龚萍
- 作品数：8 被引量：26H指数：2
- 供职机构：南京大学医学院附属鼓楼医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 血清中胎盘来源外泌体的分离与鉴定被引量：21
- 2015年
- 目的妊娠期间,胎盘可释放外泌体到母体循环,在正常妊娠或胎盘相关妊娠并发症中发挥重要作用。文中旨在建立简便、高效、低耗的母血清胎盘来源外泌体的分离纯化方法,为妊娠疾病研究奠定基础。方法蔗糖梯度离心联合2次8%PEG6000沉淀,分离纯化正常孕妇血清中胎盘来源外泌体,Western blot检测胎盘来源外泌体标记蛋白分子（CD63、CD81、PLAP）,银染法分析各密度层中所有蛋白质条带,透射电镜鉴定胎盘来源外泌体形态,动态光散射测定外泌体粒径及分布。结果通过蔗糖密度梯度离心后得到的各分层液经蛋白质SDS-PAGE胶电泳,银染后可见各蛋白分子条带清晰可见,Western blot结果显示CD63、CD81和PLAP同时表达于21%～34%蔗糖密度层,证明血清胎盘外泌体主要存在于1.09～1.16g/m L蔗糖密度层。透射电镜鉴定获得的胎盘来源外泌体形态符合一般外泌体特征,且特异表达PLAP。动态光散射测定获得的胎盘外泌体直径分布于28～91 nm,且大小均一。结论成功建立了一种简便、快捷、高效分离血清中胎盘来源外泌体的改良方法,为研究胎盘外泌体在正常妊娠及胎盘相关并发症中的作用奠定实验基础。
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- 关键词：外泌体胎盘
- 四次跨膜蛋白CD81促进人绒毛外滋养细胞失巢凋亡的初步研究被引量：2
- 2013年
- 目的:探讨四次跨膜蛋白CD81表达对人妊娠早期绒毛外滋养细胞失巢凋亡的作用。方法:构建CD81的高表达质粒(pCS2-CD81),将pCS2-CD81或CD81特异的小干扰RNA(siCD81)瞬时转染至人妊娠早期绒毛外滋养细胞(HTR-8/SVneo细胞),同时转染pCS2-EV或siRNA control作为对照组。实时荧光定量PCR(QRT-PCR)和Western blot法检测pCS2-CD81及siCD81在HTR-8/SVneo细胞中的表达效率。采用聚甲基丙烯酸2-羧乙基酯(poly-HEMA)包被的培养皿模拟细胞悬浮培养的环境,采用Annexin V/PI双染法分别检测CD81对正常贴壁生长及悬浮培养的HTR-8/SVneo细胞凋亡的影响。结果:成功构建CD81的高表达质粒(pCS2-CD81)。与转染pCS2-EV比较,瞬时转染pCS2-CD81的HTR-8/SVneo细胞高表达CD81蛋白(P<0.05);与转染siRNA control比较,siCD81有效抑制HTR-8/SVneo细胞的内源性CD81表达(P<0.05)。过表达CD81或抑制内源性CD81表达对HTR-8/SVneo细胞的普通凋亡无显著影响,但过表达CD81可显著促进HTR-8/SVneo细胞的失巢凋亡(P<0.05),抑制内源性CD81表达能减少HTR-8/SVneo细胞的失巢凋亡达15.5%(P<0.05)。结论:四次跨膜蛋白CD81促进人妊娠早期绒毛外滋养细胞的失巢凋亡。
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- 关键词：失巢凋亡
- 周期蛋白Cyclin D1对滋养细胞分化的影响
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- MiR-155靶向调节膜蛋白CD81抑制滋养细胞的迁移
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- 关键词：MIR-155CD81滋养细胞迁移子痫前期
- 膜蛋白CD81抑制原代细胞滋养细胞的侵袭
- [目的]探究四跨膜蛋白CD81对原代细胞滋养细胞(cytotrophoblast,CTB)侵袭能力的影响,从而探讨CD81在子痫前期(preeclampsia,PE)发病中的可能作用.[方法]采用蛋白质印迹(Wester...
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- 姜黄素对脂多糖诱导的滋养细胞系HTR-8/SVneo中微小RNA-155表达及细胞凋亡、侵袭的影响被引量：3
- 2016年
- 目的探讨姜黄素对脂多糖（LPS）诱导的滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞中微小RNA-155（miR-155）表达、细胞凋亡和侵袭的影响。方法体外培养滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞。实验共4组：姜黄素＋LPS组（姜黄素浓度分别为12.5、25、50μmol/L预处理后，加入100 ng/ml LPS）、LPS组（加入100 ng/ml LPS）、重组腺病毒组（加入Ad-miR-155，感染复数为100）和空白对照组。采用实时荧光定量PCR、荧光素酶报告基因活性检测法和蛋白印迹法检测姜黄素＋LPS组、LPS组和空白对照组细胞的miR-155表达水平、荧光素酶转录活性及核因子κB（NF-κB）蛋白的表达水平；细胞凋亡酶联免疫法和细胞侵袭试验检测姜黄素＋LPS组、LPS组、重组腺病毒组和空白对照组细胞凋亡和侵袭能力的情况。结果（1）实时荧光定量PCR技术结果显示，LPS组HTR-8/SVneo细胞中miR-155的表达水平为空白对照组的（2.13±0.22）倍，两组比较，差异具有统计学意义（P〈0.01）；12.5、25、50μmol/L姜黄素＋LPS组HTR-8/SVneo细胞中miR-155的表达水平分别为LPS组的（0.37±0.08）、（0.68±0.14）、（0.49±0.09）倍，分别比较，差异均有统计学意义（P〈0.05）。（2）荧光素酶报告基因活性检测法显示， LPS组荧光素酶的转录活性为空白对照组的（2.25±0.56）倍，12.5、25、50μmol/L姜黄素＋LPS组荧光素酶转录活性分别为LPS组的（0.80±0.07）、（0.74±0.05）、（0.49±0.19）倍，差异均有统计学意义（P均〈0.05）。（3）蛋白印迹法检测显示，LPS组HTR-8/SVneo细胞中p65蛋白的表达水平为1.50±0.22，明显高于空白对照组（0.95±0.25，P〈0.01）。不同浓度姜黄素＋LPS组，姜黄素浓度为12.5μmol/L时，p65蛋白表达水平为0.31±0.07，与LPS组相比，下调最明显（P〈0.01）；浓度为25、50μmol/L时，蛋白表达水平分别为0.75±0.14、0.49±0.08，分别与LPS组比较，差异均有统计学意义（P〈0.
- 洪国敏龚萍杨沐怿沈莉刁振宇胡娅莉
- 关键词：先兆子痫滋养层姜黄素细胞凋亡
- 周期蛋白Cyclin D1的表达对滋养细胞分化的影响
- 龚萍刘沫刁振宇胡娅莉
- 关键词：CYCLIN
- 姜黄素在制备治疗或预防妊娠高血压药物中的应用
- 本发明公开了姜黄素在制备预防或治疗妊娠高血压药物中的应用。本发明发现姜黄素能：1)降血压和降低尿蛋白水平；2)增加滋养细胞的迁移和侵袭，改善螺旋动脉的重塑和胎盘血流供应；3)改善胎儿宫内生长情况。在人类PE发病高风险孕妇...
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