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Screening of Strains Producing Alkaline Protease from Soil and Study on the Conditions for Enzyme Production: 2011年; [Objective] The aim was to screen strains producing alkaline protease from soil and study the conditions for enzyme production.[Method] Eight strains producing alkaline protease were isolated from soil through plate isolation,and the ability of enzyme production was measured by filter paper and Folin-phenol method.The strain with the strongest ability of enzyme production was screened as a candidate strain,then the factors influencing the ability of enzyme production was studied,finally the conditions for enzyme production was optimized through orthogonal test.[Result] No.5 strain was screened as a candidate strain due to its strong ability of enzyme production(6.00 U/ml),which accounted for 134.1% of that of Bacillus licheniformis,and it was gram-positive bacterium belonging to Clostridium.Orthogonal test showed that the optimal condition for producing protease was an environment with pH=11,0.3% of sucrose and 0.8% of peptone in the fermentation medium,and inoculation amount was 105 cfu/ml.In addition,peptone had significant impact on the level of enzyme production.[Conclusion] The study could provide theoretical references for the screening of strains producing alkaline protease.; ZHOU Yi-junHE Wen-jieFU Sha-ouTIAN Jun-duanMA Ting-ting; 关键词：SOIL SCREENING STRAIN

盐芥谷胱甘肽过氧化物酶基因(ThGPX6)的克隆及表达分析被引量：11: 2012年; 谷胱甘肽过氧化物酶在植物响应盐胁迫中具有重要作用。依据盐芥EST序列进行RACE实验,获得1个新的谷胱甘肽过氧化物酶基因,命名为ThGPX6(GenBank注册号为FJ357244)。该基因的cDNA全长892 bp,包含1个长为702bp的开放读码框,编码234个氨基酸。生物信息学分析表明,该蛋白具有植物GPX的典型结构,即GPX催化活性区(NVASKCGLT)和标志性基序(ILAFPCNQF),以及PHGPX特有序列(KWNF(S/T)KFL)。实时荧光定量PCR分析结果表明,ThGPX6在盐芥叶片和根中表达,其表达受NaCl诱导,显示ThGPX6在植物高盐响应中发挥作用。亚细胞定位结果表明,ThGPX6存在于线粒体和内体中的可能性最大,预示着ThGPX6在清除ROS过程中起着重要作用。; 马亭亭周宜君高飞赵竹隋欣刘楠刘冉; 关键词：盐芥基因克隆亚细胞定位

拟南芥过氧化物酶序列与功能的生物信息学分析被引量：5: 2012年; 植物过氧化物酶(POD)属于多基因家族,不仅是植物体内清除活性氧自由基的重要酶类之一,而且参与多种生理生化过程,在维系植物生长发育过程中发挥重要的作用。采用生物信息学方法对拟南芥过氧化物酶家族的73个基因编码的蛋白质序列的结构和功能进行了分析,其中包含氨基酸的数量、等电点、跨膜结构域、信号肽、二级结构组成及磷酸化位点等,并用Mega4.0软件构建了去除信号肽前后的系统进化树,旨在了解其结构特征。对已经进行功能研究的成员进行结构分析,以此来揭示结构与功能之间的联系,为植物抵御氧化胁迫方面研究提供理论基础。; 马亭亭周宜君高飞余丽刘冉刘楠隋欣; 关键词：拟南芥生物信息学分析

蒙古沙冬青保守microRNAs的鉴定及靶基因预测被引量：1: 2014年; 蒙古沙冬青（Ammopiptanthus mongolicus）是生长在荒漠中的木本植物,对于我国西北部干旱、半干旱区域的植被维护与恢复具有重要价值。蒙古沙冬青对干旱、低温等多种逆境具有较高的耐受性,是研究林木耐受逆境生理与分子机制的合适材料。MicroRNA（miRNA）是一类长度约为21个核苷酸的内源性非编码小分子RNA,在植物生长发育和逆境应答等生物学过程中发挥着重要的调控作用。目前,许多植物物种的miRNAs已经获得鉴定,但未见蒙古沙冬青miRNAs的相关报道。文章应用高通量测序和生物信息学分析方法对蒙古沙冬青幼苗保守miRNAs的类型、表达丰度以及靶基因进行了分析和预测。共鉴定了10个家族的19种保守miRNAs,其表达丰度介于55~1920269个拷贝之间。通过在线软件psRNATarget预测了其中14个保守miRNAs的靶基因。对于这些靶基因的功能分析表明,蒙古沙冬青的保守 miRNA 主要通过转录调控、激素信号途径、物质代谢和胁迫应答等生物学过程参与植物生长发育和环境响应。; 高飞孙鹏陈静李章磊张孜宸李华云王宁周宜君; 关键词：MICRORNAS 高通量测序

