目的探讨siRNA靶向慢病毒对人喉癌Hep-2细胞系FAK基因的沉默效应,以期探索喉鳞癌基因治疗的新途径。方法 Western Blot检测人喉鳞状细胞癌细胞系Hep-2中的FAK蛋白表达水平。用FAK-RNAi慢病毒转染Hep-2细胞,同时监测转染效率。半定量RT-PCR检测FAK基因被FAK-siRNA沉默后mRNA的表达水平。Western-blotting检测FAK基因被FAK-siRNA沉默后蛋白质的表达水平。采用荧光PI染色检测凋亡细胞数目,MTT法检测细胞体外增生能力。结果 Western blot结果显示Hep-2细胞中FAK的3个蛋白片段表达量较高。多次重复western blot检测转染前后Hep-2细胞的FAK基因蛋白表达发现,FAK-RNAi慢病毒对目的基因在Hep2细胞中具有显著knockdown作用。使用RT-PCR技术检测FAK-siRNA干扰Hep-2细胞系前后FAK mRNA的表达发现,FAK-RNAi慢病毒对目的基因,在mRNA水平有明显knockdown作用。PI染料染色后,可见FAK-RNAi组30%～35%的肿瘤细胞凋亡。MTT Assay结果显示,FAK-siRNA慢病毒转染Hep2细胞后,Hep2细胞活力明显下降。结论经用慢病毒载体介导的FAK-siRNA在喉鳞癌细胞中可获得高效转染,并能产生特异性的基因沉默效应。
