何俊
- 作品数：10 被引量：8H指数：1
- 供职机构：安徽医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省自然科学基金上海市科委科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术更多>>
- HIV-1 HXB2株Tat蛋白在大肠杆菌中的分段表达及免疫原性分析被引量：1
- 2008年
- 目的研究对人类免疫缺陷病毒Ⅰ型HXB2株调控蛋白Tat原核表达产生影响的区域和Tat蛋白重要的抗原表位。方法用PCR方法获得Tat(1-48aa)、Tat(22-72aa)和Tat(38-101aa)DNA片段,构建其原核表达质粒pET32a-Tat(1-48aa)、pET32a-Tat(22-72aa)和pET32a-Tat(38-101aa),并转入E.coliBL21(DE3)中进行诱导表达及纯化,SDS-PAGE鉴定表达及纯化产物。采用间接ELISA方法用兔抗pET32a-Tat抗血清对三种肽段进行免疫原性分析。结果成功构建了pET32a-Tat(1-48aa)、pET32a-Tat(22-72aa)和pET32a-Tat(38-101aa)质粒,分别表达出相对分子质量(Mr)为23×103、23×103和25×103的融合肽段,其浓度分别为4.26、3.35和5.11mg/ml。间接ELISA结果表明三种融合肽段与兔抗pET32a-Tat抗血清均呈特异性结合反应,其抗体滴度分别为1:128000、1:32000、1:64000,而抗血清与pET32a蛋白仅有较弱结合。结论半胱氨酸富集区(22-37位氨基酸)对Tat蛋白的原核表达有较显著影响;Tat蛋白的N端区、碱性区和C端区是其重要的抗原表位,其中N端区的免疫原性最强。
- 陈璐潘卫曹洁卢海妹何俊蒋少华唐萍李存枚廖文婷邓松华
- 应用噬菌体展示技术构建HIV蛋白酶抑制剂的体外筛选模型
- 当前，AIDS对人类的生存和发展提出了严峻的挑战，已成为全球面临的严重公共卫生问题和社会问题。
目前针对AIDS的高效抗逆转录病毒疗法(highly active anti-retroviraltherapy，...
- 何俊
- 关键词：HIV蛋白酶抑制剂药物筛选噬菌体展示
- 文献传递
- 一种进化免疫球蛋白结合分子、其制备方法及应用
- 本发明涉及新型进化免疫球蛋白结合分子、其制备方法及其应用。本发明公开了一种分离的进化免疫球蛋白结合分子，它是具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的蛋白、或其具有免疫球蛋白结合活性的保守性变异蛋白。本发明还公开了该免...
- 潘卫蒋少华徐容贾建安沈毅珺杨华王锦红陈秋莉何俊陈璐
- 文献传递
- 进化免疫球蛋白结合分子LD5的原核表达、纯化及结合活性被引量：1
- 2007年
- 目的对新型进化免疫球蛋白(Ig)结合分子LD5进行原核表达和纯化,并鉴定其结合活性。方法将LD5基因片段克隆入原核表达载体pET32a(+),转化大肠杆菌后,IPTG诱导表达。以8mol/L尿素裂解菌体后,上清经Ni2+-NTA柱纯化,并对纯化蛋白进行SDS-PAGE及Western blot分析。以ELISA和Dot blot对LD5蛋白结合IgG、IgM活性进行鉴定。结果LD5分子在大肠杆菌中获得成功表达,表达的融合蛋白相对分子质量为59000。Western blot表明纯化的LD5蛋白能特异结合IgG。ELISA结果显示,LD5在结合IgM上较SpA具有明显的优势。结论LD5分子在大肠杆菌中已成功表达,纯化的LD5蛋白保留了天然Ig结合分子的结合活性。
- 蒋少华徐容何俊陈璐卢海妹贾建安陈秋莉潘卫
- 关键词：原核表达结合活性
- 噬菌体展示耐药突变HIV-1蛋白酶敏感切割位点六肽随机文库的构建被引量：1
- 2007年
- 目的构建耐药性突变HIV-1蛋白酶(protease PR)敏感切割位点序列体外噬菌体筛选模型,研究HIV-1蛋白酶耐药性突变与敏感切割序列的关系。方法用含随机核苷酸序列的引物PCR方法对HIV-1gag基因上的CAP2片段的PR切割位点处的氨基酸序列进行随机化,再将重组CAP2片段和NC片段拼接克隆于噬菌体展示载体LD3-pCANT-AB5S上,建立HIV-1蛋白酶靶蛋白切割位点随机化的噬菌体展示文库。结果该噬菌体展示文库库容量为2.6×106,滴度为4.1×1015TU·L-1,CAP2片段插入率为47.8%;序列分析显示切割位点中随机化的核苷酸与氨基酸均呈随机性分布。结论成功地构建HIV-1蛋白酶的敏感切割序列噬菌体筛选文库,为筛选到突变PR敏感切割序列噬菌体及研究耐药HIV-1蛋白酶抑制剂与突变PR的关系打下基础。
- 卢海妹周波潘卫贾建安王锦红温宗梅何俊陈露邓松华
- 关键词：人类免疫缺陷病毒-1蛋白酶耐药突变
- 一种精子头部轮廓提取的图像处理方法
- 本发明公开了一种精子头部轮廓提取的图像处理方法，包括如下几个步骤：步骤1：获取活精子显微成像的精子运动视频；步骤2：在所述精子运动视频中提取包含单个精子的单帧灰度图像；步骤3：从单个精子的单帧灰度图像中，获取各帧精子头部...
