丁宁
- 作品数：51 被引量：182H指数：9
- 供职机构：广州医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 维拉帕米预处理对脑缺血再灌注损伤保护作用的研究被引量：10
- 2007年
- 目的观察不同时间点予维拉帕米预处理对沙土鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及寻找维拉帕米最佳预处理时间点。方法沙土鼠33只,随机分为正常对照A组(n=6)、缺血损伤B组(n=6)、维拉帕米预处理C～E组(n=7),即脑缺血前48、24、12h分别予2.5%维拉帕米(2mg/kg·b.w.)腹腔注射。观察指标为超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)的活性及丙二醛(MDA)、内皮素(ET)、降钙素基因相关肽(CGRP)的含量。每组随机取一大小约1mm×1mm左颞前叶脑组织,电镜观察脑组织超微结构的改变。结果维拉帕米预处理各组的GSH活性显著高于缺血损伤组(P<0.01),ET的含量显著低于缺血损伤组(P<0.05)。C、D组SOD活性显著高于B组(P<0.05),E组SOD活性高于B组,但无统计学意义;C、D组MDA含量显著低于B组(P<0.05),E组MDA含量低于B组,但无统计学意义。C、D、E各组CGRP的含量高于B组,但无统计学意义。维拉帕米预处理各组的脑组织超微结构损伤改变不大或仅有轻微的改变,而缺血组脑组织超微结构表现出严重的损伤。结论缺血前48～12h予维拉帕米预处理对沙土鼠的脑缺血再灌注损伤有不同程度的保护作用,以预先给药48h组的效果较为显著,这种作用与其增加体内抗氧化物质SOD、GSH的活性及拮抗ET的毒性有关。
- 丁宁王芳肖慧王迪芬
- 关键词：脑缺血再灌注维拉帕米预处理脑保护
- 体外培养大鼠肺泡巨噬细胞周期性牵张模型的建立及其炎性介质的变化被引量：21
- 2008年
- 目的 建立体外培养大鼠肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage,AM)周期性牵张模型,观察有关炎性介质基因和蛋白表达的变化.方法 通过Flexercell 4000TTM应力加载系统对大鼠AM施加30%牵张应变,用RT-PCR法检测炎性介质mRNA的表达;用ELISA法检测炎性介质的分泌水平.结果AM细胞受30%牵张应变作用后,巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)基因表达和蛋白分泌水平均显著增加(P>005),而肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6的mRNA表达和蛋白分泌水平与对照组无差异(P>005).结论 本牵张模型能够反映呼吸机相关性肺损伤(VILI)后炎性介质水平的变化,是研究VILI的理想模型.
- 丁宁许立新郑彬闫焱佘守章
- 关键词：肺泡呼吸机相关性肺损伤机械牵张
- 利用生物素-链亲和素系统筛选呼吸机所致肺损伤HMGB1启动子结合蛋白
- 2009年
- 目的:筛选呼吸机所致肺损伤(VILI)高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的启动子结合蛋白.方法:制备VILI大鼠模型,与正常对照组大鼠同期处死,取肺组织提取细胞核蛋白.用PCR法扩增末端带生物素标记的HMGB1启动子探针,将细胞核蛋白与制备的HMGB1启动子探针进行孵育,再以标记有链亲和素的磁珠分离HMGB1启动子-蛋白反应复合物,分别用0.25mol/L和1mol/LNaCl洗脱探针上结合的蛋白,SDS-PAGE电泳分离样品蛋白,并对凝胶进行银染显色,比较VILI组与正常对照组的差异条带.结果:两组细胞核蛋白中共观察到24条差异条带.分析差异条带显示,与正常对照组比较,在低亲和力作用水平,机械通气后有6个蛋白与HMGB1启动子的结合力增强,有2个蛋白的结合力减弱;在高亲和力作用水平,有10个蛋白与HMGB1启动子的结合力增强,有6个蛋白的结合力减弱.结论:筛选到一些VILI特异性HMGB1启动子结合蛋白,对于研究HMGB1的转录调控机制具有重要意义.
