第三军医大学重庆市生物制药工程技木研究中心
- 作品数：1 被引量：3H指数：1
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- 抗Stx2B单链抗体基因的构建及在大肠杆菌中的分泌表达被引量：3
- 2006年
- 目的构建重组志贺样毒素亚Ⅱ结合亚单位(Stx2B)单链抗体基因,并在大肠杆菌中进行分泌表达。方法借助连接肽(Gly4Ser)3将已成功扩增的抗Stx2B单抗1A5轻、重链可变区基因(VL、VH)连接成单链抗体(ScFv)基因VH-Linker-VL,并在VH5′端和VL3′端引入SfiⅠ和NotⅠ酶切位点,克隆至经改造的分泌性表达载体pCANTAB6His之中,转化EcoliHB2151,IPTG诱导表达。亲和层析纯化抗体蛋白后,以SDS-PAGE、ELISA等方法分析鉴定表达产物。结果经限制性酶切鉴定及DNA测序分析,证实基因构建正确。SDS-PAGE、ELISA分析表明ScFv基因在大肠杆菌中成功表达,表达产物的相对分子质量(Mr)为27 000,与理论预期值相符,且可与相应抗原特异结合。结论成功实现了抗Stx2B单链抗体的原核分泌表达,为探讨O157菌的感染机制及防治研究奠定了基础。
- 马颖毛旭虎李海霞邹全明
- 关键词：志贺样毒素单链抗体分泌表达
