张晋宇
- 作品数：14 被引量：42H指数：4
- 供职机构：第三军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- β2M-绿色荧光蛋白在MHC-Ⅰ肽亲和力实验中的应用被引量：2
- 2009年
- 目的构建并表达β2微球蛋白-绿色荧光蛋白融合蛋白,并应用该蛋白建立一种全新的MHC-Ⅰ肽亲和力实验方法。方法构建β2M-ZsGreen-6×His标签的融合蛋白真核表达质粒,转染293FT细胞表达,并以镍亲和层析法纯化,将该融合蛋白与表位肽共同与T2细胞反应,通过流式细胞术检测T2细胞标记绿色荧光的情况鉴定表位。结果构建了β2微球蛋白-绿色荧光蛋白真核表达质粒并表达、纯化得到融合蛋白,该蛋白可应用于亲和力实验,进行表位鉴定。结论β2微球蛋白-绿色荧光融合蛋白应用于亲和力实验鉴定CTL表位方法可行,步骤简便,适用于大通量表位鉴定。
- 熊锐华王昊亮邹丽云李景怡张晋宇张荣华万瑛
- 关键词：绿色荧光蛋白融合蛋白T细胞表位
- Rab4蛋白参与DC细胞内源性抗原递呈被引量：4
- 2007年
- 目的建立稳定表达卵白蛋白的DC细胞株DC-OVA,研究Rab蛋白对DC内源抗原递呈的影响。方法首先构建含OVA蛋白基因慢病毒表达质粒pLentimycOVA;以DNA-磷酸钙共沉淀法转染293FT细胞制备慢病毒,用病毒感染DC2.4细胞及杀稻瘟毒素(Blasticidin)筛选方法建立稳定表达OVA的细胞株,Western blot鉴定DC-OVA细胞中OVA蛋白表达;然后用识别MHC I类分子-OVA肽复合物的T细胞杂交瘤B3Z细胞以及针对该复合物的单抗25D1.16检测DC-OVA细胞表面MHC-OVA肽复合物的形成情况,建立内源性抗原呈递的检测方法;最后采用脂质体法转染化学合成的Rab4、Rab5A、Rab7、Rab11的siRNA于DC-OVA中,B3Z检测DC内源抗原递呈的变化。结果酶切和测序分析证实转移质粒克隆成功,Western blot可在DC-OVA细胞中检测到OVA蛋白,B3Z细胞和25D1.16单抗可检测到DC-OVA细胞表面存在MHC I类分子-OVA表位多肽复合物,表明内源性抗原呈递系统成功建立。在此基础上,发现下调DC细胞中Rab4蛋白的表达,DC-OVA细胞刺激B3Z生成IL-2(白细胞介素2)的量明显下降。结论成功构建了OVA蛋白的慢病毒表达载体,获得了表达内源OVA蛋白的DC细胞株,建立了内源性抗原呈递系统,初步证实下调Rab4蛋白可抑制DC细胞的内源性抗原递呈,为病毒感染和肿瘤等疾病的治疗奠定了基础。
- 柴琳琳万瑛邹丽云张晋宇李娜刘婷李景怡吴玉章
- 关键词：OVA内源抗原递呈
- 新型示踪MHC-I类分子方法的建立被引量：3
- 2010年
- 目的采用位点特异性荧光蛋白标记技术建立新型示踪MHC-I类分子的方法,比较TCtag和halotag在体细胞和抗原递呈细胞中示踪MHC-I类分子的优缺点。方法构建H-2Kb-TCtag和H-2Kb-halotag融合蛋白的真核慢病毒表达载体,转染293FT细胞制备病毒,将病毒分别感染体细胞293FT和树突状细胞系DC2.4细胞后,TCtag采用染料ReAsH和FlAsH染色,Halotag采用染料HaloTagTMR染色,在激光共聚焦显微镜下观察H-2Kb的分布情况。结果通过激光共聚焦显微镜观察发现:TCtag与染料ReAsH和FlAsH只在293FT细胞内是特异性的结合;Halotag与用染料HaloTagTMR在293FT和DC2.4细胞内都是特异性结合的。结论从结合特异性上来看,Halotag标记MHC I类分子要优于TC-tag。
- 李志海邹丽云熊锐华张晋宇李景怡谢谆怡秦瑶李青赵奇万瑛林治华
- 关键词：绿色荧光蛋白MHC-I类分子TAGHALOTAG
