熊宇泉
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：广州医学院实验医学研究中心更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 利用反式剪接核酶修复突变绿色荧光蛋白mRNA被引量：1
- 2005年
- 为构建修复突变绿色荧光蛋白(GFP)基因的反式剪接核酶,分别构建包含突变的GFP基因的XYQ5/10-pGEM重组质粒、XYQ5/10-pEGFP-C2重组质粒及用于修复该突变基因的反式剪接核酶载体trans-rib-CMV2。通过对体外共转录XYQ5/10-pGEM和trans-rib-CMV2重组质粒的RNA产物进行RT-PCR检测核酶细胞外剪接效果;通过XYQ5/10-pEGFP-C2和trans-rib-CMV2重组质粒共转染HeLa细胞检测核酶细胞内的剪接效果。结果显示,XYQ5/10-pGEM、XYQ5/10-pEGFP-C2及trans-rib-CMV2重组质粒构建成功,反式剪接核酶在细胞外及细胞内都可以修复突变基因。虽然效率不高,但为今后更大规模地研究设计反式剪接核酶打下了基础。
- 熊宇泉李冰
- 关键词：核酶反式剪接
- Ⅰ型内含子核酶的研究进展被引量：1
- 2003年
- 核酶具有特异识别和切割靶 RNA的特点 ,从而可以抑制一些特异基因产物的表达 ,而 型内含子核酶 ,不但具有剪切功能 ,而且可以进行顺式剪接及反式剪接。随着人们对 型内含子核酶的功能结构也有了进一步认识 ,相继用 型内含子核酶对 p5 3突变 m RNA及镰形红细胞贫血等遗传性疾病致病基因 m RNA的修复做了大量的研究 。
- 熊宇泉李冰
- 关键词：乙肝病毒丙肝病毒
- 截短绿色荧光蛋白突变体反式剪接修复核酶
- 2005年
- Ⅰ型内含子核酶经过设计特定的信号引导序列(IGS),可特异性地定点剪接目的基因RNA,从而在RNA水平达到修复病变基因的目的。以四膜虫材料,克隆了其26SrRNA内含子核酶基因,体外转录证实该I型内含子核酶具有完全的自我剪接的功能。为检测该核酶的反式剪接功能,构建了缺失后半段564bp基因序列的绿色荧光蛋白(GFP)的截短突变体重组质粒XYQ5XYQ10pEGFPC2,并证实其失去了发射绿色荧光的活性。利用PCR和分子克隆技术,构建了以上EGFP突变体的反式剪接修复核酶ptransribCMV2,该核酶载体以克隆的26SRNA内含子为核心,选择EGFP编码区194位TG为剪接位点,以188193位设计IGS序列,核酶3′端携带195890bp的EGFP基因序列,连接于pRCCMV2真核表达载体中。体外转录突变EGFP的原核表达载体XYQ510pGEM和ptransribCMV2,以混合转录产物为模板进行RTPCR,电泳及测序证实产物中含有反式剪接修复的野生型EGFPmRNA,从而证实构建的反式剪接核酶具有体外反式剪接功能。将截短突变重组质粒XYQ5XYQ10pEGFPC2与核酶质粒ptransribCMV2共转染Hela细胞,用荧光显微镜观察转染结果,发现有少量共转染的Hela细胞发出绿光;RTPCR检测出野生型EGFPmRNA,证明构建的反式剪接核酶具有体内反式剪接的功能,但其反式剪接效率低。
- 李冰熊宇泉涂洪斌刘启才邹东霆周问渠陈耀勇
- 关键词：绿色荧光蛋白
- 定点诱变自我剪接Ⅰ型内含子核酶
- 2005年
- 目的验证嗜热四膜虫核酶自我剪接功能,定点诱变Ⅰ型内含子核酶及检测其自我剪接功能。方法PCR扩增嗜热四膜虫核酶基因连入pGEM-T载体,通过重组PCR获得3个非发夹区域定点诱变的Ⅰ型内含子核酶基因,连入pGEM-T载体,分别进行体外转录。结果嗜热四膜虫核酶及诱变的3个核酶自我剪接功能完全。结论非发夹区诱变的核酶不改变其自我剪接的功能,为以后反式剪接核酶的设计构建提供了更多的选择基础。
- 熊宇泉李冰
- 关键词：定点诱变
