国家自然科学基金(31270138)
- 作品数：3 被引量：22H指数：2
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- 家蚕微孢子虫研究10年回眸
- 家蚕微孢子虫研究在近10年取得了突飞猛进的发展,特别是其基因组学分析和侵染相关分子的研究不断推进,为深入开展家蚕微孢子虫功能基因组学研究奠定了基础。通过蛋白质组与功能基因组研究平台,对家蚕微孢子虫孢壁蛋白和分泌蛋白的鉴定...
- 周泽扬潘国庆向仲怀
- 关键词：家蚕微孢子虫功能基因组侵染机制
- 文献传递
- 家蚕微孢子虫研究10年回眸被引量：18
- 2014年
- 家蚕微孢子虫研究在近10年取得了突飞猛进的发展,特别是其基因组学分析和侵染相关分子的研究不断推进,为深入开展家蚕微孢子虫功能基因组学研究奠定了基础。通过蛋白质组与功能基因组研究平台,对家蚕微孢子虫孢壁蛋白和分泌蛋白的鉴定以及在微孢子虫侵染中的生物学功能展开了系统的研究;同时,从分子生物学水平详尽研究了家蚕微孢子虫侵染相关分子机制,从蚕业生产实践着手构建家蚕微孢子虫检测防控技术体系,利用现代分子生物学技术探索针对家蚕微孢子虫的家蚕抗性种质材料创建。可以预期,在近10年的研究基础上,未来对家蚕微孢子虫的研究将在侵染与垂直传播机制、分子检测、抗性素材分子育种等方面取得重大突破,并为其它微孢子虫的研究提供信息支持。
- 周泽扬潘国庆向仲怀
- 关键词：家蚕微孢子虫功能基因组侵染机制
- 家蚕微孢子虫经不同冻存条件处理后对家蚕胚胎细胞的侵染性变化被引量：2
- 2014年
- 为了解家蚕微孢子虫保存方法对其侵染性的影响及大量获得细胞感染实验材料,将采用不同冻存液及冻存法处理的家蚕微孢子虫分别接种于家蚕胚胎细胞(Bm E),调查家蚕微孢子虫对细胞的感染率及感染细胞的传代能力。与液氮直接冻存法处理和高温高压灭菌法处理的微孢子虫相比较,用液氮梯度冻存法处理的微孢子虫的粘附率和感染率均显著或极显著提高。采用液氮梯度冻存法以水作冻存液处理的微孢子虫对宿主细胞的感染率为64%,感染细胞能进行连续传代培养;而以含10%二甲基亚砜(DMSO)的胎牛血清作冻存液处理的微孢子虫虽然对宿主细胞的感染率达到80%,但感染细胞在培养7 d后大量破裂死亡。因此,选用以水作冻存液经液氮梯度冻存法处理的家蚕微孢子虫有利于感染Bm E细胞并在细胞内增殖,从而获得大量的细胞感染实验材料。
- 马强党晓群王营陈洁刘方燕赵丽芳曹琛福吕建强潘国庆周泽扬
- 关键词：家蚕微孢子虫侵染性
- 家蚕微孢子虫ADP/ATP转运蛋白的原核表达及间接免疫荧光定位分析被引量：2
- 2014年
- 【目的】家蚕微孢子虫Nosema bombycis ADP/ATP转运蛋白可能参与搬运宿主细胞的能量。本研究克隆家蚕微孢子虫ADP/ATP转运蛋白基因,并进行原核表达、抗体制备及间接免疫荧光定位,为控制和防治家蚕微粒子病提供理论基础。【方法】通过同源序列比对鉴定家蚕微孢子虫N.bombycis ADP/ATP转运蛋白序列,采用生物合成的方法将编码3段面向膜内侧肽段的核酸序列拼接合成,在其两端引入BglⅡ和SalⅠ酶切位点,克隆至pUC57载体并测序,再亚克隆至含有二氢叶酸还原酶(dihydrofolate reductase,DHFR)标签的表达载体pQE40中,然后利用BamHⅠ和SalⅠ酶切获得含有DHFR标签的重组序列,并连接至pET30a(+)载体中进行诱导表达。通过SDSPAGE、镍柱亲和层析和免疫印迹法鉴定表达蛋白,利用间接免疫荧光对ADP/ATP转运蛋白的分布进行检测。【结果】家蚕微孢子虫的ADP/ATP转运蛋白编码序列(GenBank登录号为EOB13854.1)全长1 524 bp,编码蛋白含有507个氨基酸残基,预测分子质量为59 kDa,等电点为9.35。具有12个跨膜结构域和TLC结构域,其中TLC结构域含有4个功能保守位点。与蜜蜂微孢子虫的ADP/ATP转运蛋白比较,氨基酸序列一致性达30%。系统进化分析表明微孢子虫ADP/ATP转运蛋白聚为一类,具有共同的起源。成功构建了NbADP/ATP-△TM-DHFR-pET30a原核表达重组质粒,目的基因获得表达,其融合蛋白分子量约为37 kDa,纯化重组蛋白并制备了多克隆抗体。免疫印迹分析表明,成熟微孢子虫中表达ADP/ATP转运蛋白;间接免疫荧光定位结果显示,家蚕微孢子虫孢子ADP/ATP转运蛋白定位于孢子质膜上。【结论】本研究将为阻断微孢子虫能量来源,达到控制和防治家蚕微粒子病提供新的思路。
- 党晓群林立鹏李春峰潘国庆李田龙梦娴周泽扬
- 关键词：家蚕微孢子虫ADP原核表达免疫印迹
- Characterization of a novel otubain-like protease with deubiquitination activity from Nosema bombycis(Microsporidia)
- Otubains are a recently identified family of deubiquitinating enzymes(DUBs). They are involved in diverse biol...
- 王营Xiaoqun DangBo LuoChun feng LiMengxian LongTian LiZhi LiGuoqing Pan周泽扬
- 关键词：MICROSPORIDIA
- 文献传递
- Characterization of the First Fungal Glycosyl Hydrolase Family 19 Chitinase(NbchiA) from Nosema bombycis(Nb)
- Chitinases(EC 3.2.1.14), as one kind of glycosyl hydrolase, hydrolyze the β-(1,4) linkages of chitin. Accordin...
- 韩冰Kang ZhouZhihong LiBin SunQi NiXianzhi MengGuoqing PanChunfeng LiMengxian LongTian LiCongzhao ZhouWeifang Li周泽扬
- 关键词：ENZYMOLOGYMICROSPORIDIA
- 文献传递
