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烃降解菌株T7-2产生的生物乳化剂及其理化性质研究被引量：17: 2008年; 从石油污染海域海底泥中筛选到的1株低温石油烃降解菌,经鉴定为红平红球菌(Rhodococcus erythropolis),命名为T7-2。该菌株能以十六烷为碳源代谢产生一种对柴油等烃类具良好乳化作用的生物乳化剂。研究表明,该乳化剂主要由糖类、脂类和蛋白质组成,其比例为55.43:31.24:12.65。进一步研究证实,该乳化剂糖类的单糖组成为甘露糖和鼠李糖;脂类由十碳、十二碳、十六碳及十八碳脂肪酸组成;蛋白质由16种氨基酸构成。本文还对乳化剂的理化性质进行了分析,发现它是一种性能稳定、乳化效率高、适应范围较为广泛的生物乳化剂,对海洋污染生物修复及石油开采都具有潜在的应用价值。; 李丹黄磊李国强李召雨马挺梁凤来刘如林; 关键词：生物修复烃降解菌

重组p300组蛋白乙酰转移酶结构域的表达及应用被引量：2: 2011年; 组蛋白乙酰化修饰是基因起始转录的关键步骤.p300等组蛋白乙酰转移酶(HATs)催化组蛋白和非组蛋白的乙酰化.HATs具有多种细胞功能,而且乙酰化对底物蛋白的功能改变也具有重要功能.组蛋白乙酰转移酶p300可乙酰化多种细胞内蛋白,某些病毒蛋白与p300有相互作用并促进病毒复制.因此,p300是细胞内具有广泛功能的转录激活因子.组蛋白乙酰转移酶结构域(HAT区)是p300乙酰化酶活性的最小中心功能域,在p300乙酰化底物中具有重要功能.本文重组表达了对应p300 HAT区的GST-p300 HAT蛋白,对其乙酰化酶的活性进行检测.结果证实,p300 HAT蛋白在体外可高效乙酰化组蛋白H3.随后,对体外乙酰化反应的条件进行优化.总之,本文构建了一种简单高效、非放射性体外乙酰化体系,适用于对潜在底物蛋白的乙酰化水平和机制进行分析,以及乙酰化蛋白的相关功能的研究.; 常锐谈娟王荣敏陈启民耿运琪乔文涛; 关键词：P300

1株低温石油烃降解菌的分类鉴定及降解特性研究被引量：18: 2007年; 从渤海油船泄漏区域的海底泥中筛选到1株能降解柴油的低温石油烃降解菌T7-2,初步鉴定为红平红球菌（Rhodococcus erythropolis）.研究表明,利用工业乙醇无机盐培养基培养液体种子是适宜的,其最适温度和pH分别为15℃和7.8,工业乙醇最适加入量为0.5%,菌体浓度为10^8CFU/mL.接种人工海水烃降解培养基后,通过补加氮源（NH4）2SO4 2.64 g/L、磷源Na2HPO42.5 g/L和酵母粉0.015 g/L后,15℃振荡培养7 d,降解率可以达到73.2%.该菌降解烷烃的范围很广泛,C12-C36均有不同程度的降解.; 黄磊李丹孙丹谢玉娟马挺梁凤来刘如林; 关键词：红球菌生物修复

一株耐热石油烃降解菌的细胞疏水性及乳化、润湿作用研究被引量：20: 2008年; 从胜利油田油水样中分离到一株能够在60℃高温条件下利用烃类产生生物表面活性剂的菌株芽孢杆菌(Bacillus sp.)A1。结果表明:A1的细胞表面具有很强的疏水性,这有助于菌体细胞对烃类的摄取。该菌株对石油烃具有良好的乳化作用,并可在20%的高盐环境和100℃高温条件下仍显示很高的乳化活性。同时,A1可明显改变油藏岩石表面的润湿性,使其亲水性显著增强。对油藏中的岩石模拟试片石英、灰岩和玻璃作用后的接触角均减小60%以上。油藏中岩石的润湿性能增强,水驱油时更易于剥落滞留在岩石表面上的油滴或油膜,从而提高石油采收率。; 张明露马挺李国强汪卫东李希明梁凤来蔡宝立刘如林; 关键词：疏水性乳化活性