- 丁宁肖慧许立新佘守章
- 关键词：高迁移率族蛋白B1急性肺损伤启动子
- 针对大量噬菌体展示短肽序列的生物信息学分析策略的构建被引量：1
- 2008年
- 目的建立一种生物信息学分析预测方法，针对通过噬菌体展示技术获得的大量短肽信息，从中筛选出所需的目的功能蛋白。方法对应用噬菌体展示技术筛选脂多糖刺激的人外周血单核巨噬细胞株（THP-1）细胞获得的1263个七肽序列进行去冗余分析，结合混洗算法和随机排列检验（RPT），统计非冗余七肽序列中特定三肽的丰度及其显著性。利用Clustal W软件对包含丰度具有显著性的三肽的七肽序列进行多序列比对分析，并根据氨基酸的性质，寻找特征性短肽，通过在线BLAST软件与SWISS～PROT蛋白序列数据库进行同源性分析，获得包含这些特征性短肽的已知蛋白，进一步应用SignalP和TMHMM软件预测其中的分泌蛋白和膜蛋白，并最终获得候选蛋白。结果得到TNF—α、toll样受体6（TLR-6）等炎性反应相关的细胞因子和膜蛋白及其表位模拟肽，为脓毒症等炎性反应相关疾病的研究和治疗提供依据。结论建立了一种生物信息学分析预测方法，该策略的建立为通过噬菌体展示技术筛选得到的短肽序列的分析提供一个全新的平台。
- 丁宁肖慧许立新佘守章
- 关键词：噬菌体展示生物信息学短肽分子模拟
- 盐酸右旋美托咪啶对呼吸机所致肺损伤大鼠ERK1/2激活的影响被引量：21
- 2011年
- 目的研究盐酸右旋美托咪啶对呼吸机所致肺损伤大鼠肺部炎症损伤和细胞外信号调控蛋白激酶磷酸化的影响。方法 36只SPF级雄性SD大鼠随机均分成3组:常规潮气量通气组(C组,8ml/kg,呼吸频率90次/min),大潮气量通气组(H组,20ml/kg,呼吸频率50次/min),大潮气量通气盐酸右旋美托咪啶处理组(D组,20ml/kg,呼吸频率50次/min),每组12只。各组通气时间均为4h,呼吸末气道压力均为0。D组大鼠在机械通气的同时接受盐酸右旋美托咪啶溶液静脉泵入,泵入速度为0.5μg/(kg·h)。实验结束处死大鼠,收集支气管肺泡灌洗液和肺组织标本,光镜观察肺病理改变,ELISA法检测BALF中肿瘤坏死因子α,Westernblotting检测各组肺组织中ERK1/2、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)水平。结果与C组相比,H组和D组肺部有明显病理改变,且干湿重比、总蛋白、白细胞计数、髓过氧化物酶、TNF-α和p-ERK1/2等指标均显著高于C组。与H组相比,D组肺部病理改变明显减轻,ERK1/2磷酸化水平和其他各项指标均显著降低。结论盐酸右旋美托咪啶静脉输注能显著减轻呼吸机所造成的肺损伤,减少肺部炎症因子的产生,并抑制ERK1/2激活。
- 忽新刚阮祥才于霖丁宁佘守章廖禹林
- 关键词：呼吸机肺损伤
- 右美托咪定对大鼠肢体缺血-再灌注后急性肺损伤的影响及机制被引量：9
- 2015年
- 目的:探讨右美托咪定对大鼠肢体缺血-再灌注后急性肺损伤的影响及机制。方法:将60只清洁健康级雄性Wistar大鼠随机分为4组:对照组、缺血再灌注组、预处理组和后处理组,每组15只。光镜下观察每组肺组织病理学改变并计算中性粒细胞。测定肺组织湿干比(W/D)和动脉血PaO2、肺组织细胞因子肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素IL-6和IL-10的含量及肺组织脂质氧化产物丙二醛(MDA)含量。结果:大鼠肢体缺血-再灌注后可引起肺组织出现损伤性变化。与缺血再灌注组比较,预处理组和后处理组大鼠肺组织的病理改变明显减轻;与对照组比较,缺血再灌注组、预处理组和后处理组的TNF-α、IL-6、IL-10和MDA明显升高,其中预处理组和后处理组的TNF-α、IL-6和MDA明显低于缺血再灌注组,而预处理组和后处理组的IL-10明显高于缺血再灌注组。结论:非特异性炎性反应和氧化应激介导了大鼠肢体缺血-再灌注所致的急性肺损伤,右美托咪定可以抑制上述介导机制,从而减轻大鼠肢体缺血-再灌注所致的急性肺损伤。
