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东亚三角涡虫DjWnt5a克隆及在胚胎不同发育阶段中的表达被引量：2: 2016年; WNT(wingless-type MMTV integration site family)蛋白是一类分泌性糖蛋白家族,Wnt5a为非经典Wnt蛋白的典型代表,在各种器官的发育中发挥重要作用。为了探索东亚三角涡虫Dj Wnt5a基因在涡虫胚胎不同发育阶段中的表达和功能,利用RT-PCR(reverse transcription PCR)和RACE(rapid-amplification of c DNA ends)技术克隆并分析了Dj Wnt5a c DNA的表达。结果表明,Dj Wnt5a基因由1 523 bp组成,编码371个氨基酸,其中含有23个保守的半胱氨酸结构域。利用MAGE 5.2构建进化树分析发现,东亚三角涡虫与地中海涡虫的Wnt5a聚群,并位于两侧对称动物的基部,可能是Wnt5a的原始类型。利用整体原位杂交技术分析Dj Wnt5a基因的表达,结果显示,Dj Wnt5a基因在涡虫发育的第三阶段开始表达,主要集中在胚胎咽及胚带;随着胚胎发育直至完全孵化出幼虫,Dj Wnt5a基因逐步在神经原基和中枢神经系统表达。由此推断,东亚三角涡虫Dj Wnt5a基因在涡虫胚胎发育时,参与神经原基的形成和分化,是涡虫胚胎神经发育必不可少的基因之一。; 甄辉吴素格鹿晴晴赵博生; 关键词：东亚三角涡虫胚胎发育

镉胁迫对涡虫DjHsp70,DjP53基因表达量的影响被引量：5: 2015年; 本文旨在运用半定量RT-PCR技术,研究不同浓度及不同时间镉胁迫下,涡虫(Dugesia japonica)体内Dj Hsp70及Dj P53基因的表达规律。提取相同暴露时间(48 h)不同浓度(0,20滋g/L,40滋g/L,80滋g/L,160滋g/L,320滋g/L)及相同暴露浓度(25滋g/L)不同暴露时间(0,1 d,3 d,6 d,9 d,15 d)镉胁迫下涡虫组织总RNA,反转录得到cD NA,以茁-actin作为内参,应用半定量RT-PCR方法,检测Dj Hsp70及Dj P53基因的表达量。结果表明:与对照相比,重金属镉胁迫导致涡虫体内Dj Hsp70、Dj P53基因表达量均上调,存在明显的"毒理兴奋"作用。在25滋g/L镉离子处理15 d后Dj Hsp70基因表达呈现下降趋势。因此,半定量RT-PCR方法应用于淡水生态环境镉污染评价具有较大的潜力。; 刘婧婧吴素格张秀芳; 关键词：镉涡虫 RT-PCR

东亚三角涡虫Djtraf3基因的时空表达模式被引量：1: 2015年; 肿瘤坏死因子受体相关因子3(TRAF3)作为TRAF家族的成员之一,通过介导TLRs信号通路,参与动物的免疫反应。通过构建东亚三角涡虫Djtraf3的cDNA文库获得Djtraf3基因并分析基因结构。结果发现,该最大开放阅读框为564bp,编码的蛋白质含187个氨基酸,含有1个TRAF结构域。进化分析表明,DjTRAF3和果蝇的TRAF3聚群,位于进化树的基部;整体原位杂交结果显示,在涡虫成体及不同再生阶段,Djtraf3在整个肠部表达。这些结果为进一步探究其功能提供了依据和方向。; 范晓静周鲁明刘殿辰赵博生; 关键词：东亚三角涡虫 RNA探针原位杂交

东亚三角涡虫胰蛋白酶Djtry的表达和酶活分析被引量：2: 2012年; 通过对东亚三角涡虫胰蛋白酶Djtry氨基酸序列比对分析,发现保守的催化三联体结构中第一位的His被Lys所取代。为了探究这种突变是否会对胰蛋白酶的活性有影响,文章构建了原核表达重组质粒pET-28a-Djtry,转化到E.coli BL21中,利用IPTG诱导表达,对表达的重组蛋白进行变性、复性、纯化以及Westernblotting鉴定,获得成分均一的活性蛋白。利用牛胰蛋白酶为标准品,胰蛋白酶特异性底物BAEE,检测Djtry酶活力与比活力。SDS-PAGE电泳表明诱导表达的融合蛋白为包涵体,分子量约为26 kDa,Western blotting结果显示为目的蛋白,对复性纯化的目的蛋白进行酶活检测发现,突变型胰蛋白酶Djtry仍然保持了胰蛋白酶催化性质,但是催化活性相对较弱。; 周鲁明刘殿辰孙欢欢赵博生; 关键词：东亚三角涡虫胰蛋白酶蛋白表达酶活

