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温州医学院基础医学院分子病毒与免疫学研究所

作品数：11 被引量：14H指数：2
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  • 11篇医药卫生

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  • 5篇蛋白
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机构

  • 11篇温州医学院
  • 2篇温州医学院附...
  • 1篇温州医学院附...

作者

  • 11篇张丽芳
  • 11篇朱珊丽
  • 5篇薛向阳
  • 4篇李玲玲
  • 4篇陆丽君
  • 3篇陈俊
  • 3篇王佳
  • 2篇石朝辉
  • 2篇孟锐锋
  • 2篇周珠哈
  • 2篇刘建晓
  • 2篇李文姝
  • 2篇赵朋云
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  • 1篇李文妹
  • 1篇王乐丹
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  • 1篇孟锐峰
  • 1篇陈筱菲
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传媒

  • 2篇中华微生物学...
  • 2篇温州医学院学...
  • 2篇中国病原生物...
  • 1篇中华预防医学...
  • 1篇中华检验医学...
  • 1篇中华流行病学...
  • 1篇中国生物化学...
  • 1篇国际生物制品...

年份

  • 1篇2012
  • 7篇2010
  • 3篇2009
共 11 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
人乳头瘤病毒L2氨基端蛋白的同源性及其交叉反应特性研究
2010年
目的 研究人乳头瘤病毒（HPV）次要衣壳蛋白（L2）在临床常见HPV感染型别中的同源性及其交叉反应特性.方法 采用生物信息学方法对临床常见HPV感染型别中的L2氨基酸序列进行比对,发现其氨基端1～200序列具有高度同源性.采用PCR法从宫颈癌患者组织DNA中扩增HPV16 L2（1～200）肽段的碱基序列,将其克隆至原核表达载体PGEX-4T-1得到重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2（1～200）.将测序鉴定正确的重组质粒转入E.coli BL21（DF3）中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定;进一步通过Western blot检测HPV16L2（1～200）融合蛋白与HPV6、11、16和18型DNA检测阳性临床患者血清的特异性结合能力;以镍螯合亲和层析柱（Ni-NTA Agarose）纯化的HPV16 L2（1～200）融合蛋白作为包被抗原,采用间接ELISA法对98例尖锐湿疣患者、135例宫颈癌患者及96例健康对照者血清进行特异性血清IgG抗体检测.结果 在HPV6、11、18、35等14个临床常见型别中,与HPV16 L2的1～200间的氨基酸序列比较,同源性达到52.7%～74.3%;成功构建了含有HPV16 L2（1～200）的重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2（1～200）,含有HPV16 L2（1～200）的融合蛋白在原核表达体系中呈高效表达,表达量占总蛋白的22.6%;表达产物的相对分子质量（Mr）约49×103,与预期Mr相符;以HPV6、11、16和18 DNA阳性患者血清为一抗进行Western blot分析,结果显示,在Mr约49×103处出现特异性条带.ELISA结果显示,尖锐湿疣组、宫颈癌组患者血清及健康对照者血清抗体均值分别为0.753±0.262、0.756±0.274和0.178±0.157,阳性率分别为89.8%、88.9%和9.4%.三组间血清抗体均值及阳性率比较差异均具有统计学意义（P均＜0.001）,而尖锐湿疣组和宫颈癌组间的血清抗体均值比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 HPV L2 N端1～200氨基酸序列具有高度同源性,并在HPV6、11、16和18型别间具有交�
李玲玲赵朋云王佳周珠哈朱珊丽薛向阳张丽芳
关键词：人乳头瘤病毒同源性
尖锐湿疣患者血清及宫颈分泌物HPV6bE7抗体检测方法的建立及流行病学意义被引量：2
2010年
