史涛平
- 作品数：7 被引量：18H指数：3
- 供职机构：中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省卫生厅科研基金湖北省科技攻关计划更多>>
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- microRNA-34a靶向抑制Notch-1基因对膀胱癌J82细胞增殖和迁移的影响被引量：2
- 2012年
- 目的探讨microRNA-34a（miR-34a）通过靶向抑制Notch-1基因表达对人膀胱癌J82细胞增殖和迁移的影响。方法查询基因组数据库，应用基因预测软件进行生物信息学分析，预测miR-34a可能靶向调控Notchl基因；实时定量逆转录聚合酶链反应和蛋白印迹法分别检测16例浸润性膀胱癌组织及质粒转染的膀胱癌J82细胞的miR-34a和Notchl表达情况；萤光素酶实验检测miR-34a与Notchl基因的结合位点；将miR-34a表达质粒转染J82细胞，新型四唑氮盐化合物比色法和迁移实验评估miR-34a对细胞增殖和迁移的影响。结果浸润性膀胱癌组织miR-34a的表达中位数为0．016，四分位数间距0．018；Notchl基因表达中位数为2．765，四分位数间距2．156；癌旁组织miR．34a表达中位数为0．042，四分位数间距0．059；Notchl基因表达中位数为2．312，四分位数间距1．365，组间差异均有统计学意义（P〈0．01）；浸润性膀胱癌组织的Notchl蛋白表达量为0．857±0．197，癌旁组织为0．648±0．171，组间差异有统计学意义（P〈0．01）。质粒转染J82细胞，miR-34a表达质粒组miR-34a的表达量为（2．408±0．789）×10-4，对照质粒组为（0．153±0．029）×10-4（P=0．0026）；miR-34a表达质粒组Notchl基因表达量为3．001±0．106，对照组为4．998±1．053（P=0．0308）；miR-34a表达质粒组Notchl蛋白表达量为0．747±0．050，对照组为0．988±0．102（P=0．0215）；miR-34a表达质粒组细胞萤光素酶活性为0．422±0．028，对照组为2．392±0．148（P〈0．0001），组间差异均有统计学意义；miR-34a表达质粒组细胞增殖受到抑制，细胞迁移数量为179．3±21．02，对照组为269．7±23．71，组间差异有统计学意义（P=0．0078）。结论miR-34a可与Notchl基因的3’非翻译区（3’UTR）结合靶向抑制Notchl基因表达，进而抑制了膀胱癌J82细胞的增殖和迁移。
- 姚志勇张超马鑫朱鸣阳张瑜史涛平司马晋艾青刘尚文黄庆波杨素霞张旭
- 关键词：膀胱肿瘤MIR-34A基因靶向抑制
- 膀胱移行细胞癌错配修复基因hMLH1、hMSH2、hMSH3启动子甲基化状态的研究被引量：2
- 2008年
- 目的探讨错配修复基因hMLH1、hMSH2、hMSH3在膀胱移行细胞癌中启动子甲基化和蛋白表达的相关性。方法采用甲基化特异聚合酶链反应（MSP）检测正常膀胱上皮组织（13例）及膀胱移行细胞癌组织（57例）hMLH1、hMSH2、hMSH3启动子甲基化状态，免疫组织化学检测其蛋白表达。结果在正常膀胱上皮中，hMLH1、hMSH2、hMSH3均未发现启动子甲基化；在肿瘤组织中，hMSH2未发现启动子甲基化，hMLH1、hMSH3启动子甲基化阳性率分别为36．8％、49．1％，与正常组织比较差异均有统计学意义（P〈0．01），但在不同肿瘤分级（G1、G2、G3）间及不同临床分期（浅表性、浸润性）间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。