耿芳宋
- 作品数：28 被引量：166H指数：7
- 供职机构：青岛大学医学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学化学工程环境科学与工程更多>>
- 五氯酚对人胎盘碱性磷酸酶构象与活力的影响被引量：3
- 1999年
- 目的；研究三氯酚对人胎盘碱性磷酸酶构象与活力的影响。材料和方法：应用荧光光度法检测不同浓度五氯酚溶液中人胎盘碱性磷酸酶的内源荧光发射光谱，用分光光度法测定其活力。结果：五氯酚浓度小于1．0mmol／L时,平衡态酶的内源荧光发射强度及其活力迅速下降，发射峰位明显红移；继续提高五氨酸浓度，其荧光发射强度与活力逐渐下降，发射峰位仍在缓慢红移；五氯酚浓度增至5．0mmol／L时，荧光淬灭，但酶仍保密51．4％的活力。结论：五氯酚抑制了酶活力，并使其构承发生了改变，但其整体构象并未破坏。
- 耿芳宋童家明王秀丽
- 关键词：碱性磷酸酶五氯酚构象
- 农甲氮氧化物及农甲吡咯衍生物半合成研究被引量：1
- 1992年
- 用过氧化氢氧化纯农吉利甲素,再用过氧化氢酶分解剩余的过氧化氢,结果制备出含一分子结晶水的农甲氮氧化物(MNO·H_2O).直接用醋酸酐作用于MNO,在纯N_2条件下可制备出浅黄色晶体,经熔点、紫外光谱、质谱分析及元素分析等实验证实为农甲吡咯衍生物(MPD).
- 陈培勋任化瑛耿芳宋尹福生
- 关键词：药物副作用抗癌药
- VEGF基因表达抑制对胃腺癌细胞SGC-7901增殖的影响被引量：10
- 2006年
- 目的:研究siRNA(small interfering RNA)对人胃腺癌细胞SGC-7901的VEGF基因表达的影响．方法:选择血管内皮生长因子(VEGF)基因为靶基因,设计两组针对VEGF mRNA的小干扰RNA,合成DNA寡核苷酸链,体外转录合成siRNA．以人胃腺癌细胞系SGC-7901为靶细胞,应用脂质体转染的方法,将siRNA导入细胞．采用Hoechst33258染色观察siRNA作用于SGC-7901细胞中出现凋亡小体的情况．流式细胞仪检测细胞周期的改变,RT-PCR法比较转染前后VEGF mRNA表达水平的变化, ELISA法检测细胞培养液中VEGF蛋白分泌量的变化．结果:两组siRNA转染后均能有效地抑制 SGC-7901细胞的生长,诱导细胞凋亡产生凋亡小体．siRNA作用于SGC-7901细胞．其细胞周期均发生了明显的变化,主要表现为G0／G1 期细胞增多,S期细胞减少,并使细胞周期阻滞于G0／G1期(siRNA1组,siRNA2组G0／G1期VS 对照组G0／G1期:75．04％,76．52％ vs 58．37％, P<0．01;siRNA1组,siRNA2组S期vs对照组S 期:17．82％,16．73％ vs 39．52％,P<0．01),而其他组则无明显变化．VEGF mRNA的表达量大幅度减少(siRNA1组,siRNA2组vs对照组: 0．638±0．078,0．656±0．085 vs 0．941±0．046, P<0．01),相对应的VEGF蛋白水平也显著降低(164．7±22．7,166．3±26．6 vs 414．0±61．5, P<0．01),而其他组siRNA转染后则无上述作用．结论:应用靶向VEGF基因RNA干扰技术可以有效抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖．
- 徐文华葛银林徐宏伟王秀丽耿芳宋
- 关键词：SGC-7901RNA干扰血管内皮细胞血管内皮生长因子
- 五氯酚对人胎盘碱性磷酸酶抑制的研究
- 监测人胎盘碱性磷酸酶在不同浓度五氯酚溶液(<1.0mmol/L)测定五氯酚对其抑制的类型及pH对其抑制的影响。结果显示:低浓度的五氯酚使酶活性及其荧光强度迅速下降,发射峰位明显红移;继续提高五氯酚浓度,其活性与荧光强度迅...
