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丙型肝炎病毒T细胞表位的筛选及其在大肠杆菌中的克隆与表达被引量：2: 2003年; 目的 :在丙型肝炎病毒 (hepatitisCvirus,HCV)不同变异株中 ,筛选高保守的能涵盖多种MHC限制类型的T细胞表位 ,并构建重组表位抗原的原核表达质粒。方法 :检索文献并结合MHC限制型 ,从中遴选出功能明确的T细胞表位 ;利用Goldkey软件 ,建立HCV全长蛋白序列数据库 ;从中分别截取各个表位所在区段 ,对所选取的表位进行同源性比较 ;从中选取保守性强的部分表位 ,用化学法合成表位基因 ,插入原核表达载体pBVIL1中 ,构建多个融合表达质粒并在E .coli表达。结果 :从文献中获得HCV免疫优势性T细胞表位 18个 ,在由 5 5条全长HCV序列组成的数据库中进行比较 ,获得了大量有关表位保守性的信息 ,并进行了统计分析 ,所构建的 5个表达质粒pBVIL1_T1～T5经鉴定后 ,在大肠杆菌中均获得了高效表达。结论 :本研究有助于深入认识HCVT细胞表位的特性 ,为表位的筛选提供了方法学依据 ,所选取的表位及原核表达的重组蛋白 ,为HCV治疗性疫苗的实验研究提供了候选抗原。; 阎瑾琦凌世淦宋晓国张贺秋陈坤朱翠侠; 关键词：丙型肝炎病毒 T细胞表位大肠杆菌原核表达质粒疫苗

真核表达质粒pcDNA3.1(＋)-h/mCD44v6的构建和鉴定: 2009年; 目的构建含人/鼠嵌合粘附分子CD44拼接变异体6(chimeric human and mouse CD44 splice variant 6,h/mCD44v6)基因真核表达质粒pcDNA3.1(+)-h/mCD44v6,并进行表达。方法通过PCR扩增h/mCD44v6的全基因cDNA,将扩增的cDNA克隆至PGM-Teasy,测序后插入pcD-NA3.1(+)真核表达质粒,构建重组真核表达质粒pcD-NA3.1(+)-h/mCD44v6,经限制内切酶酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染B16细胞,通过RT-PCR扩增出B16/pcDNA3.1(+)-h/mCD44v6细胞株中h/mCD44v6全段基因cDNA。结果经4轮PCR,成功扩增出h/mCD44v6的cD-NA全长基因,成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1(+)-h/mCD44v6,通过RT-PCR方法证实该质粒能在B16真核细胞中正确表达;建立了稳定的细胞株B16/pcDNA3.1(+)-h/mCD44v6。结论成功克隆和构建了h/mCD44v6的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-h/mCD44v6,为进一步研究h/mCD44v6的新功能和免疫治疗奠定了基础。; 许铁峰夏立平陈兴阎瑾琦于继云; 关键词：质粒真核表达细胞株克隆

一种发酵培养基及利用其生产黑色素瘤治疗性质粒DNA疫苗pSVK-CAVA的方法: 本发明公开了一种发酵培养基及利用其生产黑色素瘤治疗性质粒DNA疫苗pSVK-CAVA的方法。每1L高产发酵培养基含：酪蛋白胨12g，酵母提取物16.61g，甘油3.05mL，NH<Sub>4</Sub>Cl1g，0.17...; 于继云阎瑾琦王宇徐元基张巍吴昊张亮朱晓明; 文献传递

萤光素酶表达质粒pEE14.1-luc的构建及表达: 2014年; 目的:为研究10 kb以上DNA疫苗质粒的体内电穿孔递送,构建萤光素酶报告基因表达质粒p EE14.1-luc,并验证其表达。方法:从质粒p GL3-CMV中通过酶切、补平和纯化的方法获得萤光素酶基因luc,克隆入p EE14.1载体,构建重组表达质粒p EE14.1-luc,瞬时转染293T细胞,采用Western印迹、流式细胞术和免疫荧光等方法对萤光素酶基因在体外的表达情况进行验证,并运用活体成像仪检测萤光素酶基因在小鼠活体内的表达。结果:经菌液PCR鉴定和测序验证,p EE14.1-luc与预期设计完全一致;流式细胞术检测luc阳性表达率为22.41%,免疫荧光检测可见绿色荧光表达,Western印迹检测在相对分子质量为62×103处显现目的蛋白条带;同时,利用活体成像技术也检测到萤光素酶基因在小鼠活体内的表达。结论:p EE14.1-luc表达质粒构建成功,为研究DNA疫苗体内表达机制和体内电穿孔递送条件优化奠定了基础。; 朱晓明李盼王琳王宇张亮徐元基杜芝燕于继云阎瑾琦; 关键词：萤光素酶活体成像

一种复制子DNA疫苗载体及其构建方法与应用: 本发明公开了一种复制子DNA疫苗载体及其构建方法与其在制备复制子DNA疫苗中的应用。本发明具有卡纳霉素抗性的复制子DNA疫苗载体，是将复制子DNA疫苗载体pSCA1中的氨苄青霉素抗性基因置换为卡那霉素抗性基因后得到的，从...; 于继云阎瑾琦贾锐张亮徐元基张巍王宇朱晓明; 文献传递

