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一株发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒的分离鉴定及其生长特性研究被引量：1: 2016年; 目的探索疑似发热伴血小板减少综合征病例中病原体的分离鉴定,了解病毒生长特性。方法利用非洲绿猴肾细胞Vero E6从患者抗凝血标本中分离发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV),并通过血清学、形态学等方法对病毒进行鉴定;将分离的病毒接种不同细胞,利用荧光定量PCR检测不同时间细胞上清中病毒载量的变化。结果从患者抗凝血标本中分离出SFTSV;免疫荧光显示感染病毒的细胞培养物能与患者血清发生阳性反应;在透射电镜下能观察到布尼亚病毒样颗粒。SFTSV可感染Vero E6、Hep G2、THP-1等多种细胞,但病毒在不同细胞中的复制水平差异明显。其中Vero E6细胞对SFTSV较易感,病毒可增殖至4.89×109copy/ml。而Hep-2和HT29细胞不能被SFTSV感染。结论从疑似发热伴血小板减少综合征病例血液标本中成功分离出SFTSV。该病毒具有较广泛的细胞嗜性,对肾来源的细胞更易感。这些研究将为后续研究SFTSV的相关基础研究提供重要的线索。; 郑雅匀戴晓懿金东孙晖熊衍文罗雪莲; 关键词：发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒病毒复制

应用高分辨率熔解曲线技术检测大肠埃希菌O157:H7志贺毒素基因变种stx2c被引量：1: 2012年; 目的:探索高分辨率熔解曲线(High Resolution Melting,HRM)分析技术在检测大肠埃希菌O157:H7志贺毒素基因变种stx2c中的应用。方法:用HRM技术对20株O157:H7代表性菌株志贺毒素2基因进行分型,并与测序结果进行比较。结果:20份O157:H7样品中有3种类型熔解曲线。测序结果显示,12例A型熔解曲线中除1例为stx2a+stx2c杂合型外,其它均为原毒素基因型stx2a;1例B型熔解曲线测序结果为stx2a+stx2c杂合型,7例C型熔解曲线菌株测序结果均为stx2c纯合子。结论:HRM技术简便、快速,可作为志贺毒素2基因变种stx2c的检测方法。; 陈强王涛孙晖王艳熊衍文卢珊; 关键词：大肠埃希菌O157:H7 高分辨率熔解曲线分析

猪链球菌四环素耐药性与Tn916接合型转座子的关系被引量：3: 2010年; 目的研究我国分离的血清2型猪链球菌四环素耐药性与Tn916接合型转座子的关系。方法采用微量稀释法进行药物敏感性检测,PCR方法检测四环素耐药基因及Tn916接合型转座子。结果我们检测了56株我国分离的血清2型猪链球菌及12株国外分离的血清2型猪链球菌,56株我国分离株均对四环素耐药并且携带四环素耐药基因tet(M),我国猪链球菌携带的tet(M)基因位于接合型转座子Tn916上。12株国外分离株有7株对四环素耐药,这7株菌携带四环素耐药基因tet(O)并且Tn916检测为阴性。结论 Tn916上的tet(M)基因编码了我国血清2型猪链球菌的四环素耐药性,我国血清2型猪链球菌可能在进化过程中通过水平转移的方式获得了Tn916接合型转座子。; 白雪梅赵爱兰张少敏王忆婷孙晖叶长芸; 关键词：猪链球菌

潜在致病性的弗氏枸橼酸杆菌的筛查被引量：1: 2015年; 目的筛查具有潜在致病性的弗氏枸橼酸杆菌。方法对从河南省睢县分离到的36株弗氏枸橼酸杆菌进行黏附HEp-2细胞的检测,以及与HEp-2细胞(MOI:100)作用10 h后的乳酸脱氢酶(LDH)释放情况分析。同时比较弗氏枸橼酸杆菌CF74(Citrobacter freundii 74)、CF72(Citrobacter freundii 72)、肠聚集性大肠埃希菌(Enteroaggregative E.coli,EAEC)、肠致病性大肠埃希菌(Enteropathogenic E.coli,EPEC)2348/69和HB101的黏附和细胞毒性差异。结果 16株弗氏枸橼酸杆菌几乎没有黏附性,黏附指数<1;18株弗氏枸橼酸杆菌具有中等强度的黏附性,黏附指数<100;2株弗氏枸橼酸杆菌CF74和CF65(Citrobacter freundii 65)具有强的黏附性。与HEp-2细胞作用10 h后,除了CF74(24.4%),其余的35株弗氏枸橼酸杆菌具有低的LDH释放量,LDH释放量与阴性对照HB101(5.02%)相似。说明除了CF74,其余的弗氏枸橼酸杆菌不具有细胞毒性。CF74具有和EAEC042一样的聚集性黏附类型,并且CF74引起的LDH释放率明显高于CF72、2348/69和HB101(P<0.01)而低于EAEC17-2。结论作为潜在的致病菌,CF74具有强的黏附性和细胞毒性。; 刘丽云夏胜利孙晖; 关键词：细胞毒性细胞黏附乳酸脱氢酶

