张云 作品数:95 被引量:323 H指数:12 供职机构: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家重点基础研究发展计划 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 更多>>
H5N1亚型禽流感病毒HA基因在昆虫细胞中的表达及其生物活性鉴定 被引量:9 2007年 经RT-PCR扩增了H5N1亚型禽流感病毒血凝素基因(HA)片段,限制性内切酶酶切后将其克隆到pFastBacHTA杆状病毒转座载体,经酶切鉴定及测序,筛选出阳性重组转座载体pFastBac-H5。将pFastBacH5转化含有杆状病毒穿梭载体(bacmid)的DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑筛选和PCR鉴定获得重组杆状病毒穿梭载体rBacmid-H5。rBacmid-H5在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,SDS-PAGE蛋白电泳、Western blot、血凝试验和血凝抑制试验分析表明:分子量约63kDa重组血凝素蛋白(rH5)在sf9昆虫细胞中实现了高效表达。rH5具有血凝活性,而且其血凝活性能够被H5N1禽流感病毒高免血清所抑制;rH5免疫鸡诱导产生针对H5N1禽流感病毒亚型特异的血凝抑制抗体,说明表达的重组蛋白具有与天然蛋白相似的生物活性。 张晓霁 刘明 刘春国 杨涛 张云关键词:血凝素基因 杆状病毒 鸭坦布苏病毒病E-ELISA检测试剂盒及其制备方法 本发明涉及以一种坦布苏病毒E蛋白为包被抗原的酶联免疫吸附试验(E-ELISA)检测试剂盒、其制备方法及其应用。本发明试剂盒包含标准阳性对照鸭血清、标准阴性对照鸭血清、坦布苏病毒E蛋白(SEQ ID No.2)所包被的EL... 张云 刘明 陈志峰文献传递 番鸭呼肠孤病毒S14株M基因组的克隆与序列分析 利用RT-PCR方法首次全基因克隆了番鸭呼肠孤病毒S14株M1,M2和M3基因并进行序列分析,M1,M2和M3核苷酸长度分别为2 283 nt、2 155 nt和1 996 nt,它们编码的氨基酸长度为μA(732 aa... 张云 郭东春 耿宏伟 刘明关键词:番鸭呼肠孤病毒 系统进化分析 文献传递 鹅细小病毒胶体金免疫层析检测方法的建立 被引量:2 2015年 为建立一种快速、简便地检测鹅细小病毒(GPV)的方法,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,将其标记于抗GPV VP3蛋白单克隆抗体2D5上,在硝酸纤维素膜上喷涂抗GPV VP3蛋白单克隆抗体4A8和山羊抗小鼠IgG抗体作为检测线和质控线,制成检测GPV的胶体金免疫层析试纸条。结果显示,该试纸条检测GPV的最低TCID50为1×104.15/mL,用制备的试纸条仅检测GPV为阳性,而检测其他主要水禽病的病原结果均为阴性;同一批次和不同批次的试纸条对GPV阳性样品的检测结果均无差异。使用该试纸条对已知的80份粪便样品进行检测,阳性及阴性样品的检测符合率分别为96.49%和100%。结果表明,制备的试纸条具有良好的特异性、敏感性和重复性,为"小鹅瘟"的快速诊断提供了新的方法。 邵周伍林 白小飞 刘明 张云关键词:鹅细小病毒 胶体金 单克隆抗体 番鸭呼肠孤病毒σB编码基因克隆、表达与间接ELISA诊断方法的建立 本文对DRV S12 σB编码基因进行克隆,测序和原核表达,序列分析表明S12 σB与ARV的核苷酸和氨基酸同源性分别为59.3%-64.0%和60.9%-62.5%;表达的σB蛋白分子量为45kDa,与预期大小一致,W... 