公共文化服务平台

ELISA抗体检测试剂盒在狂犬病毒特免血浆筛选中的初步应用被引量：8: 2005年; 用SepharoseCL6B纯化灭活的狂犬疫苗原液作为包被抗原,对试剂盒生产工艺进行优化,根据ELISA相对效价和SNT效价的正相关性,设计出能满足大规模狂犬病毒特异性免疫血浆筛选需要的合理可靠的收浆方案。; 周志军尹斌朱华松肖鼎昌秦丽; 关键词：ELISA 病毒纯化狂犬病毒抗体

人巨细胞病毒特异性免疫球蛋白原料血浆的筛选被引量：2: 2009年; 用北京贝尔公司的人巨细胞病毒（HCMV）IgG检测试剂盒检测5-6月入库的武汉生物制品研究所（WIBP）下属四个浆站共7433份普通血浆,HCMV-IgG阳性率为36%-55%。建立内部参考品Pc1、Pc2、Pc3、Pc4,用德国赛润公司的HCMV-IgG定量检测试剂盒对内部参考品进行标定,效价分别为648、962、1757、2940PEI-U/ml。以A450值〉Pc1为标准确定HCMV-IgG阳性的献血员名单,按照检疫期的要求,利用浆站管理系统软件查找献血员前3个月的血浆编号,统计建档。逐批检测符合检疫期的建档血浆,以A450值〉Pc2为标准收集阳性血浆,以A450值〉Pc3为标准投料,进行人巨细胞免疫球蛋白（HCMV-IG）的低温乙醇纯化。通过成品的中和试验结果决定收浆方案是否可行。; 彭良俊林连珍高菲方亮李策生周志军; 关键词：效价

微量滴定板上的弹性蛋白酶动态显色法检测α_1-蛋白酶抑制剂活性被引量：3: 2011年; 目的建立微量滴定板上的弹性蛋白酶动态显色法(以下简称微量滴定板法),用于α1-蛋白酶抑制剂(α1-Pro-teinase inhibitor,α1-PI)的活性检测。方法以微量滴定板为载体,将不同量的α1-PI样品与定量的弹性蛋白酶混合,通过适宜的显色底物对剩余的弹性蛋白酶活性进行测定。用酶标仪测定405 nm处A值的变化,分析试验的有效性,并计算α1-PI样品的活性。优化微量滴定板法的实验条件。用BCS凝集分析仪检测α1-PI的活性,确认样品的工作浓度。采用两种方法检测19份样品的α1-PI活性,分析二者的相关性。结果微量滴定板法的最优实验条件为:样品加样体积50μl,标准曲线范围为(2～14)μg/ml;弹性蛋白酶稀释度为1∶1 400,体积100μl;孵育时间15 min;底物稀释度为1∶10,体积50μl;连续监测A405值10 min。微量滴定板法和BCS法检测19份样品的相关系数大于0.99。结论微量滴定板法检测α1-PI活性的时间更短,同一样品不同稀释度之间检测结果的变异率更低,且检测结果与BCS法相关性良好,可替代全自动的BCS法,降低检测成本。; 周志军林连珍方亮周雁翔李策生彭良俊; 关键词：Α1抗胰蛋白酶胰弹性蛋白酶滴定分析法 BCS

人破伤风类毒素特免血浆筛选试验中两种抗体检测方法的比较: 应用酶联免疫法(ELISA)和间接血凝法(IHA)对1014份破伤风类毒素全程免疫后人血浆进行抗体水平检测,比较两者的收浆合格率,合格浆符合率以及与动物实验的相关性.结果表明两者收浆合格率均达80﹪.ELISA法与IHA...; 朱华松周志军尹斌李健; 关键词：破伤风类毒素全程免疫酶联免疫法间接血凝法; 文献传递

