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因子Ⅶa依赖组织因子激活PAR2/ERK/NF-κB抑制结肠癌SW620细胞caspase-3表达被引量：5: 2012年; 目的探讨凝血因子Ⅶa对结肠癌SW620细胞增殖能力以及表达凋亡分子天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的影响及其作用机制。方法用一定剂量的蛋白酶激活受体2激动剂(PAR2-AP)、凝血因子Ⅶa等刺激物处理SW620细胞,观察细胞生长情况;western blot和定量PCR分别检测细胞表达caspase-3蛋白质及mRNA水平;利用相关抗体、拮抗剂和抑制剂等观察因子Ⅶa对caspase-3表达的效应变化。结果 PAR2-AP(100μmol/L)及因子Ⅶa(10 nmol/L)能够明显促进SW620细胞的生长,减少细胞caspase-3蛋白质和mRNA的表达;抗组织因子(TF)抗体(а-TF)、PAR2拮抗剂(PAR2-аAP)、ERK1/2抑制剂U0126以及NF-κB抑制剂PDTC均能逆转因子Ⅶa对SW620细胞caspase-3表达的抑制效应,而p38MAPK抑制剂SB203580对caspase-3的表达无明显的干预作用。结论因子Ⅶa依赖TF活化PAR2,经ERK1/2和NF-κB信号通路,抑制SW620细胞caspase-3表达,从而促进细胞的增殖与生长。; 张先梅周红陈东东解鸿翔胡丽超武标吴莺; 关键词：蛋白酶激活受体2

TF/Ⅶa活化PAR2后经钙信号促进SW620细胞的增殖和迁移: 2013年; 目的探讨钙信号参与凝血因子Ⅶa依赖组织因子(TF)激活蛋白酶活化受体2(PAR2),从而促进结肠癌SW620细胞增殖、迁移的可能机制。方法Ⅶa(10 nmol/L)及PAR2激动剂(PAR2-AP,100μmol/L)作用负载fluo-4/AM的SW620细胞,激光共聚焦显微镜测定细胞内钙离子荧光强度的变化;钙抑制剂EGTA(1 mmol/L)和毒胡萝卜内酯(thapsigargin,TG,1μmol/L)预处理细胞后,Ⅶa(10 nmol/L)、PAR2-AP(100μmol/L)再分别处理细胞,western blot检测p-ERK1/2、t-ERK1/2蛋白的表达;MTT法及流式细胞术检测SW620细胞的增殖情况、transwell法检测细胞迁移的变化。结果Ⅶa(10 nmol/L)和PAR2-AP(100μmol/L)处理SW620细胞后,胞内钙离子荧光强度瞬时升高后降低,分别在60、30 s达到峰值;EGTA和TG预处理细胞,能明显降低Ⅶa、PAR2-AP对p-ERK1/2蛋白的活化作用(P<0.05),抑制其对细胞增殖和迁移的促进作用。结论 TF/Ⅶa激活PAR2后,经钙信号通路活化下游ERK1/2信号,促进SW620细胞的增殖和迁移。; 吴莺王静余小燕胡丽超武标周红; 关键词：蛋白酶激活受体2 钙信号细胞外信号调节激酶1

NF-κB在抗β_2GPⅠ/β_2GPⅠ复合物诱导THP-1细胞表达组织因子中的作用探讨被引量：3: 2012年; 目的:探讨核因子κB(NF-κB)在抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导单核细胞株THP-1表达组织因子(TF)中的作用。方法:使用一定剂量的抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物处理THP-1细胞一定时间,收集细胞总RNA和总蛋白,实时定量PCR(RT-qPCR)检测细胞TF mRNA水平,TF活性试剂盒检测TF活性;Western blot检测细胞NF-κB p65、磷酸化-NF-κB p65及NF-κB抑制蛋白IκB-α的表达情况;进一步采用NF-κB抑制剂(PDTC)观察是否能干预抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物对细胞的刺激效应,并利用上游信号分子MAPKs的抑制剂观察抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物对NF-κB p65磷酸化的影响。结果:抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物(100μg/ml)能够诱导THP-1细胞表达TF mRNA及活性,与对照相比差异显著(P<0.05);能够增强细胞内NF-κB p65磷酸化(P<0.05 vs media),降低IκB-α水平(P<0.05 vs media);NF-κB抑制剂PDTC(20μmol/L)能够抑制抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物(100μg/ml)诱导THP-1细胞表达TF及NF-κB磷酸化的效应;MAPKs抑制剂均能影响抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物(100μg/ml)诱导THP-1细胞NF-κB p65磷酸化。结论:在抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导THP-1细胞表达TF过程中,NF-κB被激活并发挥重要作用,MAPKs为NF-κB的关键上游分子。; 夏龙飞周红胡丽超陈东东解鸿翔王婷穆原; 关键词：抗磷脂综合征核因子ΚB

