周昱男 作品数:8 被引量:16 H指数:3 供职机构: 华中科技大学同济医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 湖北省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
骨髓或外周血中CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T淋巴细胞与aGVHD的关系 2009年 目的研究患者异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)前后骨髓或外周血单个核细胞中CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T淋巴细胞(以下简称CD4^+CD25^+Foxp3^+T细胞)的比率、Foxp3mRNA和Foxp3蛋白的表达与急性移植物抗宿主病(aGVHD)的关系。方法选择37例行HLA相合异基因造血干细胞移植(allo-HSCT))的患者作为研究对象。采用流式细胞术检测患者allo-HSCT前7天(-7d)、移植当天(0d)、移植后30天(+30d)、+60d和+90d时骨髓或外周血单个核细胞中CD4^+CD25^+Foxp3^+T细胞所占的比率:定量聚合酶链反应(PCR)检测Foxp3mRNA相对表达量;蛋白印迹(Western blot)法检测Foxp3的蛋白表达水平。结果37例患者在移植后100d内发生aGVHD13例(aGVHD组),未发生aGVHD24例(无aGVHD组)。CD4^+CD25^+Foxp3^+T细胞的比率在0d时最低,与-7、+30、+60、+90d时比较,差异均有统计学意义(P〈0.01):与aGVHD组比较,无aGVHD组患者的CD4^+CD25^+Foxp3^+T细胞的比率明显升高,差异有统计学意义(P〈0.01)。aGVHD组患者移植后Foxp3的表达水平逐渐升高,但明显低于无aGVHD组,尤其在+60和+90d时的差异有统计学意义(P〈0.01)。Western blot法检测结果表明,aGVHD组受者的Foxp3蛋白表达也明显低于无aGVHD组。结论CD4^+CD25^+Foxp3^+T细胞对防止发生aGVHD具有重要作用,监测患者骨髓或外周血中CD4^+CD25^+Foxp3^+T细胞的比率可以预测aGVHD的发生。 王晓娟 车传珍 周昱男 刘仲萍 黄士昂关键词:基因表达调控 移植物抗宿主病 Shh—Gli信号激活对人神经母细胞瘤SK—N—AS细胞存活的影响及其机制 被引量:3 2009年 目的证实Shh—Gli信号途径在人神经母细胞瘤细胞株SK—N—AS细胞中的存在,探讨激活该途径对神经母细胞瘤的存活的影响及其作用机制。方法用免疫细胞化学和Western blot检测SK-N—AS细胞株中Ptch-1、Gli-1、Gli-2蛋白的表达,用噻唑蓝(MTT)比色法检测Shh对细胞存活率的影响,用流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期的变化。结果Ptch-1、Gli-1和Gli-2在SK—N—AS细胞株中强阳性表达,Shh使细胞存活率提高了13.9%,该效应具有时间依赖性和剂量依赖性,流式检测显示Shh作用使细胞凋亡率较对照组比较下降31%,周期检测显示Shh应用后,G0/G1期细胞百分比,从对照组61.81%下降至47.29%,S期从16.55%上升至45.66%,以上差异有统计学意义(P〈0.05)。结论激活Shh—Gli信号可减少SK—N—AS细胞的凋亡,加速其进入增殖周期,促进神经母细胞瘤的存活。 戴若莲 胡波 夏远鹏 周昱男 毛玲关键词:神经母细胞瘤 脱噬作用 Cyclopamine对神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH细胞生长周期的影响及其机制 2009年 目的探讨Shh信号途径的抑制剂cyclopamine对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH细胞生长周期的影响及其分子生物学机制。方法以不同浓度的cyclopamine处理SK-N-SH细胞不同时间,在相差倒置显微镜下观察药物作用后的该细胞形态学变化。