- 邬子林周志飞刘湘钰邓瑞华丁宁
- 关键词：急性肺损伤缺血-再灌注损伤
- P38及上游激酶MKK6对周期性牵张应变诱导的肺泡巨噬细胞高迁移率族蛋白B1表达的调控被引量：19
- 2009年
- 本文旨在探讨P38及其上游激酶——丝裂原活化蛋白激酶激酶6(mitogen-activated protein kinase kinase6,MKK6)对周期性牵张应变诱导的大鼠肺泡巨噬细胞高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1 protein,HMGB1)表达的调控作用。应用DOTAP脂质体介导的基因转染方法将P38α的显性无活性突变体P38(AF)+pGFP以及MKK6b的组成性活性突变体MKK6b(E)+pGFP分别导入大鼠肺泡巨噬细胞,以质粒pcDNA3+pGFP作为阴性对照,以pGFP作为空白对照。应用荧光显微镜和Western blot方法观察转染基因的表达情况。建立体外大鼠肺泡巨噬细胞周期性牵张应变模型,观察各组细胞在施加20%周期性牵张应变时P38激酶活性变化,HMGB1蛋白和mRNA的表达变化情况。荧光染色及Western blot检测结果显示,外源基因成功转染大鼠肺泡巨噬细胞,并在细胞内表达。在大鼠肺泡巨噬细胞周期性牵张应变模型中观察到,MKK6b(E)转染细胞内P38激酶活性明显升高,而P38(AF)转染细胞内P38激酶活性显著下降;MKK6b(E)基因转染可促进牵张应变(应变幅度为20%)诱导的大鼠肺泡巨噬细胞HMGB1蛋白和mRNA的表达,而p38(AF)基因转染则抑制牵引应变诱导的HMGB1蛋白和mRNA表达。本研究表明,周期性牵张应变通过MKK6-P38α信号通路调节大鼠肺泡巨噬细胞HMGB1的表达。
- 丁宁肖慧高巨许立新佘守章
- 关键词：P38丝裂原活化蛋白激酶肺泡巨噬细胞高迁移率族蛋白B1
- 异丙酚对脂多糖诱导肺泡巨噬细胞高迁移率族蛋白B1启动子转录活性的影响被引量：5
- 2010年
- 目的探讨异丙酚对脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导肺泡巨噬细胞（alveolar macrophages，AM）高迁移率族蛋白B1（high mobility group box 1 protein，HMGBI）启动子转录激活的影响。方法以基因重组技术将HMGBI启动子克隆人荧光素酶报告基因表达载体pGL3-Basic，得到重组质粒pGt3-HMGB1P，采用脂质体介导的转染技术将质粒转染AM细胞。根据转染质粒和施加刺激的不同分为以下各组：未转染组；转染pGL3-Basic组；转染pGL3-HMGB1P组；转染pGL3-HMGB1P＋IPS（100mg／L）刺激组；转染pG13-HMGB1P＋IPS（100mg／L）＋异丙酚（5mg／L）处理组。通过检测荧光素酶活性来观察启动子活性变化，分别采用Western blot和RT-PCR方法检测细胞HMGB1蛋白和mRNA的表达。应用单因素方差分析进行不同组别间的比较。结果酶切和测序结果证实重组体pGt3-HMGB1P构建正确，荧光素酶活性检测显示pGL3-HMGB1P在AM细胞中有效表达。