- 钟振声周金华张书赫何俊张粲
- 噬菌体展示免疫球蛋白结合分子定点随机突变组合文库的构建被引量：1
- 2007年
- 目的构建噬菌体展示免疫球蛋白结合分子定点随机突变组合文库,为应用各种类型免疫球蛋白对该文库进行体外分子进化筛选及结构和功能的研究打下基础。方法应用overlapping PCR制备Protein A的Z结构域。用含随机核苷酸序列的引物,制备对Z结构域的第10、13、27、28、31和32位氨基酸进行随机突变的定点随机突变体库。并在突变体片段两端引入KpnⅠ位点,3′端引入3个氨基酸大小随机连接肽的序列。经KpnⅠ酶切后随机连接,克隆于噬菌粒展示载体pCANTAB5S。克隆产物转化大肠杆菌TG1,辅助噬菌体M13K07拯救,构建噬菌体展示定点随机突变组合文库。结果该定点随机突变组合文库的转化子数目为6.4×106个,滴度为1.4×1015TU/L;文库中含0.72以上的阳性克隆,其中有2个单结构域的阳性克隆占0.15;15个样品的序列分析显示各突变位点和随机连接肽的氨基酸序列呈随机性分布。结论成功构建了噬菌体展示免疫球蛋白结合分子定点随机突变组合文库,该库库容量在一级结构上具有良好的随机性和多样性,可满足体外分子进化研究的要求。
- 何俊周霞陈璐陈秋莉王锦红蒋少华陈铭卢海妹潘卫邓松华
- 关键词：基因文库体外分子进化
- HIV-1 HXB2株蛋白酶的原核表达、纯化及其Gag蛋白CAP2NC的切割活性分析
- 2008年
- 目的:原核表达、纯化HIV-1型HXB2株蛋白酶(protease,PR),用于对HIV-1 Gag P2/NC蛋白酶切割位点序列随机突变的噬菌体展示文库的切割筛选及构建新的蛋白酶抑制剂(protease inhibitor,PI)类药物体外筛选模型。方法:根据HIV-1 HXB2株PR DNA序列设计引物,在PR序列上游添加自切割位点MGTVSFNF 8个氨基酸编码获得PR107 DNA编码序列,将PR107 DNA克隆至原核表达载体pET-32a,序列测定后转化大肠杆菌BL21 DE3进行诱导表达。表达产物经用Ni-NTA亲和柱纯化,经复性后,进行靶蛋白CAP2NC切割试验,SDS-PAGE检测切割结果。结果:成功合成了使用大肠杆菌偏好密码子的HIV-1 PRl07的DNA编码序列,序列测定显示其编码氨基酸序列与原始序列完全一致;成功构建了HIV-1 PR原核表达质粒pETa2a—PR107,转化大肠杆菌BL21 DE3经IPTG诱导后,表达出相对分子质量为30 000的HIV-1 PR融合蛋白,纯化的目的蛋白浓度为2.54 mg/ml;纯化蛋白经复性后具有对底物蛋白CAP2NC的切割活性,该作用能被PI药物抑制。结论:成功构建大肠杆菌偏好密码子带自切割位点的HIV-1 PR原核表达载体pET32a—PR107,在大肠杆菌中表达,经纯化复性获得了具有切割活性的HIV-1 PR融合蛋白。
- 陈铭潘欣贾建安何俊蒋少华陈璐姚静娟陈秋莉曹洁潘卫
- 关键词：HIV蛋白酶
- 缺失半胱氨酸富集区的HIV-1 HXB2株Tat蛋白在大肠杆菌中的高效表达及免疫原性分析被引量：5
- 2008年
- 目的删除人免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）HXB2株Tat罗白（长度101个氨基酸）的半胱氨酸富集区（22～37位氨基酸）以提高其在大肠杆菌中的表达量因子稳定性，并分析缺失半胱氨酸富集区后的Tat蛋白[Tat（ΔC）蛋白]免疫原性的改变。方法应用PCR方法对Tat基因的半胱氨酸富集区（64—111位核苷酸）进行缺失突变，获得其突变体序列[Tat（ΔC）DNA]，并构建其重组表达质粒pET-32a-Tat（ΔC）。相同的条件下将pET-32a-Tat（Δc）和pET-32a．Tat质粒转人大肠杆菌B121（DE3）中进行诱导表达及纯化。用pET-32a-Tat（ΔC）融合蛋白免疫家兔制备抗血清，ELISA和Western blot方法对抗血清进行免疫原性分析。结果pET-32a-Tat（ΔC）蛋白在大肠杆菌中的表达水平（7．12mg／m1）明显高于pET-32a-Tat蛋白（1．50mg／m1）；pET-32a-Tat蛋白在表达纯化后及25℃和4℃放置7d后均有明显二聚体的产生，而pET-32a-Tat（ΔC）蛋白则未形成二聚体；pET-32a-Tat（Δc）蛋白免疫家兔可诱导产生高滴度的抗体（1：320000），该抗体与Tat（Δc）蛋白、Tat蛋白（1—101AA）及化学合成Tat（1～86AA）蛋白均呈特异性反应。结论缺失HIV-1 Tat蛋白的半胱氨酸富集区可明显提高其原核表达水平和蛋白的稳定性并较好地保留其免疫原性，为HIV-1 Tat疫苗研究提供了一种新型免疫原。
- 陈璐邓松华曹洁何俊陈秋莉蒋少华廖文婷潘卫
- 关键词：TAT蛋白
- 一种进化免疫球蛋白结合分子、其制备方法及应用
- 本发明涉及新型进化免疫球蛋白结合分子、其制备方法及其应用。本发明公开了一种分离的进化免疫球蛋白结合分子，它是具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的蛋白、或其具有免疫球蛋白结合活性的保守性变异蛋白。本发明还公开了该免...
- 潘卫蒋少华徐容贾建安沈毅珺杨华王锦红陈秋莉何俊陈璐
- 文献传递