免疫组织化学显示：hMLH1、hMSH2、hMSH3蛋白表达在正常膀胱上皮组织中，阳性表达率分别为100％、100％、92．3％，与肿瘤组织阳性表达率分别为59．6％、52．6％、40．4％，两者比较差异有统计学意义（P〈0．01），但在不同临床分期（浅表性、浸润性）间比较差异无统计学意义（P〉0．05），且hMSH2、hMSH3蛋白阳性表达率随肿瘤分级的增加显著降低，G1与G3比较差异有统计学意义（P〈0．05）。在肿瘤组织中，hMLH1和hMSH3启动子甲基化与蛋白表达具有极显著相关性（P〈0．01）。结论hMLH1、hMSH3蛋白表达受其启动子甲基化的调控，hMSH2蛋白表达不受其启动子甲基化的调控。错配修复基因hMLH1、hMSH2、hMSH3蛋白表达的缺失可能参与了膀胱移行细胞癌的发生。
- 郎斌张旭傅斌张军许凯艾星史涛平朱宏刚陈军
- 关键词：膀胱癌启动子甲基化
- DNMT1、DNMT3b siRNA重组质粒转染对人膀胱癌细胞DNMTs表达的影响及其生物学效应被引量：2
- 2010年
- 目的:探讨DNMT1、DNMT3b基因在膀胱癌发生发展中的作用。方法:①将DNMT1、DNMT3bsiRNA重组质粒分别单独和共同转入人膀胱癌细胞系BIU-87;②半定量RT-PCR和Western Blot分别检测DNMT1和DNMT3b基因mRNA和蛋白水平的变化;③用MTT法观察各组细胞生长曲线,流式细胞术观察细胞生长周期及凋亡率的变化。结果:单独和共同转染DNMT1(或DNMT3b)mRNA、蛋白表达量明显下降,能影响BIU-87的生长曲线,使细胞增殖减慢,并使细胞周期阻滞于G_1期,明显提高细胞调亡率;转染空质粒和单独转染DNMT3b siRNA重组质粒对BIU-87细胞的生长和增殖无明显影响。结论:联合转染DNMT1、DNMT3b siRNA重组质粒,可同时下调DNMT1和DNMT3b在BIU-87细胞中的表达,并能在体外抑制BIU-87细胞生长,促进细胞凋亡发生,其效果优于单独转染的重组质粒。单独转染DNMT3b siRNA重组质粒对BIU-87细胞的生长和增殖无明显影响。
- 吴振启张旭刘毅徐华史涛平权伟合李虎宜张有顺
- 关键词：膀胱癌
- microRNA-34a的表达对膀胱癌细胞系J82生物学行为的影响被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨microRNA-34a(miR-34a)的外源性表达对人膀胱癌J82细胞生物学行为的影响。方法:将miR-34a表达质粒或对照质粒转染J82细胞,实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-34a在转染细胞中的表达水平,细胞计数法、流式细胞术、Transwell侵袭实验分别检测外源性miR-34a表达后J82细胞增殖、凋亡、周期和侵袭能力的变化情况。结果:miR-34a表达质粒组与对照组比较,其miR-34a表达诱导性升高(P=0.002 6),细胞增殖受到抑制(P=0.000 1),细胞凋亡率增加(1.237%±0.116%vs 5.497%±0.293%;P<0.000 1),细胞周期阻滞于G0～G1期(54.510%±1.501%vs 62.200%±0.754%;P=0.001 5);细胞侵袭能力降低,(65.01±11.79)vs(34.33±9.71),P=0.025 4。结论:在膀胱癌J82细胞中增加miR-34a的表达,可抑制细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡和周期阻滞,并通过影响上述细胞生物学行为降低肿瘤细胞恶性度,miR-34a在膀胱癌细胞系中发挥潜在的抑癌基因作用。
- 姚志勇张超马鑫朱鸣阳张瑜史涛平杨素霞张旭