目的建立尖锐湿疣（CA）患者血清和宫颈分泌物人乳头瘤病毒（HPV）6b型E7特异性抗体检测方法。方法利用PCR扩增HPV6bE7全长基因，构建重组原核表达质粒pET32a（＋）／HPV6bE7，原核表达产物采用SDS—PAGE和Western blot进行鉴定。进一步经镍螯合亲和层析法（Ni—NTAAgarose）纯化后作为包被抗原，以间接ELISA方法分别对56例CA患者、81名健康对照者的血清和宫颈分泌物标本巾的特异性抗体进行检测，另取43例宫颈癌患者的血清标本作为对照；同时用PCR方法对56例CA组织标本进行HPV6bDNA的检测。结果从CA组织标本中扩增的HPV6bE7全长基因与标准序列（GenBank登录号：NC001355）同源性为99．5％。HPV6bE7融合蛋白在原核表达系统中得到了较高效的表达（40μg／ml）。经间接ELISA检测，CA组血清特异性IgG抗体水平明显高于宫颈癌组和健康对照组（P〈O．05），吸光度（A）均值分别为1．82±0．48、1．36±0．39和1．39±0．27。CA组宫颈分泌物特异性slgA抗体水平亦显著高于健康对照组（P〈0．05），A值分别为O．63±0．26和0．53±0．06。经PCR检测，CA患者组织HPV6bE7DNA阳性率为78．6％（44／56）。与PCR检测结果比较，HPV6bE7特异性IgG和sIgA抗体用于检测CA患者HPV6b感染的敏感性分别为68．2％（30／44）、54．6％（24／44），特异性均为100％（12／12）。结论CA患者血清和宫颈分泌物HPV6bE7特异性抗体，用于诊断HPV6b感染具有一定的敏感性和较高的特异性，可用于HPV6b感染的流行病学调查。
钟晓芝陈韶朱珊丽薛向阳李文妹王乐丹张丽芳
关键词：尖锐湿疣人乳头瘤病毒血清宫颈分泌物
间接免疫荧光法检测沙眼衣原体包涵体抗原的研究被引量：1
2010年
目的探讨基于沙眼衣原体全菌体兔血清抗体的间接免疫荧光法检测沙眼衣原体包涵体抗原的研究。方法将6×103IFU沙眼衣原体接种于Hep-2细胞,培养72 h,PCR检测验证;以兔抗沙眼衣原体全菌体血清抗体为一抗,用免疫荧光法检测沙眼衣原体包涵体抗原,同时采用传统的Giemsa染色、Lugol′s碘染对沙眼衣原体包涵体进行鉴定,并统计和比较其包涵体的检出率。结果经PCR鉴定为阳性的沙眼衣原体感染的Hep-2细胞,间接免疫荧光检测在细胞浆中出现绿色荧光,检出率为28.84%;经Giemsa染色和Lugol′s碘染验证胞浆中存在典型的包涵体结构,检出率分别为15.19%和17.36%,与免疫荧光法比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论基于兔抗沙眼衣原体全菌体血清的间接免疫荧光法可显著提高沙眼衣原体包涵体的检出率。
巩文词朱珊丽赵朋云王佳陈俊陈韶李文姝张丽芳
关键词：间接免疫荧光法沙眼衣原体包涵体
EB病毒潜伏膜蛋白2多表位的原核表达及其抗原特性分析被引量：1
2010年
目的 对EB病毒（EBV）潜伏膜蛋白2（LMP2）中富含T、B细胞多表位肽段基因进行原核表达,并分析该多表位蛋白的抗原特性.方法 利用计算机在线软件预测EBV LMP2蛋白的CTL表位、Th表位.选取富含CTL表位和Th表位的肽段,兼顾其上下游已预测的B细胞表位,组成含多个T、B细胞表位的EBV LMP2多表位,该多表位基因序列经原核密码子优化后全序列合成,并克隆入原核表达载体pET32a（＋）得到pET32a（＋）/EBV-LMP2多表位重组质粒,经IPTG诱导在E.coli BL21（DE3）表达并纯化,经SDS-PAGE和Western blot分析鉴定;采用EBV膜蛋白家兔免疫血清和鼻咽癌患者血清进行Western blot分析其抗原特性;并利用EBV-LMP2多表位蛋白免疫BALB/c小鼠,分别采用LDH和ELISA方法检测小鼠脾细胞特异性CTL杀伤效应及血清特异性抗体IgG水平,以分析该表位蛋白的免疫原性.结果 LMP2（aa195-232）和LMP2（aa419-436）肽段富含CTL、Th和B细胞表位,将其串联后作为EBV LMP2多表位,该多表位基因在大肠杆菌中获得了表达.表达产物的相对分子质量（Mr）约27×103,与预期Mr相符;经Western blot证实EBV-LMP2多表位具有抗原特异性,可被EBV膜蛋白家兔免疫血清和鼻咽癌患者血清特异性抗体识别;小鼠免疫结果显示EBVLMP2多表位可诱导机体产生特异性的CTL杀伤效应,随着效靶比（1：5,1：10,1：25）增加,CTL杀伤活性逐渐增强（12.52%±2.59%,21.80%±1.08%,23.68%±3.74%）,同时产生了特异性血清IgG抗体反应（A490=0.258±0.040）,与对照组比较差异均具有统计学意义（P＜0.05）.结论 本研究设计的EBV-LMP2多表位具有良好的抗原性和一定的免疫原性.