- 耿芳宋王秀丽童家明刘宏明
- 关键词：生物化学五氯酚碱性磷酸酶胎盘
- 文献传递
- 人类胎盘碱性磷酸酶在脲变性时构象与活力的变化被引量：1
- 2000年
- 目的：研究脲对人胎盘碱性磷酸酶构象与活力的影响。方法：用分光法测定不同浓度脲溶液中的紫外差光谱及活力；荧光法测其荧光光谱。结果：低浓度脲（＜2．0 mol／L），酶的差光谱在262 nm出现负峰；荧光强度下降，发射峰位蓝移；脲浓度为0．5 mol／L时，酶活力仍维持在原有水平，此后随脲浓度增加，酶活力下降。继续提高脲浓度，差光谱在276 nm出现正峰；荧光强度回升，发射峰位红移；酶活力迅速下降。当脲浓度高达8．0 mol／L时，差光谱在262 nm又出现负峰；荧光强度继续增强，发射峰位还在红移；酶仍有部分活力。结论：酶活力变化慢于其构象变化，但酶活性部位较整个分子而言更易受到脲的扰乱。
- 耿芳宋王秀丽童家明刘洪明
- 关键词：碱性磷酸酶构象
- ω-6脂肪酸脱氢酶基因在乳腺癌细胞内的表达和作用被引量：8
- 2005年
- 为探讨ω- 6脂肪酸脱氢酶基因fat -1在人类乳腺癌细胞MCF- 7中表达和对其生长的作用,将fat -1基因插入到腺病毒载体中,构建腺病毒重组载体(Ad·GFP·fat1) .通过包装细胞系(2 93)产生重组腺病毒,感染MCF 7细胞.用核糖核酸酶保护性分析技术,检测fat -1基因在MCF- 7细胞内的表达,细胞增殖试剂盒(MTT)和凋亡染色试剂盒染色分析fat 1基因对MCF- 7细胞增殖和凋亡的影响,用酶联免疫分析花生酸类(eicosanoids)前列腺素E2 (prostaglandinE2 )的含量.结果显示,腺病毒介导的fat- 1基因能在MCF- 7细胞内有效异源表达,抑制MCF -7细胞的增殖且导致凋亡,前列腺素的含量也明显地减少.结果说明,fat- 1基因在乳腺癌的基因治疗中具有良好利用价值.
- 葛银林耿芳宋张金玉张峥李馨田润华徐文华
- 胍变性人胎盘碱性磷酸酶复性的研究
- 2005年
- 目的:检测胍变性人胎盘碱性磷酸酶复性过程中活力与构象的变化,探讨其折叠机制。材料与方法:应用分光光度法测定复性酶活力,荧光法检测其内源荧光发射光谱。结果:盐酸胍变性平衡态酶用直接稀释法及空气氧气法进行复性,其最适复性条件是:胍稀释浓度0.5mol/L,温度4℃,复性液pH9.0,时间24小时。在此条件下,测得不同浓度盐酸胍变性酶经稀释复性后的酶活力及其内源荧光光谱显示:变性中间态酶复性后的酶活力及内源荧光光谱可恢复至天然态,而变性酶只能部分恢复,且随胍浓度的增加,恢复愈加困难,当胍浓度为6.0mol/L时,变性态酶经复性后的酶活力与内源荧光光谱则完全不能恢复。结论:变性中间态酶可完全复性,而变性态酶仅部分复性,且与复性条件有关。
- 葛银林李馨曾艳霞耿芳宋
- 关键词：碱性磷酸酶盐酸胍复性
- 硫酸软骨素对HL60细胞增殖分化的影响(英文)被引量：2
- 2006年
- 背景:硫酸软骨素是细胞基质的重要成分,可促进肿瘤细胞的增殖,抑制其转移。目的:观察硫酸软骨素对阿霉素作用下HL60细胞增殖分化的影响。设计:开放性实验。单位:青岛大学医学院生物化学与分子生物学教研室。材料:实验于2003-09/2004-12在青岛大学医学院生物化学与分子生物学研究室完成。HL60细胞株购于中国医学科学院上海细胞库,为人类早幼粒白血病细胞。牛软骨硫酸软骨素(Sigma)。方法:①细胞传代培养后将进入对数增殖期的细胞用含体积分数0.1灭活胎牛血清的RPMI1640培养液配制成1×108L-1的细胞悬液,分装于45个培养瓶中,4mL/瓶。