郭东春 张云 耿宏伟 胡奇林 郝雪 欧阳岁东关键词:番鸭呼肠孤病毒 基因表达 ELISA 基因克隆 文献传递 鹅细小病毒弱毒株的培育及其致弱前后全基因组中核酸变异的分析 被引量:1 2016年 为制备鹅细小病毒(GPV)弱毒株并研究其传代致弱前后的基因变化情况,本研究将GPV YG株在鹅胚成纤维细胞(GEF)和鸭胚成纤维细胞(DEF)中交替传代培养至72代次,并且对F0、F24、F48和F72代次病毒进行PCR全基因组扩增和测序。序列比对结果显示,F72代与F0代相比,5'和3'非编码区存在163个核苷酸差异,多数集中于反向终端重复序列(ITR)中,5'和3'两端均有6段碱基插入;编码区氨基酸序列比对结果显示,与F0代次病毒相比,F72代次病毒共有23个氨基酸位点突变,18个位于VP蛋白,5个位于非结构蛋白。病毒致病性试验表明,随着传代次数的增加,其毒力呈减弱趋势,并且F72代次病毒进一步致弱。本研究对GPV致弱后基因变化情况的分析及动物致病性试验结果为GPV毒力致弱机制的研究奠定了基础。 张青山 李晨曦 刘明 邵周伍林 张云关键词:鹅细小病毒 全基因组 重组禽流感病毒毒株、其制备方法及由其制得的疫苗 本发明公开了一种新的重组禽流感病毒毒株,命名为rgH5N3,该毒株的保藏号为CGMCC No.1339。该重组禽流感病毒毒株含有经分子修饰的H5亚型血凝素基因、N3亚型神经氨酸酶基因和具有高产性状禽流感病毒的6个内部基因... 刘明 张云 刘春国 童光志文献传递 鹅细小病毒鹅胚成纤维细胞适应病毒株的培育及序列分析 被引量:8 2014年 为培育高滴度的鹅细小病毒(GPV)细胞适应病毒株,本研究将原代鹅胚成纤维细胞(GEF)进行连续传代培养,并传至31代次,传代的GEF具有典型的成纤维细胞形态,培养48 h后形成单层细胞。选取不同代次的GEF接种GPV YN分离株,并在GEF中连续传代至F20代,病毒滴度由102.5TCID50/0.1 m L达到106.16TCID50/0.1 m L,表明GPV已适应GEF,并在感染GEF后的72 h产生明显细胞病变。对细胞适应毒F20和亲本病毒F0代进行基因序列比对结果显示,F20与F0存在133个核苷酸差异位点,主要集中在5'和3'非编码区。氨基酸序列共出现22个变异位点,主要集中在VP3蛋白中。这些变异与病毒对细胞培养的适应过程有关,其机理有待进一步研究。 邱娜 刘明 白小飞 邵周伍林 赵健 张云关键词:鹅细小病毒 禽流感病毒A/Turkey/Canada/63毒株HA和NA基因的克隆及序列分析 被引量:8 2006年 用SPF鸡胚增殖禽流感病毒(AIV)A/Turkey/Canada/63毒株,提取病毒基因组总RNA,应用RT-PCR技术分别扩增该病毒分离株的HA和NA基因全片段,并克隆到pMD18-T载体上。测序结果表明,该毒株的HA基因全长为1745bp,含有完整的阅读框架,编码566个氨基酸;NA基因全长1467bp,编码469个氨基酸。BLAST序列比较结果显示,该毒株HA基因属于H6亚型,NA基因属于N2亚型。将获得的HA和NA基因与AIV数据库中H6和N2基因进行遗传演化分析,表明该毒株HA基因与其他H6基因核苷酸的同源性为80.5%~87.3%,氨基酸的同源性为88.0%~93.1%;NA基因与其他N2基因核苷酸的同源性为86.0%~93.5%,氨基酸的同源性为90.6%~96.3%。 潘蔚绮 刘明 刘春国 张云 杨涛关键词:HA基因 NA基因 鹅细小病毒弱毒株的培育及其致弱前后全基因组中核酸变异的分析 为制备鹅细小病毒(GPV)弱毒株并研究其传代致弱前后的基因变化情况,本研究将GPV YG株病毒在鹅胚成纤维细胞(GEF)和鸭胚成纤维细胞(DEF)中交替传代培养至72代次,并且对F0、F24、F48和F72代次病毒进行P... 张青山 李晨曦 刘明 邵周伍林 张云关键词:鹅细小病毒 全基因组 文献传递