陆丽君李玲玲刘建晓王佳朱珊丽陈筱菲张丽芳
关键词：EB病毒潜伏膜蛋白表位
人乳头瘤病毒16型次要结构蛋白家兔免疫血清的制备及其特性研究被引量：3
2010年
目的制备高效价人乳头瘤病毒(HPV)16型次要结构蛋白(L2)特异性兔血清抗体,并对其效价及其与HPV16 L2蛋白结合的特异性进行鉴定。方法将重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2转化至E.coliBL21(DE3)中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定融合蛋白的抗原性;经镍螯合亲和层析柱(Ni-NTA Agarose)纯化HPV16 L2全长融合蛋白,纯化蛋白用佐剂乳化后经日本大耳白家兔背部皮下多点免疫注射,间隔2周后加强免疫,共2次,并分别于免疫前和每次免疫后1周取血,采用Western blot检测血清抗体的特异性,采用ELISA法检测血清抗体水平及变化趋势。结果家兔用HPV16 L2融合蛋白全程免疫后均产生了抗HPV16 L2抗体,ELISA法检测最高滴度达1∶256 000;Western blot检测显示,该抗体能识别HPV16 L2蛋白。结论用原核HPV16 L2全长蛋白免疫家兔,可获得高效价的血清抗体,该抗体具有与HPV L2蛋白结合的特异性。
李玲玲周珠哈朱珊丽薛向阳张丽芳
关键词：人乳头瘤病毒16型抗体
乙型肝炎病毒C基因多态性及其蛋白特性分析
2012年
目的:调查温州医学院大学生人群乙型肝炎病毒(HBV)C基因多态性及其HBc蛋白特性变化,为了解乙肝病毒核心抗原(HBcAg)变异提供理论依据。方法:采用HBV-C基因特异性引物对21份温州医学院大学生HBV携带者(血清学检测为大三阳患者)血清标本进行PCR扩增鉴定,并取19份PCR检测阳性产物直接测序;进一步用Vector NTI 8.0和DNA Star软件分析HBV-C基因多态性及HBc蛋白特性的变化。结果:21份标本中,HBV-C DNA阳性率达90.48%(19/21),与标准基因序列(Gen Bank X01587)比较,HBV-C基因同源性为93.3%～95.1%。HBV-C基因分别形成51种突变模式,其中一处由于核苷酸的改变,翻译的氨基酸也发生了相应的改变,此处氨基酸序列的第130处脯氨酸(Pro)突变为苏氨酸(Thr),其余标本均为同义突变;但突变处编码蛋白在亲水性、表面可及性及抗原性与标准株相比较无明显变化。结论:温州医学院大学生HBV携带者的HBV C基因具有多态性,但是由C基因决定的核心蛋白序列相对保守。
冯娟吕艳陈昊涂建欣朱珊丽薛向阳张丽芳
关键词：乙型肝炎病毒C基因突变多态性
沙眼衣原体主要外膜蛋白多表位基因的免疫原性研究
2009年
目的构建包含沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis，Ct）主要外膜蛋白（major outer membrane protein，MOMP）多表位基因的真核表达质粒pcDNA3．1-CtMOMP168，检测其诱导BALB／c小鼠产生CtMOMP特异性体液和细胞免疫反应的水平。方法构建包含CtMOMP多表位基因的重组质粒pcDNA3．1，CtMOMP168并以肌肉注射方式免疫BALB／c小鼠，同时设置pcDNA3．1组和PBS组对照（每组12只，每只100μg/次）。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）、乳酸脱氢酶释放法及细胞内细胞因子染色-流式细胞术（ICS—FACS）分别检测免疫小鼠血清中CtMOMP特异性抗体的滴度及其抗体亚型、脾脏中细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的杀伤活性及特异性分泌细胞因子，如γ-干扰素-（IFN-1）、白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-10（IL-10）等的CD3^＋T细胞的水平。