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噬菌体T7溶菌酶及其融合蛋白在大肠杆菌中的表达被引量：5: 1994年; 以噬菌体Ｔ７ＤＮＡ为模板，ＰＣＲ扩增Ｔ７溶菌酶基因，插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ载体中，ＤＮＡ序列分析表明，克隆的Ｔ７溶菌酶基因和已报道的序列无氨基酸水平上的差异。将Ｔ７溶菌酶基因分别拼接在烟草病原相关蛋白（ＰＲ１ｂ）信号肽编码序列的３’末端和马铃薯卷叶病毒外壳蛋白（ＰＬＲＶＣＰ）基因靠近３’末端处，构建成两个融合蛋白基因。将Ｔ７溶菌酶及其融合蛋白基因插入大肠杆菌表达载体ｐＢＶ２２１，蛋白电泳及溶菌实验表明，Ｔ７溶菌酶基因在大肠杆菌中高效表达，其产物的表达量占菌体可溶性蛋白的２０％以上，ＰＬＲＶＣＰ的表达量并没有因Ｃ端融合Ｔ７溶菌酶而提高，高等植物的信号肽在大肠杆菌中也能起分泌信号作用。; 崔晓江黄文晋刘枝俏彭学贤莽克强; 关键词：融合蛋白噬菌体

大鼠脑原生型一氧化氮合酶在NG108-15细胞中的表达被引量：1: 1997年; 将大鼠脑原生型一氧化氮合酶（cNOS）全长cDNA定向插入pRC／CMVpolylinker区，获得真核细胞表达载体pCMVcNOS。以pCMVcNOS为模板，cNOS内部基因序列设计的引物进行PCR扩增，证明cNOS基因的存在。经酶切检测进一步证实插入方向完全正确。用磷酸钙共沉淀法和LipofectinTM法将pCMVcNOS转染NG108-15细胞，用含600mg／LG418培养基筛选和增殖抗性单克隆细胞，通过3H-精氨酸转化3H-胍氨酸法测定各细胞克隆可溶相和颗粒相cNOS活性，筛选高效稳定表达的细胞株。从42株抗G418单克隆细胞林中筛选到3株稳定高效表达细胞，在表达的cNOS活性中，可溶相增加更为明显。本实验结果证实，得到高效表达原生型一氧化氮合酶的神经细胞株。; 刘枝俏强文安张放臧梦维刘景生; 关键词：一氧化氮合酶 NG108-15细胞真核

杀菌肽的研究进展及应用前景被引量：34: 1995年; 杀菌肽是在昆虫体内诱导产生的一类具有强抗菌活性的、由３０多个氨基酸组成的多肽。它的特殊空间结构可以使原核细胞膜形成孔洞，导致细胞死亡，对真核细胞膜却无此作用。哺乳动物体内亦存在类似的有抗菌活性的多肽，杀菌肽因其广谱杀菌活性而引起了植物学家和医学家的注意。已被用于植物抗病原菌和医学研究。; 崔晓江刘枝俏田颖川彭学贤; 关键词：杀菌肽细胞膜多肽

NO／NOS与抗炎免疫被引量：7: 1996年; ＮＯ／ＮＯＳ与抗炎免疫强文安，刘枝俏ＡｂｓｔｒａｃｔＡｓａｃｅｌｌｕｌａｒｓｉｇｎａｌｉｎｇｍｏｌｅｃｕｌｅ，Ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅ（ＮＯ）ｐｌａｙｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｔｈｅｍｅｓ－ｓａｇｅｔｒａｎｓｆｅｒｉｎｎｅｕｒｏｃｙｔｅ，ｔｈ...; 强文安刘枝俏; 关键词：NO 抗炎免疫

