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IL-2抑制小鼠CD4^+ CD62L^+ T细胞分化为Th17细胞被引量：4: 2016年; 目的研究IL-2对小鼠脾脏CD4+CD62L+T细胞在体外向Th17细胞分化的作用。方法免疫磁珠法分选C57BL/6小鼠脾脏CD4+CD62L+T细胞,于抗体包被的培养板中培养3 d,实验分为对照组和IL-2处理组。对照组为经典Th17诱导分化培养基,IL-2处理组在对照组基础上于培养体系中添加IL-2。CFSE染色检测细胞增殖,Annexin V-PI法检测细胞凋亡,ELISA检测培养上清中IL-17A的浓度,荧光定量PCR检测Rorγt mRNA的表达,流式细胞术检测CD4^+IL-17^+Th17的生成比例以及Rorγt的表达。结果磁珠分选的小鼠脾脏CD4+CD62L+nave T细胞纯度高于95%。与对照组相比,IL-2处理组细胞数目明显增多,增殖能力明显增强(P<0.05),细胞凋亡比例降低(P<0.05);IL-2处理组培养上清中IL-17A的浓度明显降低(P<0.05),且CD4+IL-17+细胞比例下降,其特异性转录因子Rorγt的表达水平也显著降低(P<0.05)。结论 IL-2在CD4+CD62L+T细胞分化为Th17的过程中,能够促进T细胞的增殖并且抑制Th17的分化。; 周骏王婷姚瑞芹曲学彬; 关键词：IL-2 TH17 分化

过表达Olig2和Nkx2.2人胚胎干细胞系的建立: 2015年; 目的:建立过表达Olig2和Nkx2.2的人胚胎干细胞(hESCs)系.方法:利用RT-PCR从鼠N2A细胞克隆出Olig2和Nkx2.2的ORF片段,将Olig2和Nkx2.2基因编码序列分别和带有HA及Flag的载体连接,构建Olig2-HA和Nkx2.2-Flag重组载体.将构建的载体分别与2种病毒辅助包装原件载体质粒共转染293T细胞,制备并浓缩Olig2-HA和Nkx2.2-Flag慢病毒颗粒,感染hESCs,嘌呤霉素筛选的阳性克隆传代培养10代后鉴定细胞内Olig2和Nkx2.2的表达.结果:PCR扩增得到含Olig2和Nkx2.2基因编码序列的特异性条带;携带有Olig2和Nkx2.2基因的慢病毒能够同时感染hESCs,表达Olig2-HA和Nkx2.2-Flag融合蛋白,并稳定遗传.结论:成功构建了同时过表达Olig2和Nkx2.2的人胚胎干细胞系.; 杨丽华王婷马丽罗梦娇曲学彬武秀香姚瑞芹; 关键词：OLIG2 过表达人胚胎干细胞克隆

中和IL-10促进Th17的体外诱导分化: 2014年; 辅助性T细胞17（ Th17）是一类特异分泌IL-17、表达Rorγt的Th亚群，由于其参与了诸多免疫性疾病的发生发展而备受研究学者的关注。 Th17在体内比率非常低，难以分离纯化，而体外的诱导率仅为10％左右，如何提高体外Th17诱导分化与增殖的效率成为了研究Th17亟待解决的问题之一。; 曲学彬韩晶晶姚瑞芹董富兴王贝; 关键词：体外诱导分化 IL-10 辅助性T细胞 RORΓT TH亚群

过表达少突胶质细胞转录因子2加速小鼠胚胎干细胞分化为神经元-胶质细胞抗原2阳性少突胶质祖细胞样细胞被引量：1: 2014年; 目的：观察少突胶质细胞转录因子2（O1ig2）过表达对小鼠胚胎干细胞（mESCs）向少突胶质祖细胞（OPCs）分化的影响.方法：将体外培养的mESCs分为空载体感染和Olig2-GFP慢病毒感染组,免疫荧光显色检测Olig2的表达.感染后9、14、21 d和28 d神经元-胶质细胞抗原2（NG2）免疫荧光显色观察mESCs向OPCs的分化情况.结果：Olig2-GFP慢病毒感染组mESCs经筛选后均为Olig2＋/GFP＋,而空载体感染组mESCs无Olig2表达.感染后9d,两组细胞均无NG2表达;感染后14d,Olig2-GFP慢病毒感染组NG2高表达,空载体感染组仅有少数细胞为NG2弱阳性;感染后21d与14 d相比,两组均无明显变化;感染后28d,两组细胞均有较强的NG2表达,组间无差异.结论：过表达Olig2能够加速mESCs分化为NG2＋的OPCs样细胞.; 曲学彬王贝罗梦娇郭瑞王会平张强于红丽姚瑞芹; 关键词：基因过表达小鼠胚胎干细胞