结果同pcDNA3．1（A490=0．180±0．025）和PBS免疫（A490=0．110±0．015）相比，pcDNA3．1-CtMOMP168免疫可刺激小鼠产生高效价0特异性IgG抗体（A490=0．973±0．136；血清滴度1：1000），且抗体亚型以IgG2a为主，差异有统计学意义（F=106．884，P〈0．05）；pcDNA3．1-CtMOMP168免疫组小鼠脾细胞中CTL杀伤活性（41．71％±8．34％）高于pcDNA3．1组（18．40％±3．45％）和PBS组（14．50％±2．42％），差异有统计学意义（F=22．315，P〈0．05；效靶比为50：1）；pcDNA3．1-CtMOMPl68免疫组小鼠的脾细胞中CtMOMP特异性CD3^＋IFN-γ^＋T细胞的水平（1．15％±0．16％）高于pcDNA3．1组（0．12％±0．08％）和PBS组（0．09％±0．03％），差异有统计学意义（F=99．638，P〈0．05），而pcDNA3．1-CtMOMP168组IL4^＋CD3^＋T细胞（0．13％±0．08％）和IL-10^＋CD3^＋T细胞（0．14％±0．08％）的水平与pcDNA3．1（0．07％±0．05％，0．13％±0．06％）和PBS（0．08％±0．04％，0．07％±0．04％）组比较差异无统计学意义（F值分别为0．886、1．112，P�
朱珊丽石朝辉李文姝陈俊张丽芳
关键词：细菌外膜蛋白质类表位
密码子优化的HPV6b L1 DNA诱导BALB／c小鼠产生增强的免疫应答
2009年
目的探讨真核细胞偏好密码子优化对人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）6b型L1 DNA诱导BALB／c小鼠特异性体液和细胞免疫应答的增强效应。方法利用PCR从尖锐湿疣组织中扩增HPV6b L1基因，将其克隆至真核表达质粒pcDNA3．1（＋），构建野生型pcDNA3．1（＋）／HPV6bLl（wt）并进行鉴定；同时，对HPV6b L1基因进行真核细胞偏好密码子优化，进一步通过重叠PCR的方法获得全长基因，构建密码子优化的重组质粒pcDNA3．1（＋）／HPV6bLl（rood．）并进行鉴定。将6～8周龄雌性BALB／c小鼠分成4组，分别肌肉注射3次pcDNA3．1（＋）／HPV6bLI（mod．）、pcDNA3．1（＋）／HPV6bL1（wt）、pcDNA3．1（＋）载体和PBS，间隔2周，每次剂量为150μg／鼠。分别于免疫前和免疫后每隔2周，收集血清，用间接ELISA检测血清IgG抗体；并于第8周取小鼠脾细胞，采用乳酸脱氢酶释放法，按效应细胞与靶细胞之比（E：T）为5：1、10：1、20：1进行免疫小鼠特异性CTL杀伤活性检测。结果成功构建了密码子优化的HPV6b L1重组质粒。小鼠免疫后血清特异性IgG抗体水平随着免疫时间和次数的增加而升高。pcDNA3．1（＋）／HPV6bLl（mod．）组血清IgG抗体在第8周达到高峰，与pcDNA3．1（＋）／HPV6bLl（wt）、载体和PBS对照组相比差异均有统计学意义（t=18．138、t=29．140、t=30．840，P值均〈0．01）；而pcDNA3．1（＋）／HPV6bLl（wt）组与载体和PBS组比较差异也有统计学意义（t=20．072、t=22，457，P值均〈0．01）。在特异性CTL杀伤实验中，当E：T分别为5：1、10：1、20：1时，pcDNA3．1（＋）／HPV6bLI（mod．）组的脾细胞特异性CTL杀伤率明显高于pcDNA3．1（＋）／HPV6bLl（wt）组（t=11．892、t=15．329、t=2．911，P值均〈0．05）、载体组（t=12．936、t=16．613、t=13．901，P值均〈0．01）和PBS对照组（t=14．768、t=18．935、t：10．925，P
陆丽君石朝辉孟锐锋朱珊丽肖敏张丽芳
关键词：密码子抗体生成
HPV6L1/CtMOMP多表位融合基因在COS-7细胞的表达及其在小鼠的免疫效果观察被引量：2
