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靶向细胞外基质磷酸糖蛋白的microRNA的筛选及鉴定: MEPE(细胞外基质磷酸糖蛋白)是2000年发现的与骨代谢和磷酸盐平衡有关的蛋白,我们发现了该基因的一个新功能,即与DNA损伤应答有关。为了更好的研究该基因的功能,本研究鉴定了靶向Mepe基因的microRNA,并检测其...; 罗维林宇翔绳纪坡于芳胡宝成; 文献传递

肿瘤睾丸抗原CT45-5在DNA损伤应答中的作用: 2013年; 目的:用建立的CT45-5-siRNA研究肿瘤睾丸抗原CT45-5在DNA损伤应答中的作用。方法:通过靶向CT45-5基因小干扰RNA(siRNA)下调CT45-5的表达,用MTT比色法检测经喜树碱和依托泊苷处理后细胞对DNA损伤诱导剂的敏感性,用流式细胞技术检测电离辐射后细胞周期的变化。结果:在DNA损伤诱导剂处理后,在脆性组氨酸三联体(Fhit)高表达细胞中下调CT45-5的表达可以使细胞表现出更强的G2期阻滞及对DNA损伤诱导剂更耐受,而在Fhit缺失表达的细胞中却没有此现象。结论:CT45-5可能是以Fhit依赖的途径参与了DNA损伤应答。; 柯波绳纪坡于芳林宇翔罗维胡宝成; 关键词：RNA干扰脆性组氨酸三联体

靶向Mepe的microRNA的筛选及功能研究: 细胞外基质磷酸糖蛋白(MEPE)是细胞外基质蛋白，它可以调节体内磷酸盐平衡，以及在骨骼和牙本质形成的形成过程中起到重要的作用。2000年，Rowe等首次在瘤源性软骨症中(TIO)的细胞中发现了细胞外基质磷酸糖蛋白。Pet...; 罗维; 关键词：MICRORNA 靶向; 文献传递

人细胞外基质磷酸糖蛋白MEPE的表达纯化及抗体制备被引量：1: 2011年; 目的原核表达、纯化人细胞外基质磷酸糖蛋白(Mepe)基因,并制备多克隆抗体。方法设计出扩增人Mepe全长基因的特异引物,通过PCR扩增出该基因片段,测序正确后插入到含GST基因的原核表达载体pGEX-KG中,以IPTG诱导表达,并经谷胱甘肽琼脂糖珠纯化融合蛋白;用纯化的蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,用ELISA测定抗体的效价,Western印迹鉴定抗体的特异性。结果原核表达了人Mepe全长基因,纯化了MEPE蛋白,并获得了抗MEPE的多克隆抗体,抗体效价达到1∶25 600,Western印迹结果显示,该抗血清能够特异识别原核及真核细胞表达的MEPE蛋白。结论 MEPE蛋白能够诱导小鼠产生具有较高效价和特异性的多克隆抗体,为进一步研究MEPE的功能奠定了基础。; 马祖兴高宁绳纪坡于芳林宇翔罗维柯波胡宝成; 关键词：细胞外基质磷酸糖蛋白表达纯化多克隆抗体

肿瘤睾丸抗原CT45-5基因小干扰RNA表达载体的构建及干扰效果鉴定被引量：1: 2012年; 目的:构建肿瘤睾丸抗原CT45家族中5号成员基因(CT45-5)的小干扰RNA(siRNA),并检测其对HeLa及HeLa/Fhit细胞内源性CT45-5基因及外源脆性组氨酸三联体(Fhit)基因表达的干扰效果。方法:根据CT45-5基因序列,通过生物信息学方法对靶向CT45-5基因的siRNA进行预测,从中筛选出2对合理的CT45-5-siRNA,将其克隆到siRNA表达载体pSilencer 2.1-U6 Hygro中,转化大肠杆菌DH5α,挑取阳性克隆进行测序鉴定;将构建的CT45-5-siRNA重组载体转染人宫颈癌细胞HeLa及HeLa/Fhit细胞,Western印迹检测siRNA对HeLa及HeLa/Fhit细胞内源性CT45-5及外源Fhit基因表达的干扰效果。结果:构建了2个CT45-5-siRNA重组质粒,其中一条对CT45-5基因具有明显的干扰作用,并且Fhit基因表达也被抑制。结论:构建的CT45-5-siRNA为与CT45-5功能相关的基因研究奠定了基础。; 柯波林宇翔绳纪坡于芳罗维马祖兴胡宝成; 关键词：小干扰RNA 脆性组氨酸三联体

靶向细胞外基质磷酸糖蛋白的microRNA的筛选及鉴定被引量：1: 2012年; 目的:寻找靶向细胞外基质磷酸糖蛋白(MEPE)基因的微小RNA(miRNA),并检测其对人HeLa细胞内源性Mepe基因表达的影响。方法:通过NCBI检索人源Mepe的3'UTR,利用miRNA预测工具TargetScan预测可能靶向Mepe的所有miRNA,通过双萤光素酶报告基因系统检测miRNA与Mepe3'UTR的结合情况,从而初步筛选出可能靶向Mepe的miRNA;同时,用Western印迹检测miRNA经转染后对Mepe基因表达的影响。结果:利用TargetScan预测出36条可能靶向Mepe的miRNA,根据分值及匹配情况从中挑选出6条进行验证;与转染空载体pGL3-cm的相对荧光素值相比,转染miR-376a的相对荧光素值降低较为明显,而当Mepe3'UTR与miR-376a结合位点突变后,miR-376a不能抑制萤光素酶的活性;Western印迹结果显示miR-376a能明显抑制MEPE的表达。结论:miRNA-376a可能是靶向Mepe基因的miRNA,为进一步研究MEPE的功能奠定了基础。; 罗维林宇翔绳纪坡于芳柯波胡宝成; 关键词：细胞外基质磷酸糖蛋白微小RNA 靶向

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罗维