国家自然科学基金(30310403165)
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
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- 腺病毒介导MOMP基因转染对树突状细胞免疫功能的影响
- 2008年
- 目的探讨腺病毒（Ad）介导E型沙眼衣原体（Ct）主要外膜蛋白（MOMP）基因转染对树突状细胞（DC）的表型及体内免疫功能的影响。方法用小鼠重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）及白细胞介素4（IL-4）从小鼠骨髓干细胞中诱导培养DC，并用大肠杆菌脂多糖（LPS）促进DC的成熟，流式细胞仪检测DC表型。用不同感染滴度（MOI）的含增强绿色荧光蛋白（EGFP）基因的重组Ad转染DC，荧光显微镜下观察EGFP的表达细胞百分率，选择最佳MOI；用最佳MOI的含MOMP基因的重组腺病毒（Ad-MOMP）转染DC，流式细胞术检测转染前后DC表型变化，并用活细胞计数试剂盒8（CCK-8）检测转染前后DC刺激同种淋巴细胞增殖的能力；ELISA检测转染前后DC分泌细胞因子及DC、T细胞共同培养上清中细胞因子的水平。Ad-MOMP转染DC经尾静脉免疫小鼠，ELISA检测其脾脏淋巴细胞分泌的细胞因子。结果诱导的DC形态典型，表面高表达CD11c、MHCⅡ类分子，中度表达CD80分子。MOI=1000为重组Ad转染DC最佳滴度，此时90％以上的DC表达荧光，Ad-MOMP转染DC后能检测到MOMP的表达。Ad-MOMP转染对DC表面的特征性表型CD11c无影响，而CD80及MHCⅡ表达上调；转染后的DC分泌大量IL-12，具有较强的刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力，并刺激T细胞分泌大量IFN-γ。Ad-MOMP转染DC后尾静脉免疫小鼠，其脾细胞产生高水平的IFN-γ。结论Ad载体能介导外源MOMP基因在DC中的表达，Ad-MOMP转染DC后MOMP基因的表达能增强DC抗原提呈功能，促进DC活化，转染后的DC与T细胞共孵育能诱导T细胞向TH1细胞分化，体内实验表明Ad-MOMP转染DC能诱导衣原体特异性TH1反应。这为Ad-MOMP转染的DC疫苗用于免疫治疗提供了理论依据和技术基础。
- 吕慧王红李湘新齐眉刘娟郑燕李靖赵蕾杨熙于修平赵蔚明
- 关键词：沙眼衣原体腺病毒载体树突状细胞
- 沙眼衣原体感染对树突状细胞功能的影响被引量：2
- 2007年
- 目的探讨鼠型沙眼衣原体(Chlamydia muridarum,C.muridarum)在树突状细胞(Dendritic Cell,DC)内的存活情况以及对DC功能的影响,为衣原体致病机制的研究提供实验依据。方法诱导培养BALB/c小鼠骨髓来源的DC。用C.muridarum感染DC,分别在247、2 h固定细胞进行衣原体包涵体染色;采用ELISA方法检测感染DC上清中的细胞因子;感染DC与T细胞共孵育48 h,CCK-8检测T细胞增殖。结果C.muri-darum能够感染骨髓来源DC,衣原体在DC中生长缓慢,形成非典型的包涵体;感染后的DC分泌较高水平的IL-12和低水平的IL-10;并且能够刺激T细胞增殖,说明衣原体感染的DC仍然具有抗原递呈能力。结论成功建立C.muridarum感染DC的体外细胞模型,且沙眼衣原体感染对DC抗原递呈功能没有造成明显影响。
- 赵红梅赵蔚明于修平赵蕾王红郑燕吕慧李靖刘娟于晗
- 关键词：衣原体沙眼树突细胞近交BALBC
- E型沙眼衣原体MOMP基因重组腺病毒的构建及免疫原性研究被引量：5
- 2006年
- 目的:构建E型沙眼衣原体(Ct)主要外膜蛋白(MOMP)基因重组腺病毒,为沙眼衣原体腺病毒疫苗的研究奠定基础。方法:根据Genebank中E型Ct MOMP基因序列设计引物,用高保真PCR方法从E型Ct基因组DNA中扩增得到MOMP基因片段,克隆至pcDNAII载体,测序后连接入腺病毒穿梭载体pDC316。穿梭载体pDC316-MOMP与含腺病毒基因组的辅助质粒PBHGlox△E1,3Cre共转染至HEK293细胞,在Cre-loxP重组酶作用下进行重组,包装成重组腺病毒颗粒,用PCR和RT-PCR方法进行鉴定。并用动物免疫试验检测重组腺病毒的免疫原性。结果:从E型Ct基因组DNA中扩增出约1.1 kb的特异MOMP基因片段,酶切鉴定及DNA序列测定证实穿梭载体pDC316-MOMP构建正确。穿梭载体pDC316-MOMP与含腺病毒基因组的辅助质粒PBHGlox△E1,3Cre共转染至293细胞,出现明显细胞病变效应。收集重组腺病毒,PCR法证实重组腺病毒含有MOMP基因,RT-PCR证实重组腺病毒在293细胞能表达MOMP基因。重组腺病毒免疫小鼠可诱导特异性抗体产生,证明重组腺病毒具有良好免疫原性。结论:成功构建了E型沙眼衣原体MOMP基因重组腺病毒,该重组腺病毒可诱导小鼠产生特异性抗体。
- 吕慧赵蔚明于修平郑燕王红周亚滨齐眉于晗杨熙
- 关键词：衣原体沙眼重组腺病毒MAJOR近交BALB
- E型沙眼衣原体MOMP基因重组质粒的构建与表达被引量：2
- 2005年
- 目的:构建E型沙眼衣原体(Ct)主要外膜蛋白(MOMP)基因重组真核表达质粒pVAX1-MOMP,为探索安全的E型CtDNA疫苗奠定基础。方法:根据Genebank中E型CtMOMP基因序列设计引物,用高保真PCR方法从E型Ct基因组DNA中扩增得到约1.1kb的MOMP片段,克隆至pcDNAII载体,测序后亚克隆至表达载体pVAX1,构建卡那霉素抗性真核重组表达质粒pVAX1-MOMP,并以重组质粒转染COS-1细胞进行表达,用Westernblotting方法鉴定表达产物。结果:从E型Ct基因组DNA中扩增出特异的MOMP基因片段,酶切鉴定及DNA序列测定证实pVAX1-MOMP重组质粒构建正确,能在COS-1细胞内表达,表达产物能与抗MOMP单克隆抗体特异性结合。结论:成功构建E型沙眼衣原体MOMP真核表达质粒pVAX1-MOMP,并在真核细胞内获得表达。
- 吕慧赵蔚明郑燕王红周亚滨齐眉栾怡程轶喆于晗杨熙于修平
- 关键词：衣原体沙眼基因表达基因MOMP
