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丙型肝炎病毒RNA多聚酶在昆虫细胞中的表达被引量：5: 2000年; HCVNS5B基因片段克隆入BAC TO BACTM 重组杆状病毒表达系统的pFASTHTc载体质粒 ,转化DH10BACTM感受态细菌获得重组的Bacmid质粒 ,将重组Bacmid质粒转染Sf9细胞 ,获得的重组杆状病毒可表达目的蛋白。免疫印迹和体外活性检测表明 ,所表达蛋白为HCVNS5B蛋白 ,具有多聚酶活性。; 兰水云郑玲洁胡芸文沈重邱海军袁正宏; 关键词：丙型肝炎病毒 RNA多聚酶分子克隆转染

丙型肝炎病毒全长cDNA模板的构建及鉴定被引量：9: 2004年; 目的　构建具有功能的丙型肝炎病毒 (HCV)全长cDNA克隆。方法　应用长模板RT PCR法扩增 1份上海地区HCV感染者血清的RNA(基因型为 1b) ,分段扩增、融合拼接成 9 2kb的基因片段 ,克隆入含有HCV基因两端非编码区序列的载体作为模板。为检测此过程是否发生对特定变异株的选择 ,分析 4个独立克隆的HVR1序列。对原核细胞中表达的HCV核心蛋白、NS3蛋白酶及解旋酶 ,以蛋白印迹实验确证其免疫反应性。并构建NS3 4A SEAP表达系统检验NS3的蛋白酶活性。结果　获得丙型肝炎病毒全长cDNA模板。不同克隆间HVR1序列存在较大差异 ,提示长模板RT PCR所制备HCVcDNA具有HCV基因准种 (quasispecies)的特性。该模板编码基因在原核细胞内得到高效表达 ,并具有良好的免疫反应性。在NS3 4A SEAP表达系统内 ,NS3可切割、释放其下游的SEAP ,具有蛋白酶活性。结论　本工作为构建全长功能性HCVcDNA模板及感染性克隆奠定了基础。; 毛红霞胡芸文吴瑛兰水云袁正宏; 关键词：丙型肝炎病毒全长CDNA 克隆逆转录聚合酶链反应

丙型肝炎病毒基因组3'末端非编码区及RNA多聚酶的研究: 该研究首先通过对上海地区丙型肝炎患者感染的HCV毒株进行研究,克隆、分析了HCV基因组3'末端非编码区(3'NCR).然后应用B<,AC-TO>-B<,AC><'TM>重组杆状病毒表达系统对HCV依赖RNA的RNA多聚酶...; 兰水云; 关键词：丙型肝炎病毒 RNA多聚酶 HCV基因

慢性HCV感染者中分离的不同长度3′UTR-PolyU/UC段对IRES介导的翻译及NS5B合成RNA影响被引量：1: 2004年; 目的　研究丙型肝炎病毒 3′非编码区 (3′UTR)及不同长度PolyU UC段对内在核糖体进入位点 (IRES)介导翻译的影响以及对NS5B聚合酶合成RNA的影响。方法　通过构建含有HCVIRES、荧光素酶 (fireflyluciferase)报道基因和内含不同长度PolyU UC区的 3′UTR序列的系列重组质粒 ,采用体外翻译和细胞转染等方法检测报道基因表达的水平。结果　体外翻译实验和细胞转染实验显示 3′UTR对IRES介导的翻译具有增强作用 ,在体外翻译体系中这种增强作用与PolyU UC区的长度相关 ,而在细胞中则与PolyU UC区的长度无明显相关性 ;3′UTR对共转染的重组NS5B质粒的复制活性具有抑制作用 ,这种抑制作用也与PolyU UC区长度不成正比。结论　HCV 3′UTR与蛋白翻译及RNA合成有关 ,在细胞中并不与PolyU UC区的长度相关。; 王华叶荣兰水云袁正宏; 关键词：慢性HCV感染翻译 RNA

丙型肝炎病毒3'端非编码区、RNA多聚酶与细胞蛋白间的相互作用: 袁正宏兰水云王华胡芸文叶荣毛红霞闻玉梅; 该项目克隆了丙型肝炎病毒（HCV）基因组3'端非编码区（3'NCR），获得了含有不同长度Poly（U/UC）区的3'端非编码区克隆。研究表明获得的RNA多聚酶可以RNA为模板合成互补链，具有RNA依赖的RNA多聚酶活性。...; 关键词：; 关键词：丙型肝炎病毒细胞蛋白基因复制

庚型肝炎病毒在血液透析患者中感染情况及基因同源性分析被引量：5: 1998年; 目的探讨庚型肝炎病毒(HGV)在维持性血液透析(HD)患者中的流行情况及感染相关因素。方法应用套式逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测50例HI)患者血清HGV RNA,并分析其与透析时间、输血、肝功能损害及丙型肝炎病毒(HCV)、乙型肝炎病毒(HBV)感染的关系。结果 HD患者HGV感染率达14%,远高于正常对照人群。HGV感染相关因素分析提示;随着透析时间的延长,输血次数的增加,HGV感染率明显增高;同时HGV伴发HCV感染的发病率明显增高(43% vs.5%,P<0.01),并增加了肝功能损害的机率(29%vs 12%,P<0.05)。对HGV基因5’NCR区序列分析发现,7名阳性患者中有6名患者的序列完全相同,另一名患者仅有一个碱基不同。结论 HD患者是HGV感染的高危人群,其高发生率可能与输血有关。HGV多与HCV同时感染,并可能诱发肝损害。HD患者HGV基因有高度同源性,提示有可能为同一病毒株感染所致。; 陆福明袁正宏樊淑玲胡芸文丁峰兰水云林善锬; 关键词：血液透析庚型肝炎病毒 DNA

RNA病毒感染性转录体的制备被引量：5: 1998年; 构建感染性转录体已成为研究RNA病毒复制、表达、致病机制等的有力工具。感染性转录体可通过cDNA克隆经体内或体外转录获得,也可通过聚合酶链反应(PCR)扩增产物直接转录获取。DNA聚合酶引起的点突变、cDNA克隆的稳定性、转录体长度多态性、病毒基因组的5’和3’端序列等均可影响转录体的感染性。; 兰水云; 关键词：RNA病毒 CDNA 克隆

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兰水云