与转染pGL3-HMGB1P组比较，转染pGL3-HMGB1P＋LPS刺激组HMGB1启动子的转录活性（423±27），HMGB1蛋白（0．49±0．03）和mRNA（0．48±0．04）的表达均显著增加（P〈0．05）；与转染pGL3．HMGB1P＋LPS刺激组比较，转染pGL3．HMGB1P＋LPS＋异丙酚处理组HMGB1动子的转录活性（207±13），HMGB1蛋白（0．17±0．02）和mRNA（0．13±0．02）的表达均显著降低（P〈0．05）。结论异丙酚在转录水平通过抑制LPS诱导HMGB1启动子的转录激活而影响HMGB1的表达。
- 丁宁肖慧许立新佘守章
- 关键词：异丙酚脂多糖高迁移率族蛋白B1肺泡巨噬细胞转录活性启动子
- 丙泊酚对呼吸机所致肺损伤促分裂原活化蛋白激酶活化及炎症反应的影响
- 2011年
- 目的探讨丙泊酚对呼吸机所致肺损伤大鼠肺部促分裂原活化蛋白激酶和炎症反应的影响。方法 SD大鼠随机均分成3组:常规潮气量通气组(C组)、大潮气量通气组(H组)和丙泊酚处理组(P组)。P组在大潮气量通气同时给予丙泊酚,C组和H组给予生理盐水。收集肺灌洗液和组织标本,测量肺组织湿/干比,观察肺病理改变,检测支气管肺泡灌洗液中总蛋白、白介素1β(IL-1β)和白介素6(IL-6)的含量,Western blot方法检测各组肺组织中促分裂原活化蛋白激酶和磷酸化水平。结果 C组大鼠肺部未见明显的病理改变,H组和P组肺部有明显的病理改变,而P组大鼠肺部病理改变较H组明显减轻;H组和P组肺组织湿/干比、p-p38、支气管肺泡灌洗液中白细胞总数、总蛋白含量、IL-1β和IL-6水平明显高于C组,上述指标P组明显低于H组。结论丙泊酚能够减轻大潮气量机械通气造成的大鼠肺损伤,其机制可能部分与阻断促分裂原活化蛋白激酶活化以及肺部炎症有关。
- 忽新刚于霖丁宁许立新佘守章
- 关键词：呼吸机所致肺损伤丙泊酚促分裂原活化蛋白激酶炎症
- 机械牵张诱导肺泡巨噬细胞的细胞因子表达谱及其与脂多糖对MIP-2释放的协同效应被引量：9
- 2009年
- 目的观察机械牵张诱导肺泡巨噬细胞（AM）的细胞因子表达谱，以及机械牵张对脂多糖（LPS）诱导巨噬细胞炎性蛋白2（MIP-2）表达的影响。方法用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测机械牵张诱导AM15种细胞因子的水平变化；检测不同强度机械牵张（5％、10％、15％和20％）和牵张刺激（20％）后不同时间点（0、1、3、6、12和24h）AM分泌MIP-2的水平，以及机械牵张（20％）与LPS（10ng／mL）共同刺激对AM分泌MIP-2的影响。结果牵张刺激后AM分泌IL-1β、IL-6、MIP-2、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、IFN-γ和干扰素诱导蛋白10（IP-10）的水平明显升高（P均〈0．001）。机械牵张以强度和时间依赖方式诱导MIP-2的分泌，随着牵张强度的增加（10％、15％和20％），MIP-2的分泌水平也明显增加（P均〈0．001）；在刺激后6～24h范围内MIP-2水平持续升高（P〈0．001）。以机械牵张和LPS共同刺激AM，MIP-2的生成量大大增加，二者存在协同效应（F=121．983，P〈0．001）。结论机械牵张可诱导AM释放多种细胞因子，机械牵张诱导MIP-2的上调具有强度和时间依赖性，并协同LPS诱导AM释放MIP-2，可能在呼吸机所致肺损伤的发生和发展中起重要作用。
- 丁宁肖慧许立新佘守章
- 关键词：机械牵张肺泡巨噬细胞细胞因子呼吸机所致肺损伤