海藻酸钠-聚乙烯醇共固定化细胞脱除燃料油中的有机硫被引量：11: 2006年; 从孤岛油田油浸土壤中筛选得到能降解二苯并噻吩（DBT）的红平红球菌DS-3，对其进行了固定化研究．选取海藻酸钠（SA）-聚乙烯醇（PVA）为包埋固定化载体，以1mmol·L^-1二甲基亚砜培养菌体，固定化最佳操作条件为4℃交联，8％PVA和2％SA混合，细胞在胶液中的浓度为0．1g·ml^-1，氯化钙含量为2％，此时固定化细胞不但具有良好的脱硫性能，而且脱硫重复性好，其寿命可以达到250h以上．固定化细胞在3次循环后能使模拟柴油中的DBT含量从0．5mmol·L^-1降至0．011mmol·L^-1，总脱硫率达到93％，平均脱硫效率约为0．225mgDBT·（gDCW）^-1·h^-1．同样条件下能将精制柴油的硫含量由340mg·L^-1降到42mg·L^-1，总脱硫率为87．64％．DS-3能利用醇类、饱和的C8～C15脂肪烃，但不能利用环烷烃、芳香烃、小于C8或大于C15的脂肪烃，DS-3优先利用碳源的顺序是乙醇、葡萄糖和烷烃．脱硫前后的精制柴油经GC—FID分析证实，同定化细胞对C—S键具特异性，不降低柴油的热值．; 马挺李国强李剑李珊珊李红梁凤来刘如林; 关键词：海藻酸钠聚乙烯醇固定化细胞生物脱硫

一株高温产粘菌株的筛选及其产胞外聚合物分析被引量：3: 2008年; 从油井采出水中分离到一株高温产胞外聚合物的细菌MS-1,经16S rDNA基因序列分析属于芽孢杆菌属(Bacillus sp.)。该菌能在60℃生长并产生胞外聚合物,其中胞外多糖含量为48.3%～54.5%,主要由甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成,摩尔比分别是2.04:1.00:0.89。胞外聚合物中蛋白含量为37.2%～42.4%,主要由甲硫氨酸、亮氨酸、天门冬氨酸、丙氨酸、组氨酸和丝氨酸组成。利用透射电镜和环境扫描电镜对胞外聚合物的形成进行了观察。该菌的分离和研究为高温油藏的微生物调剖和驱油奠定了生物学基础。; 刘静王君白新宇马挺梁凤来刘如林; 关键词：高温芽孢杆菌胞外聚合物微生物调剖

乙肝病毒X蛋白结合蛋白(HBXIP)增强肝癌细胞NF-κB转录活性的实验研究被引量：11: 2007年; 前期研究结果表明,乙型肝炎病毒X蛋白结合蛋白(hepatitis B virus X-interacting protein,HBXIP)具有促进细胞增殖的作用.为了进一步阐明其分子机制,观察了HBXIP对核因子κB(NF-κB)转录活性的影响.实验中通过基因共转染将NF-κB报告基因质粒pNF-κB-Luc和HBXIP真核表达载体pcDNA3-hbxip导入人肝癌H7402细胞系中,进行荧光素酶活性分析.结果显示:H7402细胞过表达HBXIP后NF-κB的转录活性明显增强;此外,基因转染后经免疫印迹检测显示,与NF-κB二聚体结合的抑制亚基IκBα的磷酸化水平明显增加;同时,提取H7402细胞的核蛋白,然后应用免疫印迹检测细胞核中p65/NF-κB的水平.结果显示,H7402细胞中HBXIP过表达后细胞核中p65/NF-κB的水平明显增加.当应用RNA干扰技术抑制了细胞内源性的HBXIP基因表达后,则出现与上述结果相反的效果.上述结果提示,HBXIP可增加核内p65/NF-κB蛋白水平,进而发挥NF-κB促转录调控的作用.因此,HBXIP可通过调控NF-κB信号途径而促进细胞增殖.; 王凤泽沙丽乔玲吴莲英张晓东叶丽虹; 关键词：IΚBΑ 肝癌细胞

