陆丽峰
- 作品数：10 被引量：33H指数：4
- 供职机构：南华大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 二烯丙基二硫化物对人胃癌MGC803细胞G_2/M期检查点激酶Chk1/2的影响被引量：3
- 2009年
- 目的:观察二烯丙基二硫化物(DADS)对人胃癌MGC803细胞的细胞周期检查点激酶1(Chkl)和细胞周期检查点激酶2(Chk2)的影响。方法:RT-PCR检测MGC803细胞的Chk1和Chk2激酶在mRNA水平的改变;Western blotting检测Chk1、Chk2的表达和Chk1、Chk2的磷酸化程度,免疫共沉淀检测Chk1、Chk2与细胞分裂周期蛋白25C(Cdc25C)结合情况。结果:RT-PCR检测显示,Chkl和Chk2 mRNA水平在处理组与未处理组之间无明显差异(P>0.05)。Western blotting检测显示,MGC803细胞分别受30 mg.L-1DADS刺激1 h和2 h后,与未处理组相比,总Chk1和Chk2蛋白表达在细胞处理前后均无明显改变(P>0.05);但处理组细胞Chk1磷酸化程度明显增加,并呈时间依赖性(P<0.01),而Chk2在处理组与未处理组间磷酸化程度无明显差异(P>0.05)。免疫共沉淀分析表明,MGC803细胞中DADS能促进Chk1与Cdc25C结合,而对Chk2与Cdc25C结合无影响。结论:DADS可能是通过激活Chk1引起人胃癌MGC803细胞G2/M期阻滞。
- 凌晖吉晓霞文玲陆丽峰王莉周建国董琳夏红苏琦
- 关键词：MGC803细胞二烯丙基二硫化物
- DADS诱导人胃癌细胞周期阻滞相关基因的差异表达被引量：9
- 2009年
- 目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人胃癌MGC803细胞G2/M周期阻滞相关基因表达的变化。方法MTT法、流式细胞术分别分析DADS对MGC803细胞的抑制作用与细胞周期分布的影响;功能基因芯片检测周期相关差异表达基因;Western blot、RT-PCR验证周期相关基因的表达。结果MTT法、流式细胞术证明DADS可明显抑制MGC803细胞增殖并诱导G2/M期阻滞。基因芯片结果显示,30 mg.L-1DADS作用MGC803细胞4 h后,表达上调的基因有CDC45L、CDK5R1、p21、CUL4A、GADD45α、RAD17、TP53,下调的基因是ANAPC5、ATR、BRCA1、CCNA2、CCNB2、CCNE1、CCNE2、CDC16、CDC6、CDK5RAP1、GTF2H1、MCM5、RAD9A、RGC32。RT-PCR显示30 mg.L-1DADS处理MGC803细胞4、8、12 h后,p21、GADD45α时间依赖性的表达增强(P<0.05),CyclinB1呈时间依赖性的表达降低(P<0.05)。TP53在4、8、12 h后与对照组比较表达明显增强(P<0.05)。Western blot结果表明,30 mg.L-1DADS作用MGC803细胞6、12、24 h后,p53、GADD45α、p21蛋白表达上调,CyclinB1蛋白表达下调(P<0.01)。结论DADS诱导人胃癌MGC803细胞G2/M周期阻滞是由多基因协同作用的结果,可能通过两种途径共同调节完成的。
- 黄炎姜浩周建国王莉陆丽峰石莺唐海林林敏凌晖苏琦
- 关键词：二烯丙基二硫人胃癌MGC803细胞基因芯片
- Chk1/2转基因MGC803细胞系的建立与鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的构建Chk1/2基因的真核表达载体和建立高表达Chk1/2基因人胃癌MGC803细胞,为研究Chk1/2功能奠定基础。方法参照野生型Chk1/2基因mRNA全序列,在cDNA两端各设计一条对应引物,并引入各自的酶切位点。从人胃癌MGC803细胞中提取mRNA作为模板合成Chk1/2 cDNA第一链,并扩增目的基因全表达序列片断,双酶切后定向克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体,经氨苄青霉素筛选阳性重组质粒,菌液PCR及测序法对重组质粒进行鉴定。用脂质体将重组质粒转染入MGC803细胞,经G418筛选后,RT-PCR及Western blot检测表达产物。结果菌液特异性PCR结果表明克隆的基因片断分别为1.4 kb和1.6 kb,测序分别证实为Chk1和Chk2基因,经NCBIBLAST分析与Genbank中Chk1基因的同源性为100%,编码的氨基酸同源性为100%,Chk2基因的同源性为99%,编码的氨基酸同源性为100%。G418筛选转染细胞4周后获得稳定转染空载体pcD-NA3.1(+)的细胞克隆株和稳定转染重组质粒的MGC803细胞。经RT-PCR及Western blot鉴定,Chk1/2在MGC803细胞中的表达比对照组明显增加。结论成功构建Chk1/2基因真核表达载体与Chk1/2高表达MGC803细胞,为研究二烯丙基二硫诱导MGC803细胞G2/M期阻滞的机制奠定了基础。
- 陆丽峰苏波姜浩戴文香向姝霖唐海林凌晖苏琦
- 关键词：真核表达转染人胃癌MGC803细胞
- 二烯丙基二硫对转Chk基因人胃癌MGC803细胞G/_2//M期的影响
- 目的:二烯丙基二硫/(diallyl disulfide, DADS/)可诱导多种肿瘤细胞G2//M期阻滞,但其机制尚不十分清楚。本研究旨在建立稳定高表达Chk1、Chk2基因的人胃癌MGC803细胞株,进一步研究Chk...
