王健楠
- 作品数：6 被引量：10H指数：3
- 供职机构：东北农业大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：黑龙江省教育厅科学技术研究项目黑龙江省自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 传染性胰腺坏死病毒VP3基因的分段表达及其抗原表位区域分析被引量：3
- 2011年
- 采用PCR方法克隆了传染性胰腺坏死病毒（IPNV）VP3四段相互重叠的基因片段L1、L2、L3和L4,将PCR产物分别连接到原核表达载体pGEX-6P1和pET32a上,经酶切、PCR、测序鉴定,获得重组质粒pGEX-6P1-VP3（L1）、pET32a-VP3（L2）、pGEX-6P1-VP3（L3）和pGEX-6P1-VP3（L4）;将其分别转化感受态菌Rosetta和BL21,经1.0mmol/L的IPTG诱导,分别得到大小为32 kD、26 kD、30 kD和31 kD的目的蛋白。经Western-blo-ting分析,4段目的蛋白中,只有VP3（L1）和VP3（L4）基因片段所表达的融合蛋白能与IPNV阳性血清反应,说明VP3蛋白的免疫优势区域集中在该蛋白的1~70和143~206氨基酸之间。该融合蛋白可以作为诊断抗原用于建立ELISA诊断方法。本实验为进一步精确定位VP3蛋白抗原表位奠定了基础。
- 刘巍巍赵丽丽赵永欣王健楠李一经葛俊伟乔薪瑗刘敏
- 关键词：VP3基因原核表达抗原表位
- 传染性胰腺坏死病毒VP2抗原表位区间接免疫荧光方法的建立
- 传染性胰腺坏死病毒(Infectious pancreatic necrosis virus，IPNV)是引起传染性胰腺坏死病(Infectious pancreatic necrosis，IPN)的病原，IPN是一种以...
- 王健楠
- 关键词：水产养殖鱼病防治病毒侵染
- 传染性胰腺坏死病病毒分离株VP2基因抗原表位区融合表达及免疫特性的分析被引量：5
- 2012年
- 利用RT-PCR方法扩增出IPNV-ZYX分离株主要结构蛋白VP2的抗原表位区基因(616bp),命名为IPNV VP2 COE,将其克隆到pCold TF表达载体中构建重组质粒pCold TF-VP2COE,在大肠杆菌BL21(DH5α)感受态表达,经SDS-PAGE电泳分析,表达蛋白约78 ku,用镍离子亲和层析柱纯化该蛋白,制备抗血清,间接ELISA结果显示,IPNV(ATCC VR-1318)细胞培养物与鼠抗VP2 COE蛋白血清发生特异性反应,效价为1∶12 800;间接免疫荧光结果显示,鼠抗VP2 COE血清可与黑龙江某渔场已知感染IPNV虹鳟肝组织产生特异性的荧光,以上两项结果表明,表达IPNV VP2 COE蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性,为IPNV检测方法的建立及疫苗的制备提供理论依据。
- 王健楠赵丽丽刘立月连科迅李一经葛俊伟刘敏
- 关键词：VP2免疫特性
- 传染性胰腺坏死病毒分离株VP2基因抗原表位区融合表达及免疫特性的分析
- 本实验利用RT-PCR方法扩增出IPNV-ZYX分离株主要结构蛋白VP2的抗原表位区基因(616 bp),命名为IPNV VP2 COE,将其克隆到pCold TF表达载体中构建重组质粒pCold TF-VP2 COE,...
- 刘敏王健楠张英姜艳萍唐立杰李一经
- 关键词：免疫特性
- 草鱼气泡病继发烂尾病的病因分析与防治被引量：1
- 2012年
- 草鱼又称鲩鱼，是我国淡水渔业的主要养殖品种之一，因其肉质富含不饱和脂肪酸、微量元素以及口感良好，深受人们的喜爱。但是草鱼易患多种疾病，经常造成巨大经济损失。辽中八三草鱼成鱼养殖池塘，在2011年4月末投放50克左右的草鱼种4．2万尾。5月20日杀虫后遇大晴天发生气泡病，并继发了烂尾、烂鳃病。笔者对草鱼气泡病继发烂尾病的发病情况进行了整理，现把发病原因与防治技术简要介绍如下：
- 王健楠唐绍林刘敏
- 关键词：草鱼种气泡病烂尾病病因分析继发养殖品种
- 传染性造血组织坏死病毒糖蛋白基因的原核表达及抗原性分析
- 2011年
- 应用RT-PCR方法扩增了传染性造血组织坏死病毒IHNV-ZYX株编码的糖蛋白(G)基因,将G基因克隆至原核表达载体pET30b,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中得到了表达。SDS-PAGE分析表明,重组菌诱导后得到了预期大小的G蛋白。提取G蛋白的包涵体,并制备抗血清。间接ELISA和Western-blotting结果显示,重组表达的G蛋白与天然的IHNV G蛋白一样具有抗原性。试验为进一步研究IHNV G基因的免疫保护作用,为灵敏高效的检测传染性造血组织坏死病的方法的建立和基因工程疫苗的研制奠定了基础。
- 赵永欣赵丽丽刘巍巍王健楠李一经乔薪瑗葛俊伟刘敏
- 关键词：G基因克隆表达抗血清
