吴昊
- 作品数：11 被引量：15H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 黑色素瘤治疗性质粒DNA疫苗pSVK-CAVA的制备方法及其专用工程菌及发酵培养基
- 本发明公开了一种黑色素瘤治疗性质粒DNA疫苗pSVK-CAVA的制备方法及其专用工程菌及高产发酵培养基。所述工程菌是转化有黑色素瘤治疗性质粒DNA pSVK-CAVA的大肠杆菌XL10-Gold，命名为E.coli XL...
- 阎瑾琦于继云王宇朱晓明徐元基张巍吴昊张亮
- 文献传递
- 大质粒DNA疫苗pSVK—CAVA高稳定性宿主菌的筛选与鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的：从多种大肠杆菌感受态细胞中筛选出适合该研究大分子质粒DNA疫苗的宿主菌，鉴定其达到中试要求。方法：将疫苗质粒pSVK—CAVA（14．7kb）转化4种大肠杆菌化学感受态细胞并提取质粒，通过琼脂糖凝胶电泳实验检测质粒的形态结构。对基因工程菌进行生化检测，并通过连续传代法和酶切鉴定进行稳定性检测，同时将质粒DNA瞬时转染至293T细胞中检测质粒表达能力。选取质粒含量最高和稳定性最好的宿主菌作为原始种子分装冻存，将原始种子库扩大培养，逐级建立好主种子库和工作种子库即三级种子库。通过摇瓶培养实验在4种常用基础培养基中挑选出最适合质粒生产的培养基。结果：确定了XL-10Gold作为质粒DNA疫苗pSVK—CAVA的宿主菌，基因工程菌传代稳定性和结构稳定性良好，质粒能在293T细胞中体外表达。筛选出TB培养基为基础培养基，质粒容积产量达到9．9mg／L，比LB培养基提高了接近1倍。结论：该研究筛选出大肠杆菌XL-10God作为质粒DNA疫苗的宿主菌，解决了大质粒在常用宿主菌中不稳定的难题，并对基础培养基进行了初步优化。
- 吴昊王宇朱晓明阎瑾琦张巍徐元基田仁礼殷小涛刘姣王琳于继云
- 关键词：宿主菌DNA疫苗高稳定性GOLD
- 响应面法优化工程菌E.coli HBVA发酵培养基被引量：2
- 2013年
- 目的:对携带乙型肝炎DNA疫苗质粒pSVK-HBVA的工程菌发酵培养基进行优化。方法:采用单因素法比较不同碳源、氮源以及无机盐对发酵产量的影响;利用响应面法对各因素最佳水平及交互作用进行进一步研究。结果:单次单因子法优化结果显示,LB为最适基础培养基,最佳碳源和氮源分别是甘油和国产的眎蛋白胨;PB实验结果表明,影响质粒产量的3个主要影响因子为眎蛋白胨、甘油、NH4Cl,经过最陡爬坡和CCD优化后的发酵培养基,质粒的容积产率达到13.61 mg/L,是基础培养基LB发酵产量的2倍以上。结论:优化了工程菌E.coli HBVA的发酵培养基,提高了质粒pSVK-HBVA的产量。
- 王宇吴昊朱晓明张亮徐元基张巍杜芝燕肖毅王琳王琳李盼侯沙沙于继云
- 关键词：DNA疫苗发酵培养基优化响应面
- HBV融合抗原真核表达载体pIRES-neo-HBAg的构建及表达
- 2013年
- 目的构建HBV融合抗原真核表达质粒pIRES-neo-HBAg,并验证其在293T细胞中的表达。方法以含有HBV融合抗原的质粒pVAX1-HBV为模板,PCR扩增该融合基因。PCR产物经纯化后,将其克隆至载体pMD18-T中,构建pMD18-T-HBV质粒,经酶切和测序鉴定后,将其定向克隆入真核表达载体pIRES-neo,获得真核表达质粒pIRES-neo-HBAg。将该重组表达质粒瞬时转染人293T细胞,采用Western blot法、流式细胞术和免疫荧光细胞化学技术验证HBV融合抗原的表达。结果成功构建了HBV融合抗原真核表达质粒pIRES-neo-HBAg,Western blot法、流式细胞术和免疫荧光细胞化学技术结果显示融合抗原能够在293T细胞中表达。结论成功构建了HBV融合抗原真核表达质粒pIRES-neo-HBAg。
- 王琳王宇吴昊朱晓明于继云蒋建利阎瑾琦
- 关键词：293T细胞
