赵丽丽 作品数:87 被引量:237 H指数:9 供职机构: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室 更多>> 发文基金: 黑龙江省自然科学基金 国家自然科学基金 国家科技支撑计划 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 轻工技术与工程 更多>>
共表达传染性胰腺坏死病毒VP2和VP3蛋白重组乳酸菌载体的构建及其免疫学评价 赵丽丽关键词:口服免疫 适配体对霉菌毒素致小鼠肠道菌群失调的缓解作用 目的:探索已筛选获得的适配体对玉米赤霉烯酮(ZEN)引起的小鼠肠道菌群失调的缓解作用.方法:采用体重19.43±1.8gSPF雌性BABL/c小鼠12只,随机分为三组,于腹腔左侧注射ZEN甲醇溶剂对照组(甲醇浓度0.5 ... 张圆圆 王玉娥 张贺 赵丽丽 陈洪岩关键词:适配体 玉米赤霉烯酮 粪便菌群 表达猪细小病毒VP2蛋白的重组干酪乳杆菌诱导小鼠产生特异性抗体 被引量:14 2008年 【目的】研究以干酪乳杆菌作为传递抗原活载体表达猪细小病毒主要免疫保护性抗原VP2蛋白的免疫特性。【方法】将构建的重组猪细小病毒(PPV)VP2基因的细胞表面表达型载体pPG-VP2电转化干酪乳杆菌L.casei393,获得阳性重组菌pPG-VP2/L.casei393。重组菌以2%乳糖为诱导物,在MRS培养基中进行诱导,经SDS-PAGE、Westernblot及间接免疫荧光分析,目的蛋白获得表达。将重组菌及空质粒菌株分别口服接种Balb/c小鼠,收集粪便及肠黏液样品测定小鼠产生抗VP2的特异性sIgA,采集血液样品测定小鼠产生抗VP2的特异性IgG,并对获得的抗体进行PPV中和活性的测定。【结果】重组干酪乳杆菌pPG-VP2/L.casei393免疫小鼠能够产生明显的抗PPV的sIgA和IgG抗体水平,其对PPV的中和效价分别为1﹕24和1﹕128。【结论】为PPV重组乳酸菌口服疫苗的研制提供了重要的物质基础。 徐义刚 崔丽春 葛俊伟 唐丽杰 赵丽丽 李一经关键词:猪细小病毒 VP2蛋白 干酪乳杆菌 黏膜免疫 传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白的干酪乳杆菌表达系统构建 被引量:3 2008年 根据传染性胰腺坏死病毒(IPNV)VP3蛋白的全基因序列,设计并合成引物,以IPNV(ATCC VR-1318)细胞培养毒提取的核酸为模板,对传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白的干酪乳杆菌表达系统进行了构建研究。结果显示:进行RT-PCR扩增得到截短的VP3基因约615 bp目的片段,将其克隆到pMD18-T Simple载体,经酶切、PCR扩增和序列测定后显示目的片段正确;将目的片段分别亚克隆到乳酸菌细胞表面表达型载体和分泌表达型载体,电转化于干酪乳杆菌,获得了阳性重组菌株。结果表明,通过本实验方法可构建表达传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白的干酪乳杆菌表达系统,为实现IPNV VP3蛋白在乳酸菌中的表达及免疫原性研究奠定了基础。 刘敏 赵丽丽 葛俊伟 欧笛 王相清 刘弈 张伟 李一经关键词:VP3基因 表达载体系统 乳酸杆菌表达传染性胰腺坏死病毒VP2和VP3蛋白对虹鳟的免疫原性 传染性胰腺坏死病毒(Infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)感染鲑科鱼类死亡率高,给鲑鳟养殖业造成巨大经济损失.乳酸杆菌具有多种益生特性,其中作为免疫接种的疫苗载体诱导黏膜免疫... 