检测人凝血因子Ⅷ蛋白质含量的BCA法的优化及验证被引量：20: 2013年; 目的优化检测人凝血因子Ⅷ(FⅧ)蛋白质含量的BCA法,并进行验证。方法对BCA法检测人FⅧ的蛋白质含量进行优化:模拟试管法进行化学反应,微量板法进行读数和计算;对优化后的BCA法的耐用性、标准曲线的线性和范围、准确性、重复性、中间精密性进行验证,并与传统的钨酸沉淀法、免疫散射比浊法和优化的凯氏定氮法的检测结果进行比较。结果 BCA法检测人血白蛋白(human serum albumin,HSA)蛋白质含量的可信区间为100～800μg/ml。甘氨酸和赖氨酸的浓度小于125 mmol/L时,对BCA法检测结果无干扰;以HSA作为标准品绘制的标准曲线的可信区间为62.5～1 000μg/ml,人FⅧ工艺样品在以HAS和BSA作为标准品绘制的两种标准曲线下的检测值差异无统计学意义(P>0.05);BCA法的准确性、重复性、中间精密性均符合验证要求;BCA法检测结果与优化后的凯氏定氮法相关性良好。结论优化了检测人FⅧ蛋白质含量的BCA方法,该法用于人FⅧ生产工艺中间品的质量控制是可行的。; 周志军李策生李陶敬林连珍彭焱吴凡邹炜; 关键词：蛋白质含量凯氏定氮法

牛血清白蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定: 2007年; 用牛血清白蛋白(BSA)免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,培养上清经过双抗体夹心法检测初步筛选分泌鼠IgG的杂交瘤细胞,将此种杂交瘤细胞注射小鼠产生的腹水用间接ELISA法筛选,获得4株能稳定分泌抗BSA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2A5、3A3、3G6、4A8。鉴定结果显示,2A5细胞分泌IgG2a/κ,其余3株细胞分泌IgG1/κ;纯化后4株腹水单抗的纯度达90%以上,对BSA的ELISA滴度均可达到1∶100000以上;4株单抗均不与人以及马、猪、羊、兔、豚鼠等血清发生交叉反应;W estern B lotting试验证明4株单抗均识别分子量为68000的BSA;用间接ELISA法测定4株单抗相对亲和力及相对敏感度大小依次为3A3>2A5>3G6>4A8;杂交瘤细胞株连续培养3个月以及冻存半年后复苏,细胞生长良好,杂交瘤细胞分泌的抗体效价稳定。; 余健周志军彭祥兵朱华松施金荣余模松; 关键词：牛血清白蛋白单克隆抗体酶联免疫吸附试验

人凝血因子Ⅷ中试纯化工艺的质量控制被引量：13: 2013年; 目的对以PEG沉淀结合离子交换层析制备的人凝血因子Ⅷ(human coagulation factorⅧ,FⅧ)的中试纯化工艺进行全程质量控制。方法收集FⅧ中试纯化工艺的样品,采用凝固法检测FⅧ凝固活性、BCA法检测总蛋白含量,计算比活性;采用免疫浊度法检测白蛋白(albumin,ALB)、IgG、纤维蛋白原(fibrinogen,FIB)及纤维连接蛋白(fibronectin,FNC)含量;采用双抗体夹心ELISA法检测FⅧ及von Willebrand因子(von Willebrand factor,vWF)抗原含量;采用SDS-PAGE及Western blot法分析FⅧ特异性;参考《中国药典》(三部)2010版检测成品中PEG、Tween 80及磷酸三丁酯[tr(in-butyl)phosphate,TNBP]残留量。结果层析去掉了大部分杂蛋白,层析后比活性提高了近20倍,原液比活性达到66.92 IU/mg。PEG沉淀和DEAE层析纯化,基本去除了ALB、IgG、FIB和FNC,仅有少量FⅧ抗原及活性损失,原液主要成分为FⅧ和vWF。DEAE层析洗脱峰样品在相对分子质量约95 000和72 000之间可见一条特异性条带,与FⅧ轻链(相对分子质量80 000)及冻干FⅧ国家标准品条带位置相符。PEG、Tween 80及TNBP残留量均符合《中国药典》(三部)2010版规定的FⅧ质量标准。结论本中试纯化工艺可制备出高纯度、高比活性的FⅧ。; 李策生周志军胡勇邢延涛李陶敬林连珍彭焱邹光荣; 关键词：凝血因子纯化