c-Jun/AP-1在因子Ⅶa促进SW620细胞增殖和迁移中的激活及其调控作用被引量：3: 2013年; 目的探讨c-Jun/激活蛋白1(AP-1)在活化的凝血因子Ⅶa促进SW620细胞增殖、迁移过程中的作用及其调控机制。方法 Western blot检测人结肠癌SW620细胞中Ⅶa、组织因子(TF)、蛋白酶激活受体2(PAR2)、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)抑制剂U0126、p38抑制剂SB203580处理后c-Jun、磷酸化c-Jun(p-c-Jun)的蛋白水平变化;MTT和Transwell法分别检测AP-1抑制剂姜黄素对细胞增殖和细胞迁移能力的影响。结果单克隆抗TF和PAR2抗体、U0126均能抑制Ⅶa促进SW620细胞中c-Jun/AP-1活化的过程(P<0.05)。姜黄素降低Ⅶa诱导的SW620细胞增殖和细胞迁移能力(P<0.05)。结论 TF/Ⅶa复合物通过激活PAR2促进SW620细胞增殖和迁移,c-Jun/AP-1在此过程中被激活并发挥重要作用,ERK1/2为c-Jun/AP-1上游分子具有调控效应。; 胡丽超周红武标夏龙飞吴莺王静; 关键词：结肠癌蛋白酶激活受体2 激活蛋白1

PKCα参与凝血因子Ⅶa/TF激活PAR2促进SW620细胞迁移被引量：1: 2012年; 目的探讨蛋白激酶Cα(PKCα)参与凝血因子Ⅶa依赖组织因子(TF)激活蛋白酶激活受体2(PAR2),从而促进SW620细胞迁移以及可能的作用机制。方法用蛋白酶激活受体2激动剂(PAR2-AP)、Ⅶa、PKC激动剂佛波醇酯(PMA)等刺激物处理SW620细胞,并用抑制抗体(抗TF、抗PAR2)、同型对照抗体(mopc-21)进行抑制试验。用western blot检测其PKCα与p-PKCα的表达,免疫荧光试验观察PKCα的分布情况;分别用PMA(100 nmol/L)、Ⅶa(10 nmol/L)及PKCα抑制剂(safingol,10μmol/L)处理SW620细胞,Transwell试验观察细胞迁移情况,定量PCR法检测其MMP-9 mRNA表达水平。结果PMA(100 nmol/L),因子Ⅶa(10 nmol/L)及PAR2-AP(100μmol/L)能明显促进PKCα的磷酸化(F=289.9,P<0.05),而对PKCα的表达没有显著性影响(F=2.02,P>0.05);免疫荧光实验结果表明,PKCα自胞浆向核膜与核内发生转位;加入抗TF及抗PAR2抗体能够显著抑制因子Ⅶa对PKCα的激活,而同型对照抗体(mopc-21)没有此作用;Transwell试验与定量PCR结果表明,PKCα抑制剂明显阻断因子Ⅶa对细胞迁移及MMP-9表达的促进作用。结论因子Ⅶa依赖TF活化PAR2,经信号分子PKCα介导,上调SW620细胞MMP-9表达,促进细胞的迁移。; 武标周红张先梅胡丽超吴莺; 关键词：蛋白激酶CΑ 蛋白酶激活受体2 细胞迁移

钙信号在PAR2激动剂促进SW620细胞增殖中的作用: 2013年; 目的探讨钙信号在蛋白酶活化受体2激动剂(PAR2-AP)促进结肠癌SW620细胞增殖中的作用。方法 PAR2-AP 100μmol/L作用于SW620细胞,用fluo-4/AM荧光法测定细胞内Ca2+荧光强度的变化;乙二醇-双-(2-氨基乙醚)四乙酸(EGTA)1mmol/L、毒胡萝卜内酯(TG)1μmol/L、PAR2-AP 100μmol/L预处理细胞后,Western blot检测磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)的变化,MTT法检测SW620细胞增殖活力的变化,流式细胞术检测细胞周期的变化。结果 PAR2-AP刺激SW620细胞后,Ca2+荧光强度短暂升高后减低;EGTA和TG预处理细胞能明显干预PAR2-AP对p-ERK1/2的升高作用及其促细胞增殖作用。结论 PAR2-AP活化PAR2受体后经钙信号通路影响p-ERK1/2表达,促进SW620细胞的增殖。; 王静吴莺余小燕蒋双红胡丽超周红; 关键词：结肠癌蛋白酶激活受体2 钙信号细胞外信号调节激酶

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胡丽超