- CGRP作用下的成骨细胞蛋白质差异表达被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨降钙素基因相关肽作用下成骨细胞内蛋白质表达谱的变化。方法:传代培养MG63成骨细胞,随机分为CGRP组和对照组。提取各组成骨细胞内蛋白质,经双向电泳分离、考马斯亮蓝染色后扫描分析蛋白质表达变化,选取6个差异显著的蛋白点进行胶内酶切、肽质量指纹图谱分析和IPI数据库检索。结果:双向电泳可分离(967±17)个蛋白质,点匹配率为(85.1±1.4)%,成骨细胞6种蛋白点表达出现明显差异,与对照组比较,CGRP组6种蛋白质表达下调。质谱分析鉴定出与核糖体定位和合成的新蛋白转位有关的核糖体结合蛋白p180(p180/ribosomereceptor)及影响细胞内钙浓度的钙结合蛋白HRNRHornerin等5种蛋白质。结论:CGRP作用于成骨细胞后,成骨细胞蛋白质组变化显著,涉及与钙离子浓度变化及新蛋白转位有关的几组蛋白质,提示CGRP可能通过这几种蛋白参与第二信使及细胞因子的调节并发挥功能。
- 吴梦李焰张晋宇孙胜邓子辉谭颖徽
- 关键词：降钙素基因相关肽成骨细胞蛋白质组双向电泳质谱
- siRNA沉默Rac2蛋白表达下调树突状细胞的交叉递呈被引量：2
- 2008年
- 目的通过RNA干扰研究Rac2蛋白对树突状细胞(DC)交叉递呈的影响。方法首先构建针对Rac2基因siRNA的慢病毒载体pFIVsiRNARac2-1,pFIVsiRNARac2-2,pFIVsiRNARac2-3;DNA-磷酸钙共沉淀的方法转染293FT细胞包装慢病毒,嘌呤霉素(puromycin)筛选病毒感染的阳性DC2.4(树突状细胞系),Western-blot检测其干扰效率;然后用B3Z细胞(H2-Kb限制性,SIINFEKL特异性T细胞杂交瘤)检测筛选后的DC2.4细胞交叉递呈的能力。结果酶切和测序结果证实表达siRNA的慢病毒载体构建成功,抗原递呈实验发现下调了Rac2蛋白表达的DC2.4细胞交叉递呈能力下降。结论初步证实了Rac2蛋白参与树突状细胞对外来抗原的交叉递呈,为进一步了解树突状细胞交叉递呈的分子机制奠定了基础。
- 李娜邹丽云万瑛张晋宇刘婷李景怡吴玉章
- 关键词：树突状细胞交叉递呈
- Tat-Rac1 C-末端肽促进树突状细胞的交叉递呈被引量：2
- 2008年
- 目的研究Rac1、Rac2、Rac3、RhoA及Cdc42的C-末端肽对树突状细胞(DC)交叉递呈的影响。方法合成Rac1、Rac2、Rac3、RhoA及Cdc42C末端区与人工改造的穿膜肽Tat47-57的融合肽,负载DC2.4细胞后,采用荧光显微镜及流式细胞术检测DC2.4细胞吞噬能力的变化,采用B3Z细胞检测DC2.4细胞抗原交叉递呈能力的变化。结果负载了Tat-Rac1C-末端肽的DC2.4细胞吞噬能力增强,并显著促进DC2.4细胞经MHCI类分子途径递呈外源性抗原的能力。结论Tat-Rac1C-末端肽能够有效促进DC的交叉递呈,为病毒感染和肿瘤等疾病的治疗奠定了基础。
- 刘婷邹丽云万瑛张晋宇李娜李景怡傅晓岚吴玉章
- 关键词：树突状细胞交叉递呈
- 骨髓来源的原代树突状细胞对细菌颗粒抗原交叉呈递的动力学研究被引量：4
- 2008年
- 目的研究小鼠骨髓细胞来源的树突状细胞对细菌颗粒抗原交叉递呈的动力学特点。方法取小鼠骨髓细胞,采用GM-CSF诱导培养。用倒置显微镜观察培养过程中细胞形态,用流式细胞仪进行细胞纯度和表型测定。采用第7天未成熟的DC细胞进行细菌抗原的交叉递呈能力检测和动力学分析。结果小鼠骨髓细胞经GM-CSF诱导培养,第7天获得大量具有典型形态和免疫表型的树突状细胞,并且在细菌脂多糖刺激后,其表型也发生特征性变化表现在共刺激分子CD80由刺激前的27.7%上调到71.6%,CD86从刺激前的36.0%上调到80.3%,DEC205从刺激前的6.5%上调到26.2%。同时该细胞吞噬低剂量的细菌抗原即可有效活化T细胞,其动力学曲线为:1～3h,该细胞抗原递呈能力呈对数增加,3～8hDC抗原递呈能力进入一个平台期,10～12h,抗原递呈能力又迅速增强。结论采用GM-CSF可以从小鼠骨髓中获得大量纯度高并且具有典型免疫表型的DC,该DC细胞能有效的递呈外源性细菌抗原,并具有特殊的抗原递呈动力学曲线。
