江南大学生物工程学院生物资源与生物能源研究中心
- 作品数：45 被引量：226H指数：9
- 相关作者：李彧娜左志锐佟小雪李宁莫静燕更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划江苏省“青蓝工程”基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程文化科学更多>>
- 表面展示表达植酸酶的重组酿酒酵母构建及酒精发酵
- 2015年
- 以淀粉为原料的同步糖化发酵是目前乙醇生产的主要途径之一。然而原料中含有的植酸不仅影响酒精发酵效率,而且也会导致环境中难以被植物吸收的磷含量的增加,加剧环境污染。将来源于大肠杆菌的植酸酶基因与酵母编码α-凝集素C端编码序列连接并置于α-因子分泌信号肽下游,构建植酸酶表面展示表达重组载体pMGK-AG-phy并转化工业酿酒酵母,成功获得了在细胞表面锚定表达植酸酶的重组菌PHY。重组酵母的植酸酶表达水平达到6.4 U/g(菌体湿重),其最适温度为55℃,最适pH 4.0,在pH 3.5–4.5范围内具有较高的活性。以玉米粉为原料的同步糖化发酵实验表明,重组酵母PHY的生长速度高于出发菌株,同时酒精产量相较于出发菌株提高了3.7%。更为重要的是发酵后酒糟中植酸磷含量与对照相比降低了91%。构建的表面展示表达植酸酶的重组工业酿酒酵母能够有效降低植酸含量,提高了酒糟的利用价值,减少磷排放,对燃料酒精的环境友好生产具有重要的借鉴意义。
- 肖艳陈献忠沈微杨海泉樊游
- 关键词：酿酒酵母植酸酶燃料酒精
- 大肠杆菌琥珀酸和乙酸合成途径的删除及其重组菌株D-乳酸发酵性能的研究
- 本文删除了重组大肠杆菌CICIMB0013-030(ack-pta,pps,pflB)的琥珀酸和乙酸合成途径。考察了野生型B0013及其多基因突变菌株B0013-030、B0013-040B(B0013-030frdA)
- 王正祥周丽田康明左志锐陈献忠石贵阳Suren Singh
- 文献传递
- 解淀粉芽孢杆菌中温α-淀粉酶基因的克隆、表达与酶学性质分析被引量：2
- 2009年
- 以中温α-淀粉酶生产菌株Bacillus amyloliquefaciens M23基因组DNA为模板,PCR扩增得到了2.0 kb α-淀粉酶基因全长序列。该基因由上游启动子220 bp,结构基因1544 bp和终止序列320 bp构成。将无信号肽的α-淀粉酶结构基因amyQ,克隆入表达载体pET28a,转化E.coli BL21(DE3),经诱导,测定α-淀粉酶活性。结果表明:α-淀粉酶基因amyQ获得了活性表达,酶活力为2.297 U/mL,SDS-PAGE电泳结果显示出分子量约为58 kDa特异性蛋白质条带。酶学性质分析表明,重组α-淀粉酶的最适反应温度为60℃,最适反应pH为6.5,在60℃保温15 min保持85%以上活性,超过15 min,酶迅速失活,在pH 5.5～10.0环境下稳定。水解产物分析表明:淀粉水解终产物主要为麦芽寡糖和糊精和少量葡萄糖。
- 刘洋沈微石贵阳王正祥
- 关键词：解淀粉芽孢杆菌基因克隆酶学性质
- 大肠杆菌琥珀酸和乙酸合成途径的删除及其重组菌株的D-乳酸发酵被引量：8
- 2011年
- 菌株CICIM B0013-030(B0013,ack-pta,pps,pflB)可积累D-乳酸作为主要发酵产物,然而副产物琥珀酸和乙酸的含量分别高达乳酸的11.9%和7.1%。为构建副产物含量低的产D-乳酸重组大肠杆菌菌株,本研究删除了菌株B0013-030的琥珀酸(frdA)和乙酸(tdcDE)合成途径,并考察了重组菌株在摇瓶和发酵罐中经两阶段发酵(好氧生长菌体和厌氧发酵产酸)利用葡萄糖发酵D-乳酸的性能。结果表明,分别构建含有frdA::difGm和tdcDE::difGm突变盒的重组质粒,并利用Red重组系统将突变盒整合于染色体上的目的基因,再利用Xer重组系统去除抗生素抗性基因,依次获得了重组菌株B0013-040B(B0013-030,frdA)和B0013-050B(B0013-040B,tdcDE)。摇瓶发酵结果表明,frdA基因的删除使得菌株B0013-040B副产物琥珀酸的含量降低了80.8%;在7 L发酵罐中进行乳酸发酵,菌株B0013-040B的D-乳酸产量达114.5 g/L,光学纯度大于99.9%,但仍积累1.0 g/L琥珀酸和5.4 g/L乙酸。进一步删除了tdcD和tdcE基因的菌株B0013-050B,在7 L发酵罐中生产111.9 g/L D-乳酸,乙酸和琥珀酸的合成量分别降低为0.4 g/L,其他副产物含量也维持较低水平,表明该菌株具有较优良的D-乳酸发酵性能。
- 周丽田康明左志锐陈献忠石贵阳Suren Singh王正祥
- 关键词：D-乳酸大肠杆菌琥珀酸乙酸
- 响应面法优化Rhizopus microsporus var.chinensis产生淀粉酶的条件被引量：2
- 2010年