②取分装好的细胞悬液15瓶,按照0,5,25,50,75mg/L浓度加入硫酸软骨素,每个浓度平行3瓶,空白对照组加入等量的0.01mol/L磷酸盐缓冲液。采取细胞计数法测定硫酸软骨素处理后的HL60细胞密度的变化。③取分装好的细胞悬液30瓶,分为硫酸软骨素+阿霉素组、硫酸软骨素组,各15瓶。按照0,5,25,50,75mg/L浓度向两组加入硫酸软骨素,每个浓度平行3瓶,空白对照组加入等量的0.01mmol/L磷酸盐缓冲液。用MTT法测定硫酸软骨素处理后的HL60细胞加入阿霉素后细胞存活率的变化。④取分装好的细胞悬液15瓶,按照0,5,25,50,75mg/L浓度加入硫酸软骨素,每个浓度平行3瓶,空白对照组加入等量的0.01mol/L磷酸盐缓冲液。用酶联免疫反应测定各组细胞的酸性磷酸酶活性,观察其对细胞分化的影响。主要观察指标:①硫酸软骨素对HL60细胞增殖的影响。②硫酸软骨素+阿霉素对HL60细胞存活率的影响。③硫酸软骨素对HL60细胞酸性磷酸酶活性的影响。结果:共制备细胞悬液45瓶,全部进入结果分析。①与空白对照组比较,不同浓度硫酸软骨素处理24h后HL60细胞密度均显著升高(P<0.01);且50,75mg/L硫酸软骨素浓度组的细胞密度升高尤为明显,但两组间比较基本相似(P>0.05),说明在�
- 徐文华虞浩张银亭葛银林耿芳宋
- 关键词：细胞增殖细胞计数HL-60细胞多柔比星
- 铅对人类胎盘碱性磷酸酶活力与构象的影响被引量：4
- 1998年
- 目的研究铅对人类胎盘碱性磷酸酶（ＰＬＡＰ）的作用，以探讨铅影响胎儿发育的分子机制。②方法应用分光光度法测定不同浓度Ｐｂ（ＮＯ３）２存在下的ＰＬＡＰ活力，用荧光法检测其荧光光谱的变化；用双倒数作图法确定Ｐｂ（ＮＯ３）２对该酶的抑制类型。③结果低浓度的Ｐｂ（ＮＯ３）２（＜０．５０ｍｍｏｌ／Ｌ）对酶活力无明显影响，但其内源荧光强度略有增加，发射峰位蓝移；当Ｐｂ（ＮＯ３）２的浓度为０．７５ｍｍｏｌ／Ｌ时，酶活力及其荧光强度均迅速下降；当Ｐｂ（ＮＯ３）２浓度＞０．７５ｍｍｏｌ／Ｌ时，随其浓度的增加，酶活力与其荧光强度逐渐降低，但发射峰位蓝移减少；当Ｐｂ（ＮＯ３）２浓度为１０．００ｍｍｏｌ／Ｌ时，酶活力丧失，荧光熄灭。Ｐｂ（ＮＯ３）２是ＰＬＡＰ的反竞争性抑制剂，其抑制常数为１．４０ｍｍｏｌ／Ｌ．④结论Ｐｂ（ＮＯ３）２抑制了ＰＬＡＰ的活力，并使其构象发生了改变，这可能是铅影响胎儿发育的重要分子机制之一。
- 耿芳宋刘洪明王秀丽武淑芳张社华
- 关键词：胎盘碱性磷酸酶铅中毒胎儿
- 葡萄球菌核酸酶去C-末端的肽段52和79的分离纯化
- 1997年
- ①目的建立金黄色葡萄球菌核酸酶（ＳＮａｓｅ）去Ｃ－末端的肽段５２（ＳＮ５２）和７９（ＳＮ７９）的提纯方法，并鉴定其纯度。②方法应用低温乙醇沉淀，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－１００柱层析分离纯化；十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）和高效液相层析（ＨＰＬＣ）鉴定其纯度。③结果纯化的ＳＮ５２和ＳＮ７９经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定均为单一区带；ＨＰＬＣ鉴定均为一个峰。④结论纯化的ＳＮ５２和ＳＮ７９已达电泳纯和层析纯，可用于其构象的比较研究。
- 耿芳宋静国忠许小幸段建华段建华
- 关键词：葡萄球菌核酸酶肽片段