- 邹丽云万瑛刘婷李娜张晋宇李景怡吴玉章
- 关键词：树突状细胞体外培养
- 人microRNA-146a慢病毒表达载体的构建及鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的构建针对has-miR-146a的慢病毒表达载体,并鉴定成熟has-miR-146a在细胞内表达水平。方法PCR扩增pri-miR-146a,克隆于慢病毒载体plenti-GFP中,转染293FT细胞,收获并浓缩慢病毒颗粒,感染Jurkat细胞。结果成功构建了has-miR-146a的慢病毒表达载体,建立了高效转染系统。结论建立了高效稳定表达has-miR-146a的慢病毒转染系统。
- 李景怡万瑛张晋宇邹丽云李娜刘婷柴琳琳熊锐华吴玉章
- 关键词：慢病毒表达载体JURKAT细胞
- Th1/Th2细胞因子谱在类风湿关节炎患者外周血和关节积液中的表达及意义被引量：13
- 2010年
- 目的鉴定类风湿关节炎患者外周血和关节积液中Th1/Th2细胞因子谱的表达并探讨其在炎症中的意义。方法采用微量样本多指标流式蛋白定量技术(cytometric bead array,CBA)检测41例类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者(2006年1月至2007年12月西南医院风湿病中心首诊病例)血清和关节积液中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α和IFN-γ的表达。对照组(n=5)为西南医院健康查体人员。结果与对照组和/或RA患者外周血比较,RA患者关节积液中IL-2、IL-4、IFN-γ、IL-6和IL-10的表达显著增高(P<0.01),IFN-γ和IL-6的表达在RA患者外周血中也显著增高(P<0.01),TNF-α的表达在RA患者关节积液和外周血中也增高(P<0.05),并且在关节积液中IFN-γ/IL-4比例显著增高(P<0.01)。与抗环瓜氨酸肽抗体(cyclic citrullinated peptide,CCP)阴性的患者相比,CCP抗体阳性的患者关节积液中IL-2、IL-6表达增高(P<0.05),TNF-α和IFN-γ的表达显著增高(P<0.01)。结论Th1/Th2极化失衡是RA炎症损伤的主要免疫病理机制,在关节局部是以Th1极化诱导的炎症反应为主,并且CCP抗体阳性患者关节炎症程度明显高于CCP抗体阴性患者。
- 李景怡方勇飞邹丽云张晋宇傅晓岚柏干苹万瑛吴玉章
- 关键词：类风湿关节炎TH1细胞TH2细胞抗环瓜氨酸肽抗体
- FimH_(1-156)融合基因的构建及其原核蛋白表达与纯化
- 2014年
- 目的构建含有与溶酶体膜蛋白2(LAMP-2)P41-49完全同源序列的尿路致病性大肠杆菌(UPEC)Ⅰ型菌毛FimH1-156为目的基因的原核载体,表达并纯化FimH1-156融合蛋白。方法采用PCR克隆pPKL241质粒获取FimH1-156基因,插入原核表达载体pET28a(+);将重组表达质粒转染感受态E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达FimH1-156融合蛋白,超声裂解细菌,NiNTA层析法进行纯化,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析、蛋白免疫印迹法(Western blot)对其进行鉴定。结果成功构建表达载体,经对融合蛋白表达条件的优化,在IPTG浓度为1mmol/L,诱导4h目的蛋白表达量最高,主要以包涵体形式存在;Western blot证实该FimH1-156融合蛋白可与抗6×His单克隆抗体发生结合反应。结论成功克隆FimH1-156融合蛋白表达基因并构建至原核表达载体,获得了包涵体纯化的FimH1-156融合蛋白,为下一步建立实验动物模型奠定了基础。
- 尹仕伟邹丽云张莹张晋宇唐莎施维维吴玉章袁发焕张静波
- 关键词：FIMH1融合蛋白纯化