- 关键词：膀胱癌增殖凋亡MIR-34A
- 小儿后腹腔镜输尿管切开取石术及其疗效观察被引量：3
- 2008年
- 目的探讨小儿后腹腔镜输尿管切开取石术的技术要点及临床应用价值。方法采用后腹腔镜技术行小儿输尿管切开取石术16例，其中9例分别于术前行体外冲击波碎石术（ESWL）、输尿管镜取石术（URL）或二者结合而失败，7例术前未行其他治疗；结石直径1．2～2．2cm，平均（1．62±1）．35）cm。输尿管上段结石12例，输尿管中段结石4例，右侧4例，左侧12例，男11例，女5例．年龄3～14岁，平均7岁。结果16例患儿取石均成功。手术时间40～150min，平均（61．31±29．51）min，术中出血量5～25ml，平均（12．19±7．06）ml；术中无脏器损伤及气体栓塞等严重并发症。患儿均于术后1～2d恢复饮食和下床活动。3～5d拔引流管。1周出院，术后漏尿1例。平均随访8个月（3-36个月），患儿肾输尿管积水均明显好转，无结石复发和输尿管吻合处狭窄。结论小儿后腹腔镜输尿管切开取石术是安全有效的方法，可部分代替传统开放性手术，对于较大的输尿管上段结石可作为首选的治疗方法。
- 周辉霞马鑫张旭李爽张国玺王保军史涛平居正华王超
- 关键词：外科手术腹腔镜输尿管结石
- DNMT1和DNMT3b基因在人膀胱癌组织和细胞中的表达及意义被引量：5
- 2009年
- 目的探讨DNA甲基转移酶1(DNMT1)和DNA甲基转移酶3b(DNMT3b)在人膀胱癌组织和人膀胱癌细胞系BIU-87中的表达及意义。方法用免疫组织化学法分别检测DNMT1和DNMT3b蛋白在24例膀胱癌组织和10例正常膀胱组织中的阳性表达率;用RT-PCR和Western blot分别检测DNMT1和DNMT3b基因在人膀胱癌细胞系BIU-87中mRNA表达水平和蛋白表达水平。结果在24例膀胱癌组织中,DNMT1阳性表达率为(75.29±2.51)%,而在10例正常膀胱组织中的阳性表达率为(12.61±1.57)%,二者之间的差异具有显著性意义(P<0.05);DNMT3b在24例膀胱癌组织中的阳性表达率为(70.91±2.86)%,在10例正常膀胱组织中的阳性表达率仅为(10.16±1.22)%,二者差异亦具有显著性意义(P<0.05);在人膀胱癌细胞系BIU-87中,通过RT-PCR和Western blot均检测到DNMT1和DNMT3b基因mRNA和蛋白的表达。结论在膀胱癌组织中,DNMT1和DNMT3b蛋白的表达较正常膀胱组织明显增加,说明DNMT1和DNMT3b的高表达可能与膀胱癌的发生发展有关;DNMT1和DNMT3b在人膀胱癌细胞系BIU-87中存在表达。
- 吴振启张旭刘毅徐华史涛平权伟合李虎宜张有顺
- 关键词：DNA甲基转移酶1DNA甲基转移酶3B膀胱肿瘤
- 靶向Notch1基因siRNA真核表达载体的构建与鉴定被引量：3
- 2008年
- 目的:构建并鉴定靶向Notch1基因的siRNA真核表达载体。方法:根据Notch1基因cDNA序列,设计靶向目的基因的3个siRNA靶序列,将其插入U6启动子下游,克隆到真核表达载体pGsensil中,并进行酶切鉴定和DNA测序鉴定。采用脂质体介导法将构建好的3个siRNA表达载体分别转染T24人膀胱癌细胞中,荧光下观测转染效率。RT-PCR检测Notch1基因mRNA在转染前后的表达。结果:转染48h后3个siRNA表达载体均不同程度的抑制了Notch1 mRNA的表达。酶切鉴定及DNA测序结果显示插入片断正确。结论:成功构建的靶向Notch1的siRNA真核表达载体,具有抑制Notch1基因mRNA表达的功能,可能为膀胱癌基因治疗研究提供一个新的方向。
- 艾星居正华吴准史涛平王保军徐华刘双林吴正启胡建庭周辉霞张旭
- 关键词：NOTCH1小分子干扰RNA真核表达载体