弯曲广布乳杆菌HFS9基因组分析及益生特性: 2023年; 【背景】近年来,弯曲广布乳杆菌的健康益处受到广泛关注;基因组分析结合表型实验的方法为益生菌开发提供了新思路。【目的】探索分离自健康人粪便的弯曲广布乳杆菌HFS9基因组特征及益生潜力。【方法】通过泛基因组分析对弯曲广布乳杆菌基因组特征进行描述,基于功能数据库注释并分析HFS9益生相关基因;通过耐酸耐胆盐实验、自聚集、疏水性和细胞黏附实验、抗生素敏感性试验、自由基清除实验及抑菌试验等对HFS9的体外益生特性进行评估;构建小鼠结肠炎模型初步评估HFS9的体内抗炎作用。【结果】弯曲广布乳杆菌具有开放的泛基因组和保守的核心基因组。HFS9基因组大小为1.97 Mb,GC含量为41.86%,蛋白质编码区数目为2050个;含乳杆菌噬菌体PLE3编码基因及与细胞黏附、酸耐受、胆盐耐受和抗氧化等相关的益生基因。HFS9在酸和胆盐环境中的存活率分别为62.42%和92.92%;自聚集能力和疏水性分别为63.33%和75.00%,对人结肠癌细胞(HT-29细胞)的黏附率为12.97%;对选用的大多数抗生素敏感;对6种常见人体致病菌均具有抑制作用;具有清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼[1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2,2-diphenyl-1-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazyl,DPPH]自由基和羟自由基的能力。此外,HFS9可缓解实验性小鼠结肠炎症状,改善结肠缩短和组织病理学变化。【结论】弯曲广布乳杆菌HFS9含有益生相关基因且具有体内外益生特性,可作为益生菌候选菌株进一步开发利用。; 林晓颖张素平徐明超乔蕾张舒惟杨晶孙晖孙晖张桂刘丽云; 关键词：益生菌

显微共聚焦拉曼技术在细菌分类鉴定中的应用被引量：5: 2021年; 拉曼光谱可以用于识别和描述微生物的特征,作为当今微生物分类鉴定研究的热点。相比于传统的微生物分离培养技术和分子生物学鉴定技术,拉曼技术具有免培养、快速和高效等优点。随着光学领域拉曼技术和分子生物学的结合发展,使得微生物的鉴定变得更加高效快捷。拉曼显微光谱结合稳定同位素探针、荧光原位杂交和光镊技术,为研究生态系统中不可培养微生物的功能和生理提供了一种独立的方法。显微共聚焦拉曼技术在细菌分类鉴定中具有巨大的应用前景。本文主要阐述拉曼光谱技术的基础知识和显微共聚焦拉曼技术在细菌分类鉴定中的研究进展,并对该技术的优缺点进行总结和评价,旨在为拉曼光谱技术应用于微生物学的研究提供参考。; 高鹏亚苏英会孙晖滕中秋吴长德史芸袁洪福刘洋徐雪芳; 关键词：表面增强拉曼散射

肠出血性大肠埃希菌O157∶H7新接合质粒pO157_SalTraE序列分析: 2014年; 目的：分析我国肠出血性大肠埃希菌 O157∶H7暴发菌株携带的新接合质粒 pO157_Sal的序列特征。方法对我国不同来源携带 pO157_Sal 的大肠埃希菌 O157∶H7暴发菌株进行 traE 基因PCR 扩增、克隆测序，并在 GenBank 中比对检索其他来源大肠埃希菌 O157∶H7菌株的 TraE 序列，以邻接法构建基于 TraE 序列的系统发生树；在全质粒序列水平比较分析 pO157_Sal 与 pEC4115。结果我国不同宿主来源的暴发菌株携带的 traE 基因序列完全相同；pO157_Sal TraE 的相似性序列存在于不同国家不同宿主来源及不同分离年代的大肠埃希菌 O157∶ H7分离株中；pO157_Sal 中21个基因与pEC4115质粒编码的基因存在28％～51％的氨基酸相似性。结论虽然不同来源的大肠埃希菌O157∶H7菌株中存在相似性 TraE 序列或相似质粒 pEC4115，但 pO157_Sal 为我国暴发菌株所特有，其序列在暴发菌株间保守，提示其为特定的相同来源。; 孙晖赵红庆熊衍文陈强; 关键词：大肠埃希菌 O157 质粒

