隋御
- 作品数：17 被引量：39H指数：4
- 供职机构：宁夏医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“春晖计划”宁夏医科大学校级科研项目更多>>
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- REV7基因对人结肠癌细胞周期及凋亡的影响
- 2018年
- 目的探讨下调REV7基因对人结肠癌细胞HCT116、SW620细胞周期及凋亡的影响。方法通过体外培养人结肠癌细胞株HCT116、SW620,用REV7基因的特异性si RNA片段转染细胞,运用实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹技术检测转染后细胞系的REV7基因干扰效率。选择REV7低表达具有统计学意义的上述细胞系作为实验组细胞,同时将加入转染试剂的HCT116、SW620细胞作为空白对照组,转染阴性RNA oligo干扰片段的HCT116、SW620细胞作为阴性对照组。采用流式细胞术测定各组细胞的细胞凋亡情况。通过Western blot法检测各组细胞抑癌蛋白P53、细胞周期蛋白P21、细胞周期蛋白依赖性激酶CDK4、细胞凋亡蛋白BAK、BCL-XL表达水平。结果实时荧光定量PCR结果显示,HCT116、SW620细胞中si REV7干扰效率均高于60%(P<0.01);Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡结果显示,实验组与阴性对照相比,REV7下调促进HCT116、SW620细胞凋亡(P<0.05);Western blot结果显示,低表达REV7可下调HCT116、SW620细胞抗凋亡蛋白BCL-XL、细胞周期蛋白P21蛋白表达水平(P<0.01),上调促凋亡蛋白BAK、肿瘤抑制蛋白P53、细胞周期蛋白依赖性激酶CDK4蛋白表达水平(P<0.01)。结论下调REV7可以阻滞结肠癌细胞HCT116、SW620细胞周期并促进细胞凋亡,其机制可能与下调REV7后,引起抑癌蛋白P53、蛋白细胞周期蛋白CDK4、P21及细胞凋亡蛋白的BAK、BCL-XL的表达变化有关。
- 孙昊彤马璐赵晓鹏李昕隋御徐方
- 关键词：结肠癌细胞周期细胞凋亡DNA损伤修复
- TNF-α激活Wnt信号通路促进人结肠癌干细胞侵袭被引量：10
- 2018年
- 目的探讨炎症环境下Wnt信号通路对人结肠癌干细胞侵袭的影响。方法以人结肠癌细胞系HT29细胞为材料,用流式细胞荧光分选技术(FACS)分选CD44+CD133+的人结肠癌干细胞;流式细胞术及单细胞克隆形成实验对分选出的干细胞进行鉴定;肿瘤坏死因子α(TNF-α)处理CD44+CD133+HT29细胞建立炎症细胞模型,噻唑蓝(MTT)实验筛选TNF-α作用的最适剂量及最佳作用时间; Wnt信号通路抑制剂Dickkopf相关蛋白1(DKK1)作用于CD44+CD133+HT29炎症细胞,实验分为空白组、TNF-α处理组、加DKK1的TNF-α处理组。MTT实验检测各组细胞增殖情况,Western blot法检测Wnt信号通路中相关蛋白β联蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、c-Myc及上皮间质转化(EMT)相关蛋白上皮钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)的表达情况,TranswellTM侵袭实验检测各组细胞侵袭情况。结果流式细胞分选术成功分选出结肠癌CD44+CD133+HT29干细胞。MTT实验筛选出TNF-α作用的最适剂量为10 ng/m L,最佳作用时间为48 h。与空白组相比,TNF-α处理组中CD44+CD133+HT29细胞的相对存活率增加,TranswellTM穿膜的细胞数增加,β-catenin、cyclin D1、c-Myc表达升高,E-cadherin表达降低、vimentin表达升高;与TNF-α处理组相比,加DKK1的TNF-α处理组CD44+CD133+HT29细胞的相对存活率降低,TranswellTM穿膜细胞数减少,β-catenin、cyclin D1、c-Myc表达降低,E-cadherin表达升高、vimentin表达降低。结论TNF-α通过激活Wnt信号通路促进结肠癌干细胞的侵袭能力。
- 魏笑李昕孔飞飞马璐隋御陈冬梅徐方
- 关键词：结肠癌干细胞WNT信号通路HT29细胞
- MMS2和P53基因对结肠癌细胞增殖与凋亡的影响被引量：5
- 2016年
