田冬青
- 作品数：6 被引量：13H指数：2
- 供职机构：中国兽医药品监察所更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 产气荚膜梭菌多重PCR定型方法的建立
- 针对产气荚膜梭菌α、β、ε、ι毒素设计了四对特异性引物,以经厌氧培养12-16h的产气荚膜梭菌菌落为模板, 对本所保存的产气荚膜梭菌参考菌株进行多重PCR扩增,经过PCR反应条件的优化,A、B、C、D、E各型产气荚膜梭菌...
- 田冬青蒋玉文陈小云杨京岚丁家波
- 关键词：产气荚膜梭菌多重PCR毒素
- 文献传递
- 产气荚膜梭菌α毒素基因的克隆、表达及其抗血清的制备被引量：2
- 2015年
- 本试验通过设计并合成1对引物,PCR扩增B型产气荚膜梭菌C58-2株α毒素完整成熟肽序列,并将其插入到pGEM-T Easy载体中,构建克隆载体pGEM-T-α。对克隆载体pGEM-T-α进行EcoRⅠ和HindⅢ的双酶切,将得到的1 125bp片段以正确的阅读框架定向克隆于pET-28a(+)中,然后将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)plys宿主菌中,37℃、1.0 mmol/L IPTG诱导该片段获得良好表达。经SDS-PAGE分析,其表达的蛋白约为46.1ku,与预期大小一致。Western blotting结果显示,该重组α毒素蛋白可被A型产气荚膜梭菌定型血清识别,表明该重组α毒素蛋白具备与天然毒素相似的反应原性。重组α毒素蛋白在菌液上清、超声波裂解上清和超声波裂解沉淀中均有分布,且以包涵体表达为主,表明重组α毒素蛋白可同时在胞外、周质和胞浆表达。小鼠毒力试验结果表明,重组α毒素蛋白不具有毒性。毒素—抗毒素中和试验结果表明,该抗血清具有α毒素特异性。以重组α毒素蛋白作为抗原免疫家兔制备血清,效价测定结果表明每1mL重组α毒素蛋白抗血清可以中和100MLD的A型毒素。
- 彭小兵田冬青李旭妮彭国瑞王猛蒋玉文
- 关键词：产气荚膜梭菌Α毒素克隆表达抗血清
- 产气荚膜梭菌ε毒素基因的克隆、表达及其特异性血清的制备
- 从B型产气荚膜梭菌C58-2中扩增出了ε毒素完整成熟肽基因的片段，克隆到pGEM-T Easy载体后，选取阳性重组子，经PCR和双酶切鉴定后，提取质粒并双酶切，最终克隆到pET28a载体中，并转化到BL21(DE3)受体...
- 田冬青蒋玉文杨京岚陈小云丁家波彭小兵屠伟英
- 关键词：产气荚膜梭菌基因克隆重组蛋白大肠杆菌
- 文献传递
- 产气荚膜梭菌次要毒力因子的研究进展被引量：1
- 2010年
- 产气荚膜梭菌是一种重要的人兽共患病的病原体,可引起人的食物中毒和动物胃肠疾病。近年来,对产气荚膜梭菌的次要外毒素、肠毒素和酶类研究取得了一定的进展。综述了产气荚膜梭菌的θ和κ外毒素、肠毒素以及神经氨酸酶的组成、结构、理化性质、分子生物学等方面的研究进展。
- 田冬青蒋玉文杨京岚陈小云孙晔
- 关键词：产气荚膜梭菌毒素神经氨酸酶
- 产气荚膜梭菌ε毒素基因的克隆、表达及其抗血清的制备被引量：5
- 2010年
- PCR扩增B型产气荚膜梭菌C58-2株ε毒素完整基因,并将其插入到pGEM-TEasy载体中,构建克隆载体pGEM-T-ε。对克隆载体pGEM-T-ε进行双酶切,将得到的918bp片段以正确的阅读框架定向克隆于pET-28a(+)中,然后将重组质粒转化进宿主菌BL21(DE3)中,在37℃1mmol/LIPTG诱导下该基因获得良好表达。经SDS-PAGE分析,其表达的蛋白约为36600,与预期值一致。Western-blotting试验显示,该重组蛋白可被D型产气荚膜梭菌血清识别,表明该重组蛋白具备天然毒素相似的反应原性。重组ε毒素蛋白在菌液上清、超声波裂解上清和包涵体中均有分布,表明重组蛋白可同时以胞外、周质和胞浆的形式表达,且以周质方式为主。重组蛋白在胰酶活化前后均可致死小鼠,活化后毒力可为原来的150倍。以重组ε毒素蛋白作为抗原免疫家兔制备血清,效价测定结果表明,重组ε毒素蛋白抗血清每毫升可中和30000个小鼠MLD。毒素-抗毒素中和试验和琼脂扩散试验均表明,该抗血清具有ε毒素特异性。
- 田冬青彭小兵蒋玉文杨京岚陈小云丁家波屠伟英
- 关键词：产气荚膜梭菌克隆表达抗血清
- 产气荚膜梭菌的多重PCR定型及α、β和ε毒素基因的克隆、表达和抗血清的制备
- 本试验对产气荚膜梭菌的研究包括三个方面：1、建立了用于产气荚膜梭菌定型的多重PCR方法。2、对产气荚膜梭菌的α、β和ε毒素基因进行了克隆表达。3、用表达的毒素蛋白分别制备了针对产气荚膜梭菌α、β和ε毒素的特异性血清。
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- 田冬青
- 关键词：产气荚膜梭菌多重PCR克隆
- 文献传递