肠集聚性大肠埃希菌分离株脉冲场凝胶电泳分析被引量：3: 2013年; 目的对我国散发腹泻患者肠集聚性大肠埃希菌(EAEC)分离株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析,以了解其分子流行病学特征并初步建立我国EAEC菌株的基础数据库。方法参照PulseNet大肠埃希菌O157∶H7的PFGE实验方法对52株EAEC分离株进行分析,并使用BioNumerics软件进行聚类。结果在限制性内切酶XbaⅠ和PulseNet推荐的电泳参数下,菌株基因组酶切片段分布均匀,条带易于识别。52株EAEC分离株产生了48种PFGE带型,初步聚类为A^N 14个群,不同地区来源及不同HEp-2细胞黏附表型的菌株广泛分布在不同PFGE聚类群中。结论我国散发腹泻患者EAEC分离株呈现高度多态性,PFGE电泳参数和限制性内切酶XbaⅠ适用于我国EAEC菌株的分析。; 孙晖刘学通赵爱兰金东熊衍文卢珊; 关键词：脉冲场凝胶电泳分子分型

青藏高原喜马拉雅旱獭粪便携带腹泻相关病毒的调查分析被引量：1: 2016年; 目的调查我国青藏高原喜马拉雅旱獭粪便中腹泻相关病毒的携带情况,并对检出病毒进行序列分析。方法根据腹泻相关病毒基因组保守区设计兼并引物,采用直接PCR或一步法RT-PCR方法对96份喜马拉雅旱獭粪便标本核酸进行检测;阳性PCR产物测序后与参考毒株进行序列比对;利用Phy ML 3.0软件对喜马拉雅旱獭粪便中病毒序列进行进化分析。结果 96份青藏高原喜马拉雅旱獭粪便中共检出星状病毒32份、小双节RNA病毒42份和嵴病毒5份,阳性率分别为35.4%、43.8%和5.2%;星状病毒、小双节RNA病毒和嵴病毒与参考毒株核苷酸一致性分别为78%、77%和93%,氨基酸一致性分别为77%、84%和91%。兼并引物未检测到腺病毒、札如病毒和诺如病毒。结论青藏高原喜马拉雅旱獭粪便中存在星状病毒、小双节RNA病毒和嵴病毒,为后续喜马拉雅旱獭携带病毒谱系研究提供了重要线索。; 罗雪莲郑雅匀戴晓懿金东孙晖熊衍文; 关键词：喜马拉雅旱獭星状病毒

乳酸乳球菌食品级载体的构建及Mn-SOD基因的克隆和表达被引量：15: 2006年; 目的构建乳酸乳球菌(L.lactis)食品级载体,并利用其表达锰超氧化物歧化酶(Mn SOD)。方法PCR方法扩增L.lactissubsp.cremorisWg2的隐性质粒pWV01的复制子、L.lactisMG1363的thyA基因及质粒pUC18的多克隆位点,PCR方法连接后构建食品级载体pSH91,CaCl2法转化大肠杆菌X51菌株。提取质粒pSH91电转化L.lactisMBP71(△thyA),检测转化子在改良SA培养基上的生长能力。PCR扩增L.lactisMG1363菌株的sodA基因(含自身启动子),克隆到质粒pSH91中,构建食品级表达载体pSH91∶SOD,电转化L.lactisMBP71,黄嘌呤氧化酶法测定转化子L.lactis MBP71/pSH91∶SOD的SOD酶活性。结果经PCR扩增、连接、鉴定,食品级载体pSH91构建成功;转化L.lactisMBP71后,突变株回复了在改良SA培养基上生长能力,并且其生长速率和酸化能力与野生株相似。PCR扩增得到sodA基因并克隆入pSH91,构建了食品级表达载体pSH91∶SOD。重组菌L.lactisMBP71/pSH91∶SOD的SOD酶活性较出发菌株L.lac tisMBP71高10余倍。结论成功构建了食品级载体pSH91;利用该载体可在L.lactis中表达Mn SOD等外源蛋白。; 孙强正熊衍文李振军孙晖徐建国; 关键词：乳酸乳球菌食品级载体锰超氧化物歧化酶

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孙晖

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