- 目的:探讨MMS2 siRNA与P53 siRNA对人高分化结肠癌细胞(THC-8307)的增殖与凋亡的相互调控作用。方法:以实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、蛋白印迹法(Western blot)分析检测细胞转染效率,选择沉默效率具有统计学意义的THC-8307细胞作为实验组,同时将未作处理的THC-8307作为空白对照,转染空质粒细胞作为阴性对照。采用qRT-PCR及Western blot分别检测干扰各组目的基因后其两基因相互关系及表达量。采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,以明确其对结肠癌细胞增殖与凋亡的作用。结果:实验组与对照组相比,分别沉默MMS2基因与P53基因的结肠癌细胞内P53与MMS2的mRNA与蛋白水平显著升高(P<0.05)。沉默MMS2实验组其早期凋亡与晚期凋亡率增加(P<0.05)。结论:MMS2和P53在结肠癌细胞增殖与凋亡方面起反向调控作用。
- 马琳园隋御马璐李昕李元杰徐方
- 关键词：P53RNA干扰人结肠癌细胞细胞凋亡
- hMMS2siRNA联合抗癌药对结肠癌细胞SW480增殖与凋亡的影响被引量：2
- 2014年
- 目的:探讨hMMS2 siRNA联合奥沙利铂和槐定碱对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:运用RNAi技术降低结肠癌细胞系SW480中hMMS2表达,用实时荧光定量PCR和免疫荧光化学检测hMMS2表达量,选择hMMS2低表达具有统计学意义的SW480细胞作为实验组,不作任何处理的SW480细胞作为空白对照组,转染阴性质粒的SW480细胞作为阴性对照组。将三组细胞加入奥沙利铂和槐定碱培养,48 h后运用MTT实验及流式细胞术对各组细胞进行增殖和凋亡检测。结果:与空白对照组相比,hMMS2 siRNA、奥沙利铂、槐定碱单独作用均能促进SW480细胞凋亡并抑制其增殖;与药物空白组相比,hMMS2 siRNA联合一种抗癌药物(奥沙利铂或槐定碱),对SW480细胞抑制增殖和促进凋亡作用比单一因素明显;hMMS2siRNA、奥沙利铂、槐定碱三种因素联合比任两种联合作用效果更加显著,以上结果均具有统计学意义(P<0.05)。结论:hMMS2 siRNA、奥沙利铂、槐定碱均能抑制结肠癌细胞系SW480增殖和促进其凋亡,三者联合具有协同作用。
- 王婷隋御张蕾李元杰贾伟金彩霞徐方
- 关键词：结肠癌流式细胞术
- 沉默Rev1基因对人结肠癌细胞放射敏感性的影响被引量：2
- 2018年
- 目的 探讨沉默Rev1基因对人高分化结肠癌细胞THC8307 X射线照射后增殖、凋亡的影响。方法 利用RNA干扰技术将Rev1基因的特异性片段转染THC8307细胞，用实时荧光定量PCR和Western blot检测转染后细胞中目的基因的表达；实验分空白对照组、阴性对照组、Rev1 siRNA组。分别给予0、6 Gy X射线照射，运用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测不同时段（0、24、48、72、96 h）细胞增殖情况，并绘制增殖曲线；流式细胞仪（FCM）检测不同剂量X射线处理后的细胞凋亡；Western blot检测各组PCNA、γ-H2AX、P53、Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果 与空白对照组相比，6 Gy X射线照射后，沉默Rev1基因组细胞增殖速率明显降低（t=7.53，P〈0.05），凋亡明显增加（t=6.23，P〈0.05），增殖细胞抗原（PCNA）表达下降（t=4.39，P〈0.05），γ-H2AX表达升高（t=5.48，P〈0.05），P53表达升高（t=5.09，P〈0.05）、Bax表达升高（t=3.32，P〈0.05）、Bcl-2表达降低（t=6.13，P〈0.05）。结论 沉默Rev1基因，抑制了X射线作用下的结肠癌细胞THC8307的增殖，促进了凋亡，增加了其对X射线的放射敏感性。
- 孔飞飞李元杰马璐隋御折虹徐方
- 关键词：结肠癌细胞X射线
- REV3基因联合抗癌药物对SW-480细胞的影响被引量：1
- 2012年