- 陆丽峰
- 关键词：二烯丙基二硫CHK1CHK2稳定转染人胃癌MGC803细胞
- 文献传递
- 二烯丙基二硫对人胃癌MGC803细胞G2／M期检查点Chk1与Chk2的影响被引量：5
- 2013年
- 目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对人胃癌MGC803细胞G2/M期检查点Chk1与Chk2的影响。方法流式细胞术检测细胞周期改变;Northern blot、Westernblot与免疫细胞化学检测DADS处理MGC803细胞的Chk1与Chk2表达。结果流式细胞术分析显示,30 mg.L-1DADS呈时间依赖性阻滞MGC803细胞在G2/M期(P<0.05);Northern blot检测表明,DADS不同时间作用MGC803细胞后,Chk1与Chk2 mRNA表达与未处理组差异无显著性(P>0.05);免疫细胞化学发现Chk1与Chk2表达与未处理组无明显改变(P>0.05);Western blot DADS在不同时间对MGC803细胞Chk1与Chk2总蛋白表达无改变(P>0.05),而磷酸化的Chk1表达呈时间依赖性增加(P<0.05),但磷酸化的Chk2无明显改变(P>0.05)。结论 DADS阻滞MGC803细胞G2/M期与磷酸化Chk1有关。
- 陆丽峰苏波姜浩戴文香向姝霖唐海林凌晖苏琦
- 关键词：二烯丙基二硫G2/M期检查点CHK1CHK2
- RNA干扰Chk1/2调控二烯丙基二硫诱导的G2/M期阻滞作用及相关周期蛋白表达被引量：9
- 2010年
- 在细胞周期检测点信号传导通路中,Chkl和Chk2起着重要作用,主要参与G2/M期细胞周期检测点信号传导.首先采用RNAi技术在BGC823细胞中将Chk1、Chk2基因沉默,Chk1、Chk2 siRNA转染BGC823细胞后24h加入15mg/L二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS),接着通过Real-timePCR、Western blot分析Chk1、Chk2基因在转染前后的表达差异,然后运用流式细胞术和Western blot分析Chk1、Chk2基因沉默后对DADS诱导的细胞周期G2/M期阻滞作用及相关周期蛋白CDC25C和cyclinB1表达的影响.实验结果表明,与未转染对照组相比,转染Chk1、Chk2siRNA后BGC823细胞中Chk1、Chk2表达明显被抑制,二者的mRNA表达分别下降84.7%和69.0%,蛋白质水平分别下降73.4%和78.5%.流式细胞术分析结果发现,ChklsiRNA转染的BGC823细胞在15mg/LDADS处理24h后,G2/M期比例由单纯DADS处理组的58.1%降至10.4%(P<0.05).但Chk2 siRNA转染后加入15mg/LDADS,与单独15mg/LDADS作用相比,细胞周期G2/M期比例差异不明显(P>0.05).Chk1和Chk2下游分子的改变显示,DADS可抑制BGC823细胞中CDC25C和cyclinB1表达(P<0.05),但Chk1基因沉默后加入DADS,CDC25C和cyclinB1表达却不被抑制(P>0.05),Chk2基因沉默后对DADS抑制CDC25C和cyclinB1表达的作用无影响.由此得出结论,Chkl基因沉默可消除DADS诱导BGC823细胞G2/M期阻滞作用,DADS阻滞G2/M期可能是通过Chk1/CDC25C/cyclinB1信号通路起作用.