检测狂犬病疫苗抗原含量的竞争ELISA的建立及初步应用被引量：4: 2007年; 为满足狂犬病疫苗生产质量控制的需要,建立了竞争ELISA检测法,通过标准曲线的确定来计算病毒抗原的相对含量,并与ELISA间接法和双抗体夹心法结果进行比较。该方法方便准确,可对培养中的病毒抗原相对含量进行全程监测,是一种有效的辅助检测手段。; 周志军孙文施金荣朱华松陈雪婷王平; 关键词：竞争ELISA 狂犬病毒抗原含量

人纤溶酶活性动态显色检测方法的建立及验证被引量：3: 2017年; 目的建立人纤溶酶(plasmin,Plm)活性的动态显色检测方法,并进行验证。方法用微量滴定板作为载体,将不同活性浓度的Plm(1.0、0.5、0.25、0.125、0.062 5、0.031 25 IU/ml)分别与不同浓度的发色底物S-2251(2.0、1.0、0.66、0.33 mg/ml)混匀,连续监测10 min,测定反应体系吸光值变化率(ΔA/min),确定方法的反应参数。同时对方法的选择性、线性范围、定量下限、准确度、精密性、特异性及稳定性进行验证。采用建立的方法检测Plm纯化样品。结果确定定量上限为0.6 IU/ml,底物浓度为0.66 mg/ml;监测5 min时校正标样及质控样品回收率为92.0%~111.8%,定量下限样品回收率为96.5%~118.0%。注射用水、稀释液、尿激酶(Urokinase,UK)、6-氨基己酸(6-Aminocaproic acid,EACA)、人纤溶酶原(plasminogen,Plg)等组分的响应低于定量下限响应的8.22%,并低于内标响应的0.86%,表明该方法具有良好的选择性;线性范围为0.05~0.6 IU/ml,校正标样回收率在96.8%~111.2%之间,R2≥0.99;定量下限为0.05 IU/ml,定量下限处准确度在115.2%~116.2%之间,CV≤5.0%;高、中、低浓度质控样品检测结果准确度在102.3%~111.8%之间;批内CV值≤7.7%,批间CV值≤5.2%;0.5μg/ml UK对Plm活性检测无影响,EACA浓度在0.05~0.2 mol/L之间及Plg浓度低于0.3 mg/ml时对Plm活性检测结果无影响;Plm质控样品复溶后在室温及2~8℃放置1 h不影响检测结果。Plm纯化样品活性回收率为91.84%。结论本方法具有良好的准确度、精密度、特异性及稳定性,可用于工艺样品中Plm活性的检测。; 岳胜兰周志军彭焱林连珍李陶敬邢延涛汪菲菲李策生胡勇; 关键词：酶活性

人源抗乙型肝炎病毒表面抗原基因工程IgG全抗体的表达、纯化及初步鉴定被引量：2: 2007年; 目的对人源抗乙型肝炎病毒表面抗原的基因工程IgG全抗体进行表达、纯化及初步鉴定。方法用含Fc片段抗-HBsAg Fab抗体基因的载体pAC-HBs-Fc,与杆状病毒线性DNA共转染昆虫细胞sf9,产生重组抗-HBsAg的全抗体。以不同浓度的HBsAg包被酶标板孔,用间接ELISA法检测培养上清中抗体的表达及特异性;用蛋白G亲和层析柱进行抗体的纯化,并对纯化的抗体进行SDS-PAGE、Western blot和竞争性ELISA分析。结果上清中表达的重组IgG抗体仅与HBsAg呈阳性反应,特异性良好,纯化后其纯度达97.1%。经SDS-PAGE和Western blot分析可见,IgG抗体轻链和重链的相对分子质量分别约为27000和55000,为人源IgG抗体。CHO表达的HBsAg和血源性HBsAg能竞争性抑制该重组IgG抗体与E.coli表达的HBsAg反应,其抑制率分别为55.9%和81.9%。结论人源抗乙型肝炎病毒表面抗原的基因工程IgG全抗体可在杆状病毒载体表达系统中成功表达。; 黄仕和周志军彭祥兵詹骞张爱华闭兰余模松梁米芳; 关键词：乙型肝炎病毒表面抗原基因工程抗体杆状病毒纯化

渝B2-20050021-1　渝公网安备 50019002500403号　违法和不良信息举报中心　互联网出版许可证　新出网证(渝)字10号

周志军

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

周志军

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