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牛血清白蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定: 2007年; 用牛血清白蛋白(BSA)免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,培养上清经过双抗体夹心法检测初步筛选分泌鼠IgG的杂交瘤细胞,将此种杂交瘤细胞注射小鼠产生的腹水用间接ELISA法筛选,获得4株能稳定分泌抗BSA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2A5、3A3、3G6、4A8。鉴定结果显示,2A5细胞分泌IgG2a/κ,其余3株细胞分泌IgG1/κ;纯化后4株腹水单抗的纯度达90%以上,对BSA的ELISA滴度均可达到1∶100000以上;4株单抗均不与人以及马、猪、羊、兔、豚鼠等血清发生交叉反应;W estern B lotting试验证明4株单抗均识别分子量为68000的BSA;用间接ELISA法测定4株单抗相对亲和力及相对敏感度大小依次为3A3>2A5>3G6>4A8;杂交瘤细胞株连续培养3个月以及冻存半年后复苏,细胞生长良好,杂交瘤细胞分泌的抗体效价稳定。; 余健周志军彭祥兵朱华松施金荣余模松; 关键词：牛血清白蛋白单克隆抗体酶联免疫吸附试验

检测狂犬病疫苗抗原含量的竞争ELISA的建立及初步应用被引量：4: 2007年; 为满足狂犬病疫苗生产质量控制的需要,建立了竞争ELISA检测法,通过标准曲线的确定来计算病毒抗原的相对含量,并与ELISA间接法和双抗体夹心法结果进行比较。该方法方便准确,可对培养中的病毒抗原相对含量进行全程监测,是一种有效的辅助检测手段。; 周志军孙文施金荣朱华松陈雪婷王平; 关键词：竞争ELISA 狂犬病毒抗原含量

抗牛血清IgG单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定: 研究背景现行的疫苗纯化工艺尚不能将细胞培养液中的牛血清完全清除,牛血清中球蛋白含量低于白蛋白,但其吸附性强于后者,洗涤后疫苗中残余球蛋白含量与白蛋白含量接近。牛血清球蛋白作为过敏原其残存不容忽视。目的成功研制抗牛血清Ig...; 王平周志军施金荣朱华松余模松; 文献传递

乙型脑炎病毒SA14-14-2毒株生物学和免疫学特性: 流行性乙型脑炎又称日本脑炎(Japanese Encephalitis Virus,JEV),JEV(JEV)以蚊为传播媒介,主要引起中枢神经系统损害的一种严重的人畜共患传染病。预防和控制该病尤为重要。目前尚无治疗JE的...; 施金荣王平周志军余模松; 文献传递

H5N1重组禽流感病毒样颗粒免疫原性研究被引量：3: 2013年; 目的对构建的H5N1重组禽流感病毒样颗粒(VLPs)进行初步免疫原性探讨,并与H5N1全病毒灭活疫苗(WIV)进行体液免疫和细胞免疫的比较。方法在0周和3周分别以纯化H5N1重组禽流感病毒样颗粒、H5N1全病毒灭活疫苗及pH7.2 PBS腿部肌肉注射BALB/c小鼠,于不同时间收集血清,以血凝抑制试验(HI)和血清IgG抗体酶联免疫吸附试验(ELISA)评估体液免疫,CD4+、CD8+T细胞亚群及酶联免疫斑点试验(ELISPOT)评估细胞免疫,并以同型毒株滴鼻攻击,观察小鼠存活率。结果病毒样颗粒各组和全病毒灭活疫苗免疫后小鼠血清ELISA IgG效价均有升高;中和抗体效价除病毒样颗粒120 ng/只免疫剂量外其他免疫小鼠HI效价均达1︰40;小鼠脾CD4+T淋巴细胞亚群分类:全病毒灭活疫苗组(600μg/只)为36.56%;病毒样颗粒组(120 ng/只,600 ng/只,2 500 ng/只)分别为26.58%,32.20%,29.25%;PBS组为26.65%;CD8+T淋巴细胞亚群分类:全病毒灭活疫苗组(600 ng/只)为10.78%;病毒样颗粒组(120 ng/只,600 ng/只,2 500 ng/只)分别为1 3.53%,14.24%,1 3.35%;PBS组为10.69%。ELISPOT试验统计学数据显示,病毒样颗粒和全病毒灭活疫苗的小鼠脾单个核细胞分泌IFN-γ细胞与PBS组有显著性差异;小鼠保护性试验结果显示,除病毒样颗粒120 ng/只免疫剂量小鼠的存活率为87.5%外,其他病毒样颗粒实验组小鼠均为100%,PBS对照组为12.5%。结论 H5N1重组禽流感病毒样颗粒能诱导体液免疫和细胞免疫,并能抵御同型病毒株的攻击,可作为H5N1人用禽流感的候选疫苗。; 黄晓媛施金荣韩锡鑫邱阿明杨晓明; 关键词：H5N1禽流感病毒病毒样颗粒免疫原性