用四甲基偶氮唑盐(MTT)分析法检测各组SK-N-SH细胞的增殖情况,流式细胞仪检测不同浓度cyclopamine作用后对细胞周期的影响,Westernblot检测药物作用前后细胞周期蛋白D1、P16和P21蛋白表达的变化。结果cyclopamine各处理组SK-N-SH细胞形态学有所不同。MTT法检测结果显示,cyclopamine对SK-N-SH细胞增殖的抑制是浓度依赖性和时间依赖性的(P<0.05)。流式细胞仪检测发现随着药物浓度的增加,G0/G1期细胞百分比明显增加(P<0.05),而S期细胞百分比明显降低(P<0.05)。Westernblot检测结果显示,随着药物浓度的增加,SK-N-SH细胞中细胞周期蛋白D1表达逐渐降低,P16和P21表达逐渐增高(P<0.05)。结论cyclopamine抑制SK-N-SH细胞生长,阻滞细胞从G1期向S期转化,其机制可能与调控细胞周期蛋白表达有关。cyclopamine可能成为未来治疗神经母细胞瘤的药物之一。 周昱男 夏远鹏 毛玲 戴偌连 杨雪 胡波关键词:神经母细胞瘤 CYCLOPAMINE 细胞周期蛋白 Shh基因在胚胎发育过程中的调控作用 被引量:7 2008年 Mammals have three genes with homology to the hh gene.These comprise Sonic hedgehog(Shh),Indian hedgehog(Ihh),and Desert hedgehog(Dhh).Shh has been shown to play a crucial role in embryogenesis and the development of ectoderm.Shh has the great relationship with the forming all the system.Shh-Patched-Smoothened signal pathway will lead the embryogenesis in the normal way.Otherwise,the abnormal embryogenesis,malformation,and tumor will be happened. 周昱男 胡波关键词:基因 SHH 胎儿发育 Eph/Ephrin-B1通过Src酪氨酸激酶/丝裂原活化蛋白激酶信号抑制睫状神经节神经元的尼古丁乙酰胆碱受体电流 被引量:1 2008年 本研究旨在探讨Eph/Ephrin-B1信号对急性分离的鸡胚睫状神经节(ciliary ganglion,CG)神经元上α3-尼古丁乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptors,α3-nAChRs)和α7-尼古丁乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptors,α7-nAChRs)电流的影响及可能机制。用膜片钳技术在急性分离的CG神经元上分别记录α3-nAChRs和α7-nAChRs全细胞电流。为检测Ephrin-B1对细胞nAChRs电流的影响,细胞被随机分为:对照组、Ephrin-B1Fc处理组(用Ephrin-B1与IgG重组后形成的Ephrin-B1Fc刺激细胞)、IgG处理组(用与Ephrin-B1Fc处理组重组所需的相同浓度的IgG刺激细胞)和Ephrin-B1处理组(用与Ephrin-B1Fc处理组重组所需的相同浓度的Ephrin-B1刺激细胞)。为探讨Ephrin-B1调节细胞nAChRs电流的机制,分别用Src信号抑制剂PP2和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号抑制剂PD98095预处理细胞后,再用Ephrin-B1Fc处理细胞,观察α3-nAChRs和α7-nAChRs电流的变化,细胞被随机分为:对照组、Ephrin-B1Fc处理组、PP2或PD98095(PP2/PD)处理组、Ephrin-B1Fc+PP2或PD98095处理组。