刘敏 赵丽丽 张琳琳 张英 唐立杰 葛俊伟 李一经传染性胰腺坏死病毒抗原捕捉ELISA检测方法的建立及应用 传染性胰腺坏死病毒(Infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)属双RNA病毒科 (Birnaviridae) 水生双RNA病毒属(Aquabirnavirus)的成员,是引起鲑科... 刘敏 连科迅 李一经 唐立杰 赵丽丽 乔薪瑗关键词:单克隆抗体 重组猪乳铁蛋白N端的高效表达及抑菌活性检测 被引量:6 2010年 为获得表达猪乳铁蛋白基因的重组菌株,并检测其表达的重组猪乳铁蛋白抑菌活性,应用RT-PCR方法从泌乳3d后母猪乳腺组织中扩增了猪乳铁蛋白N端1077bp的PLF-N基因片段,与GenBank上发表的4株猪乳铁蛋白基因序列相比,核苷酸同源性均达到99%以上。为了得到高表达量的PLF-N基因,以扩增的PLF-N片段为参考模板,经过密码子优化,全基因合成了编码猪乳铁蛋白N端的基因PLF-NS。将其定向插入到原核表达载体pET-30b中,转化大肠杆菌BL21,获得了表达PLF-NS的重组菌pET-PLF-NS/BL21;经IPTG诱导,并对表达条件进行优化,以及通过SDS-PAGE和Western blotting分析均表明猪乳铁蛋白得到了正确表达,其产物分子量约为42kDa,最优表达条件下蛋白表达量占菌体总蛋白的32%,表达产物以包涵体形式存在。包涵体经裂解、纯化、复性处理后纯度达到98%。用琼脂孔穴扩散抑菌法检测表明重组猪乳铁蛋白具有明显的抑菌作用。表明通过基因优化对表达量低的基因进行改造使之高效表达,是一种提高表达效率的有效手段。 哈卓 赵丽丽 于晓旭 宗晓淋 毛雅元 张健 李一经 葛俊伟 乔薪瑗 唐丽杰关键词:抑菌活性 鸭圆环病毒双拷贝串联基因组感染性克隆的构建 以鸭圆环病毒(Duck circovirus,DuCV)FJ/2011分离株基因组为模板,构建带遗传标记的双拷贝串联基因组感染性克隆(pEGFP-2DuCV).应用分子生物学技术,以GenBank数据库中本实验室测得的D... 文辉强 武永淑 张晓娜 廉传江 赵丽丽 韩凌霞 陈洪岩关键词:鸭圆环病毒 感染性克隆 文献传递 鸭瘟重组病毒穿梭载体的构建及分析 被引量:1 2017年 目的本研究目的为构建重组穿梭载体,拯救带有增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)重组病毒,为重组二联苗的研制奠定基础。方法选择已经证实的US区域的US2-SORF3、US7-US8和UL区域中的UL15-UL18的非编码区作为插入位点构建穿梭载体P-US2-SORF3-EGFP,P-UL15-UL18-EGFP,P-US7-US8-EGFP。在已感染疫苗毒的鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblasts,CEFs)中转染穿梭载体,经细胞同源重组,收集细胞上清,进行噬斑筛选及纯化。结果成功构建了三个带有EGFP标签的穿梭载体,p Blusecript II SK构建的穿梭载体未成功筛选到重组噬斑而用p UC18构建的穿梭载体成功筛选到重组噬斑。结论拯救鸭瘟重组毒的研究中,p Blusecript II SK载体可能不是最佳的适用载体,也可能是插入位点为病毒复制的必须区。 刘柏含 牛银杰 赵丽丽 弥春霞 陈洪岩关键词:鸭瘟病毒 穿梭载体 水貂阿留申病毒、肠炎病毒与犬瘟热病毒多重PCR检测方法的建立与应用 目的水貂阿留申病、病毒性肠炎与犬瘟热并称影响水貂健康的三大疫病,拟建立一种可同时检测三种病毒的多重PCR检测方法。方法针对三种病毒基因保守区分别设计了3对特异性引物,对貂阿留申病毒(ADV)和水貂肠炎病毒(MEV)的DN... 马芹 王元智 闫文卓 赵丽丽 陈洪岩 陆涛峰关键词:多重PCR 水貂阿留申病毒 水貂肠炎病毒 犬瘟热病毒 文献传递