白介素10抑制幼稚T细胞分化为辅助性T细胞17的研究被引量：1: 2015年; 目的:研究白介素10(interleukin,IL-10)在辅助性T细胞17(helper T cell,Th17)体外诱导分化中的作用。方法:分选小鼠脾脏CD4+幼稚T(nave T)细胞,在经典的Th17诱导条件中加入不同浓度的IL-10中和抗体(0、1、5、10μg/ml NA-IL-10),流式细胞术检测各组CD4+IL-17+细胞的生成比率,ELISA法检测各组培养上清中Th17特异细胞因子IL-17A和IL-17F的浓度,qRT-PCR及Western Blot检测各组细胞中表达转录因子维甲酸相关孤核受体γt(retinoid-related orphan nuclear receptor gamma t,Rorγt)的表达水平。结果:在经典的诱导CD4+nave T细胞分化为Th17的过程中,IL-10的浓度随诱导天数的增加而逐渐上升。加入NA-IL-10后,IL-17+细胞的诱导比例随NA-IL-10浓度的增加而逐渐上升,在10μg/ml的NA-IL-10条件下,诱导生成的IL-17+细胞可达22.1%±4.5%,与无NA-IL-10组8.1%±1.9%相比差异有统计学意义(P<0.05)。10μg/ml NA-IL-10组IL-17A和IL-17F的浓度以及Rorγt的表达水平均明显高于无NA-IL-10组(P<0.05)。结论:降低培养条件中IL-10的水平能够有效地促进Th17的体外诱导分化,也进一步验证了IL-10对Th17分化的抑制作用。; 韩晶晶周骏王婷曲学彬; 关键词：辅助性T细胞17 白介素-10 中和抗体

骨髓间充质干细胞抑制CD4^+初始T细胞体外分化为Th17细胞: 2014年; 目的探讨骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)对辅助T细胞17(Th17)体外分化的免疫调控作用。方法小鼠CD4+初始T(nave T)细胞与小鼠BM-MSCs共培养,诱导分化3 d后流式细胞术检测CD4+IL-17+Th17的生成比率,ELISA法检测培养上清中IL-17的浓度,qRT-PCR及Western blot检测Th17特异转录因子Rorγt的表达水平。共培养体系中加入IL-10和PGE2中和抗体后检测Th17的分化率。结果小鼠BM-MSCs分泌高水平细胞因子TGF-β和IL-6。共培养组CD4+IL-17+Th17的生成率(2.5%±1.5%)和IL-17浓度(23±3 ng/L)均显著低于无BM-MSCs对照组(分别为17.8%±4.2%和268±27 ng/L,P<0.05),且转录因子Rorγt的表达量也明显降低。共培养组IL-10和PGE2浓度随诱导天数的增加而逐渐上升,显著高于同期对照组(P<0.05)。共培养体系中加入IL-10或PGE2中和抗体后,显著提升CD4+IL-17+Th17的生成率(从2.0%±0.5%提高到11.8%±2.5%,P<0.05),提高IL-17分泌水平(从24±4 ng/L上升到123±25 ng/L,P<0.05),增强Rorγt的表达量。联合使用两种中和抗体能进一步提高Th17的分化生成率。结论虽然BM-MSCs分泌高水平的Th17分化所需的细胞因子TGF-β和IL-6,但BM-MSCs却抑制Th17的体外分化,其抑制机制可能与IL-10和PGE2有关。; 曲学彬刘星霞韩晶晶姚瑞芹赵春华; 关键词：骨髓间充质干细胞初始T细胞

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江苏省自然科学基金(BK20130221)