- 凌晖陆丽峰文玲何洁谭晖夏红苏琦
- 关键词：RNA干扰细胞周期二烯丙基二硫CYCLINB1
- 二烯丙基二硫通过磷酸化Chk1负调控Cdc25C/CyclinB1/CDK1通路阻滞白血病K562细胞G_(2)/M期
- 2024年
- 目的:研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人白血病K562细胞周期阻滞及其分子机制。方法:采用CCK-8、细胞计数及流式细胞术观察DADS对K562细胞增殖与周期阻滞效应。Western Blot检测DADS对K562细胞PCNA、Chk1/2以及下游分子Cdc25C、CyclinB1与CDK1表达的影响。结果:CCK-8检测显示,15μmol/L、30μmol/L、60μmol/L、120μmol/L、240μmol/L DADS处理后,呈浓度依赖性抑制K562细胞增殖,抑制率分别为32.48%、59.34%、66.42%、77.06%、81.05%(P<0.05)。对照组与Tween80组无抑制作用(P>0.05)。细胞计数结果显示,30μmol/L、60μmol/L与120μmol/L DADS处理K562细胞后,群体倍增时间分别为22.71±0.29、36.69±0.93与73.02±0.87呈浓度依赖性增加(P<0.05),而Tween80组与对照组无明显差异(P>0.05)。流式细胞术检测显示,60μmol/L与120μmol/L DADS作用K562细胞24 h与48 h后,G_(2)/M期百分率分别增加到17.6%与28.5%和18.6%与34.4%,较对照组有显著性差异(P<0.05)。60μmol/L DADS作用K562细胞1 h、2 h、4 h、8 h和24 h后,PCNA表达呈时间依赖性表达下调(P<0.05)。p-Chk1表达呈时间依赖性上调(P<0.05),而Chk1、Chk2与p-Chk2表达无明显差异(P>0.05)。并且,Cdc25C、CyclinB1和CDK1分别呈时间依赖性下调(P<0.05),但是,14-3-3蛋白无明显改变(P>0.05)。结论:DADS可磷酸化Chk1通过Cdc25C/CyclinB1/CDK1通路抑制K562细胞增殖与阻滞G_(2)/M期。
- 陆丽峰陆丽峰夏红何洁凌晖谭晖
- 关键词：二烯丙基二硫白血病K562细胞
- 二烯丙基二硫诱导肿瘤细胞G_2/M期阻滞的分子机制被引量：4
- 2008年
- 二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对乳腺癌、肺癌、膀胱癌、结肠癌、胃癌、白血病等许多肿瘤均有明显的抑制作用,其作用与G2/M期阻滞有关。DADS阻滞G2/M期的分子机制包括抑制p34cdc2的活性,激活MAPK信号通路,增加p21WAF1/cip1蛋白表达与ROS生成等。
- 陆丽峰苏琦
- 关键词：二烯丙基二硫肿瘤
- 二烯丙基二硫对转Chk基因人胃癌MGC803细胞G<sub>2</sub>/M期的影响
- 目的:二烯丙基二硫(diallyl disulfide, DADS)可诱导多种肿瘤细胞G2/M期阻滞,但其机制尚不十分清楚。本研究旨在建立稳定高表达Chk1、Chk2基因的人胃癌MGC803细胞株,进一步研究Chk1、C...
- 陆丽峰
- 关键词：二烯丙基二硫CHK1CHK2人胃癌MGC803细胞
- DADS对Chk1/2基因高表达人胃癌MGC803细胞G_2/M期的影响被引量：6
- 2016年
- 目的在建立Chk1/2基因高表达人胃癌MGC803细胞基础上,探讨DADS对Chk1/2高表达MGC803细胞G_2/M期的作用。方法分别采用集落形成实验、流式细胞术、RTPCR、Western blot等方法,检测DADS对Chk1/2高表达MGC803细胞增殖、细胞周期分布、Chk1与Chk2 mRNA与蛋白、p-Chk1与p-Chk2及CDC25C与cyclinB1的表达。结果软琼脂集落形成实验显示,30 mg·L^(-1)DADS作用Chk1与Chk2高表达MGC803细胞组集落形成率均明显低于对照组与空载体组(P<0.05)。流式细胞术显示,30 mg·L^(-1)DADS作用12、24、36、48 h后,Chk1/MGC803细胞G_2/M期分别为41.3%、57.4%、68.9%、42.9%,较MGC803细胞与Chk2/MGC803细胞明显增加(P<0.05)。而Chk2/MGC803细胞与MGC803细胞差异没有显著性(P>0.05)。RT-PCR显示,Chk1/MGC803与Chk2/MGC803细胞Chk1与Chk2mRNA水平较对照组无明显变化;并且,Western blot显示,Chk1与Chk2总蛋白及p-Chk2的表达无明显改变,但pChk1呈时间依赖性上调,CDC25C与cyclinB1呈时间依赖性下调(P<0.05)。结论 DADS可阻滞Chk1/MGC803细胞于G_2/M期,与上调磷酸化Chk1和下调CDC25C与cyclinB1有关。
- 夏红向姝霖曾颖陆丽峰刘芳凌晖苏波苏琦
- 关键词：G2/M期CYCLINB1