大肠杆菌O152中wfgD基因编码的β-1,3-葡萄糖基转移酶产物结构的质谱表征被引量：2: 2010年; 大肠杆菌O152抗原的寡糖重复单位中含葡萄糖-β-1,3-N-乙酰葡萄糖胺(Glc-β-1,3-GlсNAc)连接键。本研究采用电喷雾离子化多级串联质谱技术对以人工合成的天然受体底物的结构类似物苯氧基十一烷二磷酸-N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc-β-PO3-PO3-(CH2)11-O-phenyl(GlcNAc-PP-PhU))为受体底物,尿苷二磷酸葡萄糖(UDP-Glc)为给予体底物的酶促反应产物进行了详细的结构表征。电喷雾离子化多级串联质谱图中观察到的主要碎片源于磷酸二酯键部分和糖苷键的裂解。此外,由观察到的二糖产物非还原端碎片获得了序列信息;跨环断裂碎片及源于吡喃环取代基消除的‘内在’碎裂离子可提供组成产物的单糖残基连接方式信息。广泛的碎裂信息表明wfgD基因编码UDP-Glc:GlcNAc-pyrophosphate-lipid中的β-1-3葡萄糖基转移酶。; 周大炜胡波刘斌吴俊丽韩艳芳; 关键词：糖基转移酶大肠杆菌

慢性乙型肝炎和肝硬化及肝癌患者血清中anti-HBx测定及其临床意义被引量：4: 2007年; 目的建立检测患者血清中 HBV 的 x 抗原(HBxAg)及其抗体(anti-HBx)的方法,阐明其在慢性肝炎、肝硬化和肝癌患者血清中的临床意义。方法将 HBV 的 x 基因全长克隆至原核表达载体 pET30a(+)中,构建 pET30a-X 原核表达载体,转化入大肠杆菌 BL21(DE3)后,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达 His-HBx 融合蛋白,纯化后将重组蛋白免疫家兔,制备兔抗 HBx 多克隆抗体。应用纯化后的兔抗 HBx 多克隆抗体和纯化后的重组蛋白,建立检测血清中 HBxAg 和 anti-HBx 的方法。应用建立的 ELISA 法,分别对慢性乙型肝炎、肝硬化和肝癌患者组及正常对照组血清中 HBxAg 和 anti-HBx 进行检测。结果 HBxAg/anti-HBx 在慢性乙型肝炎、肝硬化和肝癌患者中的阳性率分别为8.7%/10.4%,17.9%/40.6%,9.8%/34.4%。统计学分析显示,与慢性乙型肝炎相比,肝硬化或肝癌患者血清中 anti-HBx 的阳性率较高(P<0.01)。结合临床检测的其他 HBV 血清学指标,发现在 anti-HBs 阳性病例中,anti-HBx 阳性率为5.2%(1/19);而在 HBsAg、HBeAg 和 anti-HBc 3项同时为阳性的病例中,anti-HBx 的阳性率为28.9%(39/135),二者相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。213名正常对照血清中 HBxAg 和 anti-HBx 均为阴性。结论血清中 anti-HBx 并非一个保护性抗体,标志 HBV 的感染和复制,是从慢性乙型肝炎向肝硬化和(或)肝癌发展的血清标志之一。; 张航吴莲英刘树业邵新华杨宗伟张秀琴耿学丽叶丽虹张晓东; 关键词：乙型酶联免疫吸附测定生物学标记物

一株高温解烃产黏菌的特性及其调剖驱油效果被引量：12: 2008年; 从油田地层水中分离出一株能在高温下降解烷烃并产胞外多糖的细菌DM-1,初步鉴定为芽孢杆菌(Bacillussp.)。该菌能在55℃高温缺氧条件下乳化并降解原油。在以原油为碳源的培养基中55℃培养5d,经红外分光测油仪测定,对原油的降解率达到61.51%。在高温和特定营养条件下,菌株DM-1可产生胞外多糖,经高压液相色谱分析,其组成糖为甘露糖(91.87%)、葡萄糖(7.95%)和半乳糖(0.18%)。对该菌产多糖的最适碳源和温度进行了优化,多糖产量可达1.7g.L-1。同时进行了岩心调剖和驱油物理模拟实验,结果表明,利用该菌株产生的胞外多糖能够将岩心注入压力由0.01MPa增加到0.40MPa,渗透率从3.856μm2降至1.589μm2,在驱油模拟实验中岩心后续水驱采收率为3.9%。利用环境扫描电镜观察了模拟岩心中该菌株的封堵效果。菌株DM-1在微生物采油中具有很好的应用前景。; 王君马挺李蔚刘静梁凤来刘如林; 关键词：高温胞外多糖微生物采油

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南开大学生命科学学院天津市微生物功能基因组学重点实验室

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