- 目的探讨REV3基因低表达联合抗癌药物对人结肠癌细胞(SW-480)增殖和凋亡的影响。方法利用RNAi技术降低REV3基因在SW-480细胞中的表达,以实时荧光定量PCR和免疫细胞化学检测REV3表达量的降低情况,选择低表达效率具有统计学意义的细胞作为实验组细胞,再用抗癌药物作用48h后运用MTT实验和流式细胞仪,对实验组和对照组细胞进行细胞增殖和凋亡变化情况的检测。结果与空白对照组相比,REV3基因低表达或抗癌药物(顺铂或槐定碱)单独作用均能促进SW-480细胞凋亡并抑制其增殖(P<0.01);实验组内,与药物空白组相比,REV3基因低表达的同时再联合一种抗癌药物(顺铂或槐定碱),对SW-480细胞凋亡和增殖的作用较单一因素更加显著;若将三者联合则比以上任一两种联合作用效果更为显著,以上结果均具有统计学意义(P<0.05)。结论 REV3基因低表达、顺铂、槐定碱或这三因素两两联合均可促进结肠癌SW-480细胞的凋亡并抑制其增殖,若三者同时联合作用效果更加显著,提示"基因+药物"联合抑癌具有协同增效的作用。
- 黄金娟隋御李元杰金彩霞张竞文贾伟李利坚周翔徐方
- 关键词：RNAI技术SW-480流式细胞仪
- RNA干扰联合阻断MMS2和REV3基因表达减轻结肠癌细胞系THC8307/L-OHP对奥沙利铂的耐药性被引量：2
- 2014年
- 目的探讨沉默REV3和MMS2逆转结肠癌耐药细胞系THC8307/L-OHP细胞对奥沙利铂(L-OHP)的耐药性。方法 THC8307/L-OHP细胞转染含microRNA片段重组质粒后,用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)和免疫荧光法检测目的基因表达,选择低表达效率具有统计学意义的细胞作为实验组细胞。分别应用MTT法、罗丹明123实验、流式细胞术检测细胞对L-OHP药物敏感度和细胞凋亡。结果与对照组相比,L-OHP对实验组细胞的半数抑制浓度(IC50)及耐药指数(RI)减低(P<0.05),实验组细胞经L-OHP处理后凋亡率显著增高(P<0.05),实验组细胞MMS2和REV3蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论下调REV3和MMS2在逆转人结肠癌细胞对L-OHP的耐药性和促进肿瘤细胞的凋亡上有一定作用。
- 李元杰张蕾隋御徐方
- 关键词：RNA干扰
- 干扰REV3L基因表达逆转结肠癌的耐药性被引量：3
- 2013年
- 目的探讨跨损伤DNA合成途径(TLS)关键基因REV3L的靶向下调对人耐药结肠癌细胞系耐药性的逆转作用。方法用RNA干扰技术(RNAi)沉默REV3L基因在人耐奥沙利铂结肠癌细胞系(THC8307/L-OHP)中的表达,以实时荧光定量PCR和免疫细胞化学检测REV3L基因mRNA及蛋白均低表达的细胞作为实验组。运用四甲基噻唑蓝(MTT)、流式细胞术和细胞形态学的方法检测肿瘤细胞耐药系数变化、耐药性相对逆转率及细胞凋亡的情况。结果转染mU6pro-siREV3质粒的实验组细胞REV3L基因的表达被成功抑制。基因低表达的细胞耐药系数明显低于空白对照组和阴性对照组,相对耐药逆转率显著高于阴性对照组(P<0.05)。细胞凋亡指标显示实验组细胞凋亡率显著高于两对照组(P<0.05)。结论下调REV3L基因的表达,可逆转人结肠癌细胞的耐药性并促进细胞凋亡,REV3L可以作为肿瘤基因治疗的潜在靶点。
- 李利坚隋御周翔王婷张蕾李元杰徐方
- 关键词：RNAI耐药性逆转
- REV3基因对结肠癌细胞遗传信息表达的影响
- 目的通过下调REV3基因对结肠癌细胞遗传信息表达的影响及对移植瘤动物成瘤的影响,评价REV3基因在肿瘤发生发展中的作用。
方法利用RNA干扰技术特异性的降低REV3基因在人类结肠癌细胞/(SW480、COLO-2...
- 隋御
- 关键词：RNA干扰
- 文献传递
- 靶向REV3基因siRNA抑制人结肠癌细胞裸鼠移植瘤增殖作用的研究被引量：2
- 2017年
- 目的检测靶向REV3基因的si RNA对裸鼠体内人类结肠癌SW480和COLO-205细胞移植瘤增殖的影响。方法采用脂质体-质粒转染技术构建REV3的siRNA,特异性地下调人类结肠癌细胞(SW480、COLO-205)中REV3基因的表达,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测细胞的干扰效率,选择低表达效率具有统计学意义的细胞作为实验组细胞。将空白对照组、阴性对照组及实验组细胞分别注入到相应组裸鼠体内。通过观察裸鼠移植瘤的体积及裸鼠的体重来评价REV3 siRNA对人结肠癌细胞裸鼠移植瘤增殖的影响。结果 REV3基因的表达下调后,裸鼠体内移植瘤(SW480、COLO-205)实验组细胞成瘤的瘤体体积较对照组细胞成瘤的瘤体体积明显减小,实验组成瘤裸鼠的体重较对照组成瘤裸鼠的体重明显增加(P<0.05);而阴性对照组和空白对照组的人结肠癌细胞裸鼠移植瘤的瘤体体积及裸鼠体重差别均无统计学意义(P>0.05)。结论特异性的下调REV3基因在结肠癌细胞(SW480、COLO-205)中的表达量,可能对裸鼠体内移植瘤的增殖具有一定的抑制作用。
- 隋御马璐辛淑文尹明伟贾伟王媛徐方
- 关键词：裸鼠移植瘤增殖
