖获得5只F2代子鼠,PCR鉴定结果显示2只为阳性,阳性率为40%。结论 LRP16基因成功整合到小鼠基因组中,并且能够稳定遗传,为后续在动物整体水平研究LRP16的功能奠定了基础。
- 王春萌柏苗苗伍志强李小雷李祥梅倩韩为东
- 关键词：LRP16基因转基因小鼠繁殖基因鉴定
- Gateway技术构建转基因重组质粒pRP.EX3d-EF1A-LRP16-His-IRES-eGFP
- 2014年
- 目的构建转基因重组质粒pRP.EX3d-EF1A-LRP16-His-IRES-eGFP,为转基因鼠的建立奠定基础。方法利用重叠PCR技术扩增attB1-LRP16-His-attB2,经BP反应,将LRP16基因插入到载体pDown上,pUp-EF1A、pDown-LRP16-His、pTail-IRES-eGFP和PRP.Des3d经LR反应,将LRP16转移到pRP.EX3d上,转化Stbl3细胞,用氨苄西林进行抗性筛选,经PCR鉴定后将阳性克隆送测序。结果测序及酶切结果验证获得正确的pRP.EX3d-EF1A-LRP16-His-IRES-eGFP重组质粒。结论成功构建pRP.EX3d-EF1A-LRP16-His-IRES-eGFP重组质粒,可用于下一步LRP16转基因小鼠的构建。
- 柏苗苗王春萌伍志强梅倩李小雷李祥赵亚力韩为东
- 关键词：LRP16GATEWAY技术LRP16
- LRP16短发夹RNA慢病毒载体的构建及LRP16稳定抑制细胞的建立
- 2014年
- 目的:构建靶向LRP16基因的短发夹RNA(shRNA)慢病毒表达载体,鉴定其在HeLa细胞中对LRP16的抑制效果。方法:构建pWPT-U6-LRP16shRNA-CMV-GFP慢病毒载体,通过病毒感染、细胞筛选、Western印迹等步骤,获得LRP16基因稳定抑制的细胞株。结果:构建了具有LRP16干扰效果的慢病毒载体,感染HeLa细胞后获得了稳定沉默LRP16及对照的细胞株;经克隆筛选,在荧光显微镜下观察到近似100%感染细胞发出绿色荧光;Western印迹证实pWPT-U6-L374-CMV-GFP和pWPT-U6-L668-CMV-GFP均可显著抑制HeLa细胞株中LRP16蛋白的表达,其中pWPT-Gsi-L374-GFP的抑制效果更好。结论:构建了靶向人LRP16基因shRNA慢病毒载体及LRP16稳定抑制的HeLa细胞系。
- 王春萌柏苗苗伍志强李小雷李祥梅倩韩庆旺韩为东
- 关键词：LRP16HELA细胞慢病毒载体
- 过表达miR-455抑制宫颈癌细胞SiHa的生长被引量：6
- 2012年
- 研究表明,microRNA(miRNA)可作为癌基因或抑癌基因发挥功能、调控细胞增殖和凋亡等生物学行为,与肿瘤的发生发展密切相关.在本研究中,我们检测了miR-455在宫颈癌组织中的表达变化及其对宫颈癌SiHa细胞生物学功能的影响.Real-time PCR实验结果显示,miR-455在宫颈癌组织样本中较正常宫颈组织表达明显降低.瞬时转染miR-455 mimics使其在SiHa细胞中过表达.CCK-8及流式细胞术分析显示,过表达miR-455明显抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,导致细胞G1/S期阻滞.Real-time PCR分析显示,PI3KR1,BCL2L2 mRNA明显降低.上述研究结果表明,miR-455可显著降低SiHa细胞存活能力,是一个潜在的抑癌基因.
- 张康梅倩李祥赵亚力李小雷韩为东孟元光
- 关键词：MICRORNA宫颈癌细胞周期
- GST-pulldown体外研究LRP16与NF-κB/p65相互作用的功能表位
- 2011年
- 目的:构建核转录因子NF-κB/p65亚基的功能表位载体,采用GST-pulldown探究p65与LRP16体外相互作用的功能表位。方法:以真核表达质粒pcDNA3.1-p65为模板,PCR扩增一组p65功能表位的基因片段,经测序后,克隆至pcDNA3-flag载体上,用BamHⅠ/XhoⅠ双酶切重组质粒鉴定目的片段大小,然后采用GST-pulldown实验验证LRP16与p65之间的相互作用。结果:构建了p65的5个功能表位的表达载体且可用于体外转录翻译,GST-pulldown体外研究表明,p65蛋白N端RHD结构域是与LRP16相互作用所必需的,p65的RHD结构域的缺失完全消除了p65与LRP16的体外相互作用。结论:GST-pulldown实验验证了LRP16与p65存在体外直接相互作用,并具体分析了LRP16与p65相互作用的表位。
- 李小雷伍志强马晓星赵亚力韩为东
- 关键词：LRP16相互作用
- LRP16影响电离辐射诱导的NF-κB活性
- 2011年
- 目的:研究LRP16在电离辐射激活核转录因子NF-κB信号转导通路中的作用。方法:在HeLa细胞中,分别运用双萤光素酶分析和Western印迹检测LRP16对κB-Luc报告基因及NF-κB下游靶基因表达的影响。结果:双萤光素酶实验证实LRP16过表达促进电离辐射诱导的κB-Luc活性,而抑制LRP16则降低电离辐射诱导的κB-Luc活性;Western印迹结果显示,LRP16过表达促进电离辐射诱导NF-κB的下游抗凋亡基因XIAP的表达,与之相对应的是,抑制LRP16降低电离辐射诱导NF-κB下游抗凋亡基因XIAP的表达。结论:LRP16可以调节电离辐射诱导NF-κB的转录活性,并且调控NF-κB下游抗凋亡基因XIAP的表达,为进一步阐明电离辐射激活NF-κB转录活性的分子机制奠定了基础。
- 马晓星伍志强段玉坤孟元光何文俊赵亚力李小雷韩为东
- 关键词：LRP16NF-ΚB电离辐射
- LRP16结合poly(ADP-ribose)关键位点的识别
- 2013年
- LRP16作为macro domain家族成员,可识别、结合poly(ADP-ribose),参与DNA损伤修复的早期反应.但究竟LRP16通过其何种氨基酸位点识别、结合poly(ADP-ribose)(PAR)尚不十分清楚.本研究首先通过对LRP16蛋白的结构分析,查找LRP16结合PAR的候选氨基酸位点,然后利用丙氨酸扫描技术构建系列LRP16(点)突变体,并且进行原核蛋白表达与纯化,将获得的蛋白质进行斑点杂交实验,检测LRP16突变体蛋白与PAR的结合活性.测序结果显示,LRP16点突变基因序列成功插入到原核表达载体pGEX-6p-1中;斑点杂交实验显示,LRP16中第160位D和第161位I突变成A后,其与PAR结合能力明显减弱,而第181位G、183位V、184位D同时突变为A,LRP16与PAR的结合活性有部分减弱.结果表明,LRP16中第160位和第161位的氨基酸是其与PAR结合的关键位点.
- 柏苗苗王春萌伍志强梅倩李小雷李祥赵亚力韩为东
- 关键词：LRP16