- β-hCG蛋白在大肠杆菌系统的表达、纯化及活性鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的获得β-人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)融合蛋白β-hCG/GST并验证其抗原活性。方法利用PCR法扩增β-hCG全长基因,将其克隆至原核表达载体pET-42a中,构建重组质粒pET-42a-β-hCG,将该重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中IPTG诱导表达,经SDS-PAGE分析,亲和层析法纯化融合蛋白,目的蛋白用Western blot法鉴定,ELISA检测纯化得到的融合蛋白的抗原活性。结果测序结果证实成功扩增出目的基因β-hCG;酶切和测序结果证实pET-42a-β-hCG原核表达载体构建成功;转化后可以成功诱导并纯化出大小与预期一致的蛋白;Western blot法及ELISA检测证实纯化后的β-hCG/GST融合蛋白具有良好的免疫原性。结论成功获得β-hCG/GST融合蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性,为以β-hCG为靶位的抗肿瘤主动免疫治疗研究奠定了基础。
- 王伟殷小涛李云奇田仁礼吴昊阎瑾琦高江平于继云
- 关键词：Β-HCG原核表达蛋白纯化
- 结核疫苗研究进展被引量：11
- 2012年
- 卡介苗(BCG)的免疫保护作用存在争议,多重耐药结核杆菌(MDR-TB)的出现,以及艾滋病(AIDS)的流行,导致结核病(TB)的发病率呈现回升趋势,给TB防治提出了新的挑战。因此,发展新的TB疫苗成为TB防治的迫切需要。本文综述结核疫苗研究的最新进展。
- 吴昊王浩于继云
- 关键词：卡介苗疫苗
- 一种发酵培养基及利用其生产黑色素瘤治疗性质粒DNA疫苗pSVK-CAVA的方法
- 本发明公开了一种发酵培养基及利用其生产黑色素瘤治疗性质粒DNA疫苗pSVK-CAVA的方法。每1L高产发酵培养基含：酪蛋白胨12g，酵母提取物16.61g，甘油3.05mL，NH<Sub>4</Sub>Cl1g，0.17...
- 于继云阎瑾琦王宇徐元基张巍吴昊张亮朱晓明
- 文献传递
- 黑色素瘤治疗性质粒DNA疫苗pSVK-CAVA的制备方法及其专用工程菌及发酵培养基
- 本发明公开了一种黑色素瘤治疗性质粒DNA疫苗pSVK-CAVA的制备方法及其专用工程菌及高产发酵培养基。所述工程菌是转化有黑色素瘤治疗性质粒DNA pSVK-CAVA的大肠杆菌XL10-Gold，命名为E.coli XL...
- 于继云阎瑾琦王宇徐元基张巍吴昊张亮朱晓明
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- 乙肝治疗性可复制型DNA疫苗pSVK-HBVA高稳定宿主菌的筛选及其基础培养基的选择
- 2013年
- 目的为乙肝治疗性可复制型DNA疫苗质粒pSVK-HBVA筛选稳定性高,能多次传代的宿主菌,以满足中试工艺的要求,同时对该工程菌最适的基础发酵培养基进行选择。方法将质粒pSVK-HBVA分别转化几种不同的大肠杆菌感受态细胞并提取质粒,通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的形态结构,连续传代法对工程菌的稳定性进行检测;选取质粒含量最高和稳定性最好的工程菌作为原始种子,按照2010版《中国药典》要求建立工程菌的三级种子批,并对种子批进行鉴定。同时,从LB,TB,M9(甘油),M9(葡萄糖)4种培养基中为工程菌筛选质粒产量最高的基础发酵培养基。结果经过筛选发现,在以大肠杆菌XL10-Gold为宿主菌时,质粒pSVK-HBVA表现出了同常规质粒DNA类似的稳定性,转接传代30次也未发生重组或片段丢失,能满足后续中试工艺的要求,LB作为基础培养基能得到最高的质粒容积产率为5.5 mg/L。结论大肠杆菌XL10-Gold是一个更利于可复制型DNA疫苗质粒pSVK-HBVA扩增的宿主菌,该工程菌发酵的最佳基础培养基是LB培养基。
- 朱晓明王宇吴昊徐元基张巍王琳张亮李盼侯沙沙王启宇于继云阎瑾琦
- 关键词：宿主菌基础培养基
- 一种发酵培养基及利用其生产黑色素瘤治疗性质粒DNA疫苗pSVK-CAVA的方法
- 本发明公开了一种发酵培养基及利用其生产黑色素瘤治疗性质粒DNA疫苗pSVK-CAVA的方法。每1L高产发酵培养基含：酪蛋白胨12g，酵母提取物16.61g，甘油3.05mL，NH<Sub>4</Sub>Cl1g，0.17...
- 于继云阎瑾琦王宇徐元基张巍吴昊张亮朱晓明
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