稳定表达人survivin基因的B16细胞系的建立与鉴定被引量：1: 2010年; 目的构建人survivin真核表达载体,稳定转染入小鼠黑素瘤B16细胞,建立稳定表达人survivin的小鼠黑素瘤细胞系。方法采用PCR方法扩增出人survivin全长基因的cDNA编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pIRES-neo中,并加入酶切位点和6×his标签,得到重组表达质粒pIRES-neo-SUR-(his)6。利用阳离子脂质体介导法将其稳定转染入小鼠黑素瘤B16细胞,经G418加压筛选出阳性克隆。利用RT-PCR、蛋白免疫印迹及免疫荧光等检测方法验证人survivin基因在稳定转染B16细胞株中的表达。结果经限制性内切酶鉴定及序列分析,pIRES-neo-SUR-(his)6重组体构建正确。RT-PCR结果表明:从稳定转染pIRES-neo-SUR-(his)6的B16细胞所抽提的总RNA中能够扩增出survivin基因(约530bp);蛋白免疫印迹结果表明:利用特异抗体能够从稳定转染pIRES-neo-SUR-(his)6的B16细胞中检测到survivin蛋白条带,而对照空质粒转染后的细胞则没有相应的条带;流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测结果显示,稳定转染pIRES-neo-SUR-(his)6的B16细胞用特异性抗体检测到高效的荧光表达,其中5号单克隆的荧光表达率为91.38%,而对照空质粒转染后的细胞则没有相应的荧光表达。结论成功构建了真核表达载体pIRES-neo-SUR-(his)6,建立了稳定转染高效表达人survivin的小鼠黑素瘤细胞系。; 张亮李潇潇阎瑾琦王越肖毅高昆于继云; 关键词：SURVIVIN 稳定转染基因疫苗肿瘤免疫治疗

肿瘤免疫增效载体pBVIM的构建与表达: 本发明公开了一个全长4338bp的嵌合表达载体pBVIM，它包含质粒pBV220的大部分序列和一些小分子免疫佐剂基因，其中SLC(secondary lymphoid chemokine，SLC)为次级淋巴趋化因子，PA...; 于继云阎瑾琦修冰水刘荷中贾锐黄悦陈兴刘国栋; 文献传递

一种DNA疫苗真核表达载体及其在制备基因疫苗中的应用: 本发明公开了一种DNA疫苗真核表达载体及其应用。其目的是提供一种DNA疫苗真核表达载体与其在制备抗肿瘤等基因疫苗中的应用。所述DNA疫苗真核表达载体是在pVAX1载体骨架中添加内部核糖体进入位点编码序列得到的重组pVAX...; 于继云阎瑾琦贾锐王浩张亮刘宁; 文献传递

真核表达质粒pcDNA3.1(+)-rmCGβ的构建和鉴定: 2009年; 目的构建恒河猴绒毛膜促性腺激素β亚基(macaca mulatta chorionic gonadotrophinβsubunit,rmCGβ)基因真核表达质粒pcDNA3.1(+)-rmCGβ,并了解该质粒能否在真核细胞中表达。方法通过PCR扩增rmCGβ的全段基因cDNA,应用基因工程技术将扩增的cDNA克隆至PGM-Teasy,测序后插入pcDNA3.1(+)真核表达质粒,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-rmCGβ,经限制内切酶酶切分析及测序鉴定正确后,用脂质体转染技术转染B16细胞,通过RT-PCR扩增出B16/pcDNA3.1(+)-rmCGβ细胞株中rmCGβ全段基因cDNA。结果经4轮PCR,成功扩增出rmCGβ的cDNA全长基因,酶切和测序证明正确构建了真核表达质粒pcDNA3.1(+)-rmCGβ,通过RT-PCR方法证实该质粒能在B16真核细胞中正确表达。建立了稳定的细胞株B16/pcDNA3.1(+)-rmCGβ。结论成功克隆和构建了rmCGβ的真核表达质粒载体pcDNA3.1(+)-rmCGβ,为进一步研究rmCGβ的新功能和免疫治疗奠定了基础。; 许铁峰汪良夏立平陈兴阎瑾琦于继云; 关键词：质粒真核表达肿瘤疫苗

丙型肝炎病毒第一高变区抗原的筛选、克隆表达及临床初步应用: 目的:本研究通过筛选丙型肝炎病毒第一高变区(HVR1)序列,组成多靶点抗原组合,分析HCV患者体内HVR1抗体的异质性,并对其临床初步应用进行评价.方法:采用生物信息学对现有HVR1序列筛选,并进一步克隆表达,用间接EL...; 修冰水王国华张贺秋宋晓国陈坤阎瑾琦冯晓燕凌世淦朱翠霞; 关键词：丙型肝炎病毒抗原克隆表达; 文献传递

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阎瑾琦

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