- 对Rhizopus microsporus var.chinensis固态发酵产生淀粉酶的条件进行了优化。首先采用单因子实验确定最适固态发酵基质为小麦麸皮,最适碳源和氮源分别为可溶性淀粉和硫酸铵,通过控制培养基初始pH为3.0、初始湿度为70%时,使其生淀粉酶产量提高3.5倍。在此基础上,利用响应面中心组合设计对显著因素进行优化,得出每500mL三角摇瓶中含小麦麸皮13.7g、可溶性淀粉0.063g、硫酸铵0.052g时,生淀粉酶产量达到48.50U/mL,比初始产量提高了8倍。
- 李彧娜石贵阳王武王正祥
- 关键词：生淀粉酶响应面优化RHIZOPUS
- 传统发酵豆制品中原核微生物多样性的研究被引量：14
- 2011年
- 通过构建16SrDNA基因文库的方法,对2份不同种类的豆酱样品中原核微生物的多样性进行了分析。另外动态监测了一份酱油酱醅样品发酵过程中3个不同阶段原核微生物的变化情况。研究表明,发酵样品中的优势乳酸菌为魏斯氏菌(Weissella cibaria,Weissella confusa,Weissella paramesenteroides)和嗜盐四联球菌(Tetragenococcus halophilus)。另外还检测到芽孢杆菌、葡萄球菌、肠杆菌、柠檬酸杆菌、泛菌、不动杆菌、库特氏菌等细菌种群的存在。
- 陈浩樊游陈源源左志锐王正祥
- 关键词：微生物多样性
- 分子生物学教学模式改革的探索与实践被引量：16
- 2010年
- 分子生物学是生物工程与生物科学类本科专业的重要(专业)基础课程,具有知识量大、发展迅速、与其他相关学科关系密切等特点。如何使学生能够掌握分子生物学基本理论和技术并学以致用是教学过程中需要探索和实践的课题。
- 陈献忠王正祥
- 关键词：分子生物学教学模式教学评价
- 产甘油假丝酵母与酿酒酵母胞浆3-磷酸甘油脱氢酶基因的功能比较被引量：5
- 2009年
- 胞浆3-磷酸甘油脱氢酶(GPD)是酿酒酵母细胞甘油合成过程中的关键限速酶.尽管高产甘油菌株产甘油假丝酵母基因组中编码该酶的基因CgGPD已经被克隆出来,但是具体的功能,特别是与酿酒酵母GPD1和GPD2基因的功能比较值得进一步研究.以酿酒酵母渗透压敏感型的gpd1/gpd2和gpd1突变株为宿主,分别导入CgGPD、GPD1和GPD2基因,比较分析了CgGPD、GPD1和GPD2基因在高渗透压胁迫条件下和厌氧环境中的表达调控,及其对细胞甘油合成能力的影响.研究发现,GPD1基因受到渗透压诱导表达,GPD2基因在细胞厌氧条件下起着氧化还原平衡调节作用,而CgGPD基因不仅能够在渗透压胁迫条件下通过过量快速合成甘油调节渗透压平衡,而且能够在厌氧培养环境中互补GPD2基因的缺失,使gpd1/gpd2缺失突变株能够正常生长,同时提高了突变株的甘油合成能力.结果表明,CgGPD基因在gpd1/gpd2缺失突变株中既具有GPD1基因的功能,又能发挥GPD2基因的功能.
- 陈献忠方慧英饶志明沈微诸葛斌王正祥诸葛健
- 关键词：产甘油假丝酵母3-磷酸甘油脱氢酶甘油合成渗透压调节
- 黑曲霉电转化条件的研究被引量：4
- 2010年
- 研究避免了繁琐的原生体制备过程,直接使用萌发的黑曲霉孢子进行电转化,以潮霉素B作为筛选标记,从孢子萌发时间、电场强度及质粒浓度等方面考察了电转化效率的影响因素。研究表明,针对A.nigerMGG029-ΔaamA,其理想的电转化条件:孢子龄为4d,孢子萌发时间为2h,电场强度为5kV/cm。在上述条件下分别使用1μg环状或线状pBC-Hygro质粒DNA进行转化,平均可以得到34个和51个转化子,而在同样条件下使用质粒pRS303H平均可以获得163个和258个转化子。
- 李松王正祥
- 关键词：黑曲霉电转化
- 产甘油假丝酵母胞浆3-磷酸甘油脱氢酶基因(CgGPD)功能分析被引量：2
- 2008年
- 【目的】从高产甘油生产菌株产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes)基因组中克隆了NAD^+依赖3-磷酸甘油脱氢酶编码基因(CgGPD),但是该基因及其上游调控序列具体的功能还是未知的。本文研究了CgGPD基因及其上游调控序列的功能。【方法】本文以酿酒酵母(Saccharomyces cere- visiae)及其渗透压敏感型突变株为宿主,构建3种不同的酵母表达载体导人酵母细胞,研究了不同酵母转化子在渗透压胁迫条件下CgGPD基因表达对细胞的耐高渗透压胁迫应答及其细胞的甘油合成能力的影响。【结果】实验结果表明无论是以来源于S.cerevisiae的TPI启动子还是来源于CgGPD基因的启动子,过量表达CgGPD基因的转化子均能够显著加速葡萄糖消耗速度和提高甘油合成能力,在gpd1/gpd2突变株中表达CgGPD基因能够消除细胞对外界高渗透压的敏感性,同时转化子胞内甘油大量积累。【结论】CgGPD基因在野生型酵母S.cerevisiae W303-1A表达显著提高细胞的甘油合成能力,在gpd/1gpd2突变株中能够互补GPD1基因的功能,CgGPD基因表达受渗透压诱导调控。
- 陈献忠方慧英饶志明沈微诸葛斌王正祥诸葛健
- 关键词：产甘油假丝酵母3-磷酸甘油脱氢酶甘油合成