结果显示:对照组、IgG处理组和Ephrin-B1处理组之间α3-nAChRs和α7-nAChRs电流无显著差异,而Ephrin-B1Fc处理组可显著抑制α3-nAChRs和α7-nAChRs电流,与对照组比较有显著差异(P=0.002、P=0.003);此外,PP2可部分恢复被Ephrin-B1Fc所抑制的α7-nAChRs电流,PD98095则可部分恢复被Ephrin-B1Fc所抑制的α3-nAChRs电流。以上结果提示,Eph/Ephrin-B1信号可能分别通过MAPK和Src信号途径抑制急性分离的CG神经元上α3-nAChRs和α7-nAChRs的电流,表明Eph/Ephrin-B1可能参与交感神经系统功能的调控。 夏远鹏 胡波 周昱男 毛玲 戴若莲 董丽萍关键词:尼古丁乙酰胆碱受体 丝裂原活化蛋白激酶 SRC酪氨酸激酶 Bmi-1在神经母细胞瘤中的表达及意义 被引量:5 2008年 目的通过检测原癌基因Bmi-1在神经母细胞瘤(NB)中的表达以及观察其表达水平对神经母细胞瘤的影响,探讨其在神经母细胞瘤中的作用。方法用免疫组织化学和免疫印迹法检测方法分别检测人神经母细胞瘤标本和神经母细胞瘤细胞系细胞中Bmi-1的表达情况;采用逆转录病毒转染法将目的基因Bmi-1/si转染至Ⅰ型神经母细胞瘤细胞系BE-2-C细胞,通过Western免疫印迹法监测转染效果,并用软琼脂实验观察转染后的BE-2-C克隆形成能力。结果在32例人神经母细胞瘤标本中29例有Bmi-1的高表达(90.63%),且Bmi-1的表达程度的高低和NB的临床分期和临床预后密切相关(P〈0.05),Western免疫印迹实验也显示9种不同病理类型的神经母细胞瘤细胞系细胞中均有Bmi-1的高表达,其表达水平和病理类型有密切相关。在软琼脂实验中,与对照组(空白载体转染组)比较,Bmi-1/si转染后的BE-2-C细胞所形成的克隆数目不仅显著减少,克隆也明显变小。结论Bmi-1在神经母细胞瘤中高表达,其表达水平与肿瘤恶性程度密切相关,它在神经母细胞瘤的形成中起重要作用。 夏远鹏 周昱男 胡波关键词:神经母细胞瘤 BMI-1 RNA干涉 EphB/Ephrin-B1信号对睫状神经节α7-尼古丁乙酰胆碱受体电流的影响 2008年 目的探讨EphB/Ephrin-B1信号对鸡胚睫状神经节(CG)神经元上α7-尼古丁乙酰胆碱受体(α7-nAChRs)电流的影响。方法用膜片钳技术分别在培养的和急性分离的CG神经元上记录α7-nAChRs电流。细胞被随机分为:对照组、Ephrin-B1Fc处理组、IgG处理组和Ephrin-B1处理组,观察电流的变化。结果对照组、IgG组和Ephrin-B1处理组之间α7-nAChRs电流无显著差异(P>0.05),而这3组与Ephrin-B1Fc处理组之间有显著差异(P<0.05)。Ephrin-B1Fc可浓度依赖性抑制α7-nAChRs电流,该过程可在数分钟内发生,并呈现可逆性。培养的和急性分离的CG神经元Ipeak/Cm的IC50分别为0.032mg/L和1.4mg/L。结论Eph/Ephrin-B1信号可影响CG神经元α7-nAChRs的电流,提示Eph/Ephrin-B1可能参与交感神经系统功能的调控。 夏远鹏 胡波 周昱男 戴若莲 董丽萍 毛玲关键词:膜片钳技术 鸡胚 Bmi-1和N—Myc共同超表达在神经母细胞瘤发生中的作用 2008年 目的研究癌基因Bmi-1和N—Myc在神经母细胞瘤发生中的作用。方法以神经母细胞瘤细胞系SHEP1细胞为模型,采用逆转录病毒转染法转染目的基因Bmi-1和/或N—Myc,免疫印迹法检测转染效果。软琼脂实验观察获得稳定高表达Bmi-1和/或N-Myc的各组细胞的致瘤性,流式细胞术观察Bmi-1和/或N-Myc转染细胞对凋亡因子(TRAIL和抗Fas抗体)的敏感性。结果软琼脂实验显示对照组和单纯转染Bmi-1或N-Myc组均未见克隆形成,而Bmi-1和N-Myc共转染组可见克隆形成。流式细胞术发现,经各种凋亡因子作用后,与对照组相比,单纯转染N-Myc组细胞凋亡率显著升高(P〈0.05),而Bmi-1和N-Myc共转染组与单纯转染N-Myc组相比,细胞凋亡率显著降低(P〈0.05)。结论Bmi-1可以通过抑制N—Myc所致的神经母细胞瘤细胞对凋亡因子的敏感性,从而与N-Myc共同参与神经母细胞瘤的发生,是本病发生的关键环节。 毛玲 胡波 梅元武 夏远鹏 周昱男 戴若莲关键词:神经母细胞瘤 癌基因 细胞凋亡