脑组织一氧化氮合成酶的特性及其与NADPH－diaphorase相关性研究被引量：17: 1996年; 采用Ｌ－~３Ｈ精氨酸转化法实验，建立了一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）测定法，并对大鼠和牛脑组织ＮＯＳ的生化特性以及大鼠脑组织ＮＯＳ的分布进行研究。结果表明：大鼠和牛小脑提取液ＮＯＳ酶活性存在时间和剂量依赖性，大鼠小脑ＮＯＳ底物Ｌ－Ａｒｇ的Ｋｍ值为１．６μｍｏｌ／Ｌ，Ｖｍａｘ为２３．９ｐｍｏｌ·ｍｇ^（－１），ｍｉｎ^（－１）；大鼠小脑ＮＯＳ依赖于Ｃａ^（２＋）、钙调蛋白（ＣａＭ）、尼克酰胺脱氢酶Ⅱ（ＮＡＤＰＨ）和四氢生物喋呤（ＢＨ＿４），其ＥＣ＿（５０）分别为０．５５ｍｍｏｌ／Ｌ、３３ｎｍｏｌ／Ｌ、３２．５μｍｏｌ／　Ｌ、０．４３μｍｏｌ／Ｌ。３ｍｍｏｌ／ＬＥＧＴＡ可以完全抑制大鼠小脑提取液ＮＯＳ活性；１ｍｍｏｌ／ＬＣａＭ拮抗剂三氟啦嗪（ＴＦＰ）能完全抑制ＮＯＳ活性，其ＩＣ＿（５０）为１．７２μｍｏｌ／Ｌ；ＮＯＳ抑制剂ＮＧ－甲基－Ｌ－精氨酸（Ｌ－ＮＭＡ）能够竞争性抑制ＮＯＳ活性，其ＩＣ＿（５０）为１．５６μｍｏｌ／Ｌ。对与ＮＯＳ具有同源性尼克酰胺脱氢酶Ⅱ黄递酶（ＮＡＤＰＨ－ｄ）活性进行研究，发现ＮＯＳ仅是ＮＡＤＰＨ－ｄ活性的一部分。大鼠神经组织中小脑ＮＯＳ活性最高，其次为嗅球、下丘脑和纹状体，而脊髓最低；大鼠神经组织?; 强文安刘枝俏刘捷曹清刘景生; 关键词：一氧化氮合成酶黄递酶

诱生型NO合酶基因真核表达载体的构建被引量：2: 1997年; 采用分子克隆技术，设计并构建来源ＲＡＷ２６４．７巨噬细胞ｉＮＯＳ基因ｃＤＮＡ的真核表达载体。以ＨｉｎｃⅡ＋ＮｏｔⅠ双酶解ｐＫＳｉＮＯＳ，电泳回收３９７３ｂｐ编码ｉＮＯＳ的ｃＤＮＡ序列，克隆入真核表达载体ｐＲｃ／ＣＭＶ的ＨｉｎｄⅢ和ＮｏｔⅠ位点。用ＥｃｏＲⅠ和ＳａｌⅠ酶切鉴定，初步筛选２＃和８＃克隆为重组子ｐＣＭＶｉＮＯＳ。经ＮｏｔⅠ和ＫｐｎＩ＋Ｓａ１Ⅰ酶切结果表明，重组克隆外源ｉＮＯＳ基因插入位点和片段大小正确。以ＥｃｏＲＶ＋ＸｂａⅠ、ＥｃｏＲＶ＋ＳｃａⅠ、ＢａｍＨⅠ＋ＸｂａⅠ或ＢａｍＨⅠ＋ＢｇｌⅡ双酶切图谱分析，均证明ｉＮＯＳ基因正向插入真核表达载体。用ｉＮＯＳ基因特异性引物，ＰＣＲ分析质粒ｐＣＭＶｉＮＯＳ，扩增出４５１ｂｐ片段，提示重组质粒含有ｉＮＯＳ基因序列。ｐＣＭＶｉＮＯＳ特点是携有ｉＮＯＳ的ｃＤＮＡ序列，包括编码ｉＮＯＳ开放阅读框架，但删除５＇端部分非编码区，有利于高效表达。还含有巨细胞病毒强启动子、ｐｌｏｙ（Ａ）加接信号和ｎｅｏ标志基因，具有转染多种哺乳类细胞通用性。因此，重组表达质粒ｐＣＭＶｉＮＯＳ的构建可望为研究ｉＮＯＳ基因真核表达调控，阐明ＮＯ／ｉＮＯＳ调节神经、心血管和免疫系统的分子机理?; 臧梦维胡萍胡萍刘景生彭学贤; 关键词：诱生型一氧化氮合酶分子克隆基因表达

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刘枝俏

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