2010年
研究人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)6b结构蛋白L1(HPV6b L1)基因佐剂增强沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)主要外膜蛋白(MOMP)多表位(Ct MOMP168)DNA疫苗的免疫效果的可能性.构建pcDNA3.1(+)/HPV6b L1/Ct MOMP168融合重组质粒,转染COS-7细胞,用RT-PCR、激光共聚焦显微技术及Western印迹技术检测其表达.分别用pcDNA3.1(+)/HPV6b L1/Ct MOMP168、pcDNA3.1(+)/Ct MOMP168及pcDNA3.1(+)质粒肌肉免疫BALB/c小鼠,ELISA检测外周血中IgG及阴道分泌物中sIgA.结果表明,pcDNA3.1(+)/HPV6b L1/CtMOMP168可在COS-7细胞中表达;Ct MOMP168组和HPV6b L1/Ct MOMP168组均可刺激小鼠产生抗Ct MOMP特异性的抗体,抗体滴度随免疫次数增加而升高,且HPV6b L1/Ct MOMP168组小鼠产生的抗体滴度明显高于Ct MOMP168组(P<0.05).结果提示,分子佐剂HPV6b L1与CtMOMP多表位基因融合能够显著增强Ct MOMP多表位DNA疫苗的体液免疫应答.
许文石朝辉朱珊丽陆丽君孟锐峰李玲张丽芳
关键词：人乳头瘤病毒沙眼衣原体主要外膜蛋白DNA疫苗
HPV 16型L2全长原核融合蛋白的交叉反应特性研究
2010年
目的 研究HPV 16型L2全长蛋白在HPV6、11、16和18型别间的交叉反应特性.方法 收集108例尖锐湿疣患者、156例宫颈癌患者和100名健康对照者的血清标本,采用PCR法从宫颈癌患者组织DNA中扩增HPV16 L2全长基因,将其克隆至原核表达载体PGEX-4T-1中,构建重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2,将鉴定正确的重组质粒转化至E.coli BL21（DE3）中,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和WB鉴定;进一步通过WB检测HPV16 L2全长融合蛋白与HPV6、11、16和18型DNA检测阳性的患者血清的特异性结合能力.以镍螯合亲和层析柱（Nj-NTA Agarose）纯化HPV16 L2融合蛋白作为包被抗原,采用间接ELISA法检测3组标本中的HPV血清特异性IgG抗体.结果 成功构建了重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2,含有HPV16 L2的融合蛋白在原核表达体系中呈较高效表达,表达量为27.2%;SDS-PAGE和WB检测结果显示在约相对分子质量82 000处可见特异性阳性信号条带;以HPV6、11、16和18 DNA阳性患者血清为一抗的WB结果显示,HPV16 L2全长融合蛋白在相对分子质量82 000处均出现特异性阳性信号条带.ELISA结果显示,尖锐湿疣组、宫颈癌组和健康对照组血清抗体A值分别为0.825±0.409、0.808±0.376、0.128±0.15,阳性率分别为92.6%、92.3%和6.0%.3组间血清抗体A值及阳性率差异均具有统计学意义（H=207.292,x2=251.846,P均＜0.01）,而尖锐湿疣组与宫颈癌组之间的血清抗体均值（0.825和0.808）差异无统计学意义（H=0,P＞0.05）.结论 HPV16 L2全长原核融合蛋白具有较强的抗原性,与HPV6、11、16和18型别间具有交叉反应,可进一步用于HPV感染及其相关肿瘤ELISA血清学检测试剂的通用型靶抗原研究.
李玲玲刘建晓朱珊丽薛向阳陈俊张丽芳
关键词：人乳头瘤病毒
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