青岛文昌鱼S-腺苷高半胱氨酸水解酶基因的组织特异性表达: 2011年; 为了探索文昌鱼S-腺苷高半胱氨酸水解酶AdoHcyase基因在文昌鱼组织中的表达分布情况,利用组织原位杂交技术,以地高辛标记的反义RNA为探针,检测了文昌鱼AdoHcyase基因在组织中的表达分布特点。结果表明,AdoHcyase基因在雌性文昌鱼的卵巢、肝盲囊和后肠杂交信号十分强烈,在内柱、鳃等组织中也有微弱信号表达,而精巢、肌肉、脊索等组织中没有阳性信号。结果初步表明,文昌鱼AdoHcyase的功能是动物AdoHcyase的基本功能,与卵母细胞的成熟和肝脏的功能有关。本实验为以文昌鱼作为模式生物开发用于抑制AdoHcyase的低毒性药物提供了依据。; 杜晓琪赵博生; 关键词：青岛文昌鱼原位杂交

东亚三角涡虫RhoA基因的原核表达及组织定位: 2011年; 为了表达东亚三角涡虫RhoA蛋白,采用温控表达载体pBV220-IL1,构建了原核表达重组质粒pBV220-IL1-RhoA,转化到E.coli DH5α中,利用42℃热激诱导表达,并进行了分离纯化和Western杂交鉴定,利用荧光免疫组织化学技术检测了在涡虫体内的分布。SDS-PAGE电泳表明诱导表达的融合蛋白约为18 kDa,Western杂交结果显示是目的蛋白,荧光免疫组织化学结果表明RhoA蛋白在东亚三角涡虫神经系统处表达。; 聂敏赵博生; 关键词：东亚三角涡虫 RHOA 基因表达

双酚A对三角涡虫DjSOD,DjCAT,DjGPx基因及相关酶活性的影响被引量：1: 2015年; 本试验旨在探讨环境内分泌干扰物双酚A(BPA)对涡虫抗氧化酶(SOD,CAT,GPx)的活性及相关基因表达的影响。采用不同浓度的BPA处理涡虫48 h,然后测定抗氧化酶活性,并应用半定量RT-PCR技术探讨相关基因的变化。在BPA胁迫下,SOD活性呈现上升趋势、CAT活性表现出了先上升后下降的趋势,GPx活性总体上变化不大。随BPA浓度的增加,Dj SOD m RNA表达量上升,并呈现剂量-反应关系,Dj CAT及Dj GPx m RNA表达量也呈现出明显的上调现象,但变化趋势并不同于酶活性。BPA诱导涡虫的氧化应激反应,改变抗氧化酶SOD、CAT基因的转录水平。; 邹杨建吴素格李娟类艳贝张秀芳; 关键词：双酚A 三角涡虫抗氧化酶基因表达

p53同系物Djp53在涡虫胚基早期发育阶段的组织特异性表达及其在再生中的作用被引量：2: 2011年; 为了探索东亚三角涡虫Djp53基因在涡虫组织中的表达和功能,利用整体原位杂交、RT-PCR技术,检测了涡虫Djp53基因在组织中的表达分布特点,结果表明,Djp53基因在再生1、3、5天的胚基中具有较强的阳性信号,且3天的表达量最高;而在再生7、10天和成虫的实质组织中表达较弱.RNA干扰后的RT-PCR检测显示,Djp53表达量显著下降,涡虫不能正常再生或出现眼点缺陷.由此推断,东亚三角涡虫Djp53基因在早期胚基发育阶段,通过调节多功能干细胞的迁移和增殖分化影响早期胚基的形成,是涡虫早期胚基发育必不可少的一个基因,并且在涡虫成体和再生后期对多功能干细胞的维持具有重要的作用.; 吴素格杨武周鲁明赵博生; 关键词：东亚三角涡虫 RT-PCR技术

东亚三角涡虫Dj14-3-3ε原核表达及鉴定: 2010年; 从东亚三角涡虫cDNA文库中挑选出克隆M455,经BLASTP确定隶属于14-3-3ε基因家族,具有14-3-3蛋白的保守结构域命名为Dj14-3-3ε基因.该基因含有完整的最大开放阅读框(ORF),编码蛋白约10.7 kDa.构建pET28b-Dj14-3-3ε原核表达载体,通过IPTG诱导在大肠杆菌中表达,western blot鉴定,表明原核表达载体构建成功,并在大肠杆菌中正常表达.; 杨武赵博生; 关键词：原核表达涡虫

东亚三角涡虫PSA蛋白的表达、鉴定及抑菌分析: 2011年; PCR扩增含酶切位点的DjPsa基因(ORF),构建了DjPsa基因的原核表达载体pET-28a(+)-DjPsa,转化入E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE、Western blotting(His-Tag抗体)分析表达蛋白,抑菌试验检测其活性。结果表明,重组质粒在E.coli BL21(DE3)中以包涵体的形式高效表达,其蛋白的分子大小约为25 kD;Western blotting检测说明得到的蛋白为PSA重组蛋白;抑菌试验显示复性后的PSA具有较强的抑菌作用,为进一步研究它的功能、活性提供基础。; 刘斌赵博生; 关键词：东亚三角涡虫

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