人用禽流感疫苗的研究进展: H5N1亚型高致病性禽流感病毒(highly pathogenic avian influenza,HPAI)于1959年首先发现于禽鸟类。1997年,香港报道了人类感染H5N1亚型高致病性禽流感病毒的病例,证实其不仅能...; 施金荣杨晓明黄晓媛; 文献传递

H5N1亚型禽流感病毒样颗粒的构建及鉴定被引量：2: 2013年; 目的构建同时含有禽流感H5N1疫苗株NIBRG-14的血凝素(Hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(Neurami-nidase,NA)及基质蛋白(Matrix protein,M1)3种基因的重组杆状病毒,并研究其表达产物的生物学特性。方法利用RT-PCR法从禽流感H5N1疫苗株NIBRG-14中扩增HA、NA及M1基因片段,并同时亚克隆至杆状病毒穿梭质粒pFastBacDual中,构建重组杆状病毒穿梭质粒,转染Sf9昆虫细胞,包装重组杆状病毒Bacmid-HA-NA-M1a。Westernblot法和血凝试验检测HA、NA及M1蛋白在Sf9细胞中的表达;表达的重组蛋白经超速离心浓缩及蔗糖密度梯度离心纯化后,透射电镜观察病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)的形态结构,并通过单向免疫扩散(Single radialimmunodiffusion,SRID)试验检测HA的含量。结果已成功构建了重组杆状病毒,该病毒可同时表达HA、NA及M1蛋白,3种蛋白可自行组装成VLPs,并分泌至细胞培养上清中,血凝效价可达1∶64;重组杆状病毒表达的蛋白形成的VLPs与NIBRG-14标准抗血清形成沉淀环,浓缩及纯化后的重组蛋白HA含量分别为36和27μg/ml;透射电镜观察可见直径约100 nm的典型流感VLPs。结论构建的重组杆状病毒可表达VLPs,为禽流感新型疫苗的研制奠定了基础。; 施金荣杨晓明杜慧邱阿明王妮丹黄晓媛; 关键词：病毒样颗粒杆状病毒表达系统

乙型脑炎病毒SA14-14-2株和P3株单克隆抗体的制备及应用: 2012年; 目的制备乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)SA14-14-2株(简称SA)和P3株单克隆抗体,并进行初步应用。方法分别用JEV SA株减毒活疫苗和P3抗原免疫BALB/c小鼠,交叉加强免疫1次,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,选择人血清白蛋白(HSA)抗体阴性、JEV抗体阳性的克隆进行2次亚克隆,制备腹水并纯化,对单抗及杂交瘤细胞进行鉴定。用SA单抗建立捕获ELISA法检测JEV抗体,竞争抑制ELISA法和双抗体夹心ELISA法检测JEV抗原含量。结果经3次融合,共获得4株分泌抗JEV SA株单抗和3株分泌抗JEV P3株单抗的杂交瘤细胞株,未获得SA株和P3株共同决定簇的单抗;7株单抗均为IgG1型,特异性良好,但均无中和活性;SA株单抗的相对亲和力大小为:3D1>5E3>6H3>4F12,均能识别SA相同的抗原表位;P3株单抗的相对亲和力大小为:1C7>5H12>3C4,均能识别P3相同的抗原表位;7株杂交瘤细胞于液氮中放置6个月及体外连续培养3个月后,制备的腹水抗体效价保持稳定;用5E3株SA单抗建立了检测JEV抗体的捕获ELISA法及检测JEV抗原的竞争抑制ELISA法和双抗体夹心ELISA法。结论已制备了JEV SA株和P3株单克隆抗体;以SA株单抗建立的捕获ELISA法检测JEV抗体比间接ELISA法更简便,且敏感性更高,对于抗原浓度高的样品,双抗体夹心ELISA法检测比竞争抑制ELISA法更有优势。; 周志军施金荣朱华松王平余模松; 关键词：乙型脑炎病毒单克隆抗体酶联免疫吸附测定

抗牛血清IgG单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定被引量：3: 2011年; 用牛血清IgG免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,用含山羊血清的培养基培养细胞,上清用间接ELISA法筛选。获得4株能稳定分泌抗牛血清IgG的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为1G5、2A8、3F5、4C5。其中2A8为IgG2a,其余3株为IgG1;腹水单抗的ELISA滴度均超过10-5;除3F5株单抗与山羊血清有交叉反应外,1G5、2A8、4C5株与人、马、猪、羊、兔、豚鼠等血清均不发生交叉反应;4株单抗与制备病毒性疫苗的基质液呈阴性反应;4株单抗识别分子量为160kD的牛血清IgG的两个不同抗原表位;4株单抗相对亲和力大小依次为4C5>2A8>1G5>3F5,相对敏感度依次为2A8>4C5>3F5>1G5;4株杂交瘤细胞株的染色体计数均大于90条,连续培养三个月以及冷冻保存半年后复苏,细胞生长良好。使用这些单抗建立的双抗体夹心法检测生物制品中的残留牛血清IgG。; 王平周志军施金荣朱华松余模松; 关键词：单克隆抗体酶联免疫吸附试验

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