盐芥miRNAs耐盐表达研究: 2012年; 以盐生植物盐芥为实验材料,选择经过Solexa测序筛选的盐芥tsa-miR172a和tsa-miR398b为目标基因,采用茎环的反转录PCR(stem-loop RT-PCR)方法分析其在盐芥根中的耐盐表达模式,以探讨盐芥miRNAs的stem-loop RT-PCR验证体系。结果显示,经过300mmol.L-1 NaCl处理72h后,与对照相比,盐芥根中的tsa-miR172a上调表达,tsa-miR398b下调表达。用stem-loop RT-PCR方法进行tsa-miR172a和tsa-miR398b扩增,对其电泳图进行光密度分析结果显示,盐胁迫处理与对照的比值分别为1.8和0.55,Solexa测序结果分别为2.00和0.44,说明两种方法所得结果基本一致。表明该研究建立了盐芥miRNAs的stem-loop RT-PCR验证体系:每个miRNA设计3个引物(miRNA stem-loop引物、miRNA正向引物和miRNA通用反向引物);扩增条件为94℃2min,94℃15s,55℃45s,23个循环。; 刘冉周立敬周宜君高飞马亭亭隋欣刘楠; 关键词：盐芥 MIRNAS 盐胁迫

盐芥GRP7基因的克隆和逆境表达分析被引量：2: 2016年; 【目的】从抗逆植物盐芥中分离Gl尺P7（glycine-richRNA-bindingprotein7，GRP7）基因，为进一步揭示GRPs基因在盐芥逆境应答中的作用机制及生物学功能奠定基础。【方法】利用盐芥GRP7基因的EST序列设计特异引物，克隆GRP7基因的全长序列，对其保守结构域和系统进化树进行分析，并对TsGRP7基因的启动子区进行预测；利用qRT-PCR技术，检测GRP7基因在不同逆境胁迫、不同组织中的表达情况。【结果】TsGRP7基因编码区全长522bp，编码173个氨基酸；TsGRP7蛋白的N端第9-82位氨基酸之间有1个RNA识别基序（RRM），RRM中含有保守的RNP-1和RNP-2亚结构域；多重序列比对和系统进化树分析表明，盐芥和拟南芥亲缘关系较近；启动子序列分析表明，盐芥GRP7启动子区含有HSE热激响应元件、LTR低温应答元件等多个逆境相关的顺式作用元件，表明盐芥GRP7基因参与逆境响应。qRT-PCR分析表明，盐芥GRP7基因在不同逆境胁迫条件及不同组织中表达不同。【结论】盐芥GRP7基因参与低温、高盐、PEG等逆境响应。; 李景艳高飞周宜君王荣; 关键词：盐芥 QRT-PCR 逆境胁迫

植物GPXs基因结构、表达与抗逆性分析被引量：2: 2012年; 谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione Peroxidase,GPX)是植物体内清除活性氧自由基的重要酶类之一,在保护膜免受氧化损伤中发挥重要作用.目前在一些植物中已经克隆获得了编码GPXs的基因序列.通过对拟南芥、杨树和百脉根等植物GPXs基因结构和功能的分析,研究植物GPXs基因结构及其在胁迫应答中的表达变化,总结了植物GPXs在抗逆应答反应中的可能作用.; 隋欣周宜君马亭亭高飞刘楠; 关键词：抗逆性

盐芥STZ转录因子基因的克隆及序列分析: 2012年; 【目的】克隆盐芥STZ转录因子基因,对其进行序列分析,为进一步研究ThSTZ转录因子在逆境应答中的作用奠定基础。【方法】利用GenBank数据库中盐芥STZ转录因子的EST序列设计特异引物,通过3′RACE技术克隆ThSTZ基因的全长序列,应用生物信息学手段对该基因编码蛋白的结构与功能、亚细胞定位等进行预测,并对其编码氨基酸序列的同源性和系统进化进行分析。【结果】盐芥STZ转录因子基因全长717bp,编码238个氨基酸。其编码蛋白含有2个C2H2型锌指结构域,位于细胞核内,属于C2H2家族转录因子;多重序列比对和系统进化分析表明,盐芥STZ转录因子与拟南芥属植物同源蛋白的相似性最高。【结论】获得了ThSTZ转录因子基因的全长序列,为进一步探讨ThSTZ转录因子在逆境应答中的功能奠定了基础。; 王荣李晓峰高飞黄继昌周宜君; 关键词：盐芥 C2H2型锌指蛋白

民族地区沙冬青种质资源保护与利用被引量：4: 2011年; 在我国,仅少量分布于民族地区——新疆、内蒙古、宁夏的沙冬青属植物是西北部荒漠地区唯一的超旱生常绿阔叶灌木,也是国家重点保护的第一批珍稀濒危物种。在长期适应恶劣自然环境的过程中,沙冬青形成了抗旱、抗寒、抗风蚀等特性,其基因组中蕴藏着大量优异的抗逆基因。沙冬青不仅具有重要的生态价值、经济价值,而且具有很高的科学研究价值。本文从沙冬青种质资源的生物学特征、价值、保护生物学研究和抗逆基因挖掘等方面进行了综述。; 周宜君高飞冯金朝刘冉马亭亭沈光涛; 关键词：沙冬青生物学特征

植物MicroRNA的特点与研究方法被引量：5: 2011年; MicroRNAs(miRNAs)是一类在植物、动物、单细胞藻类和病毒等中存在的具有调控基因表达作用的内源非编码小RNA(small RNAs)。在植物中,miRNAs主要依靠与靶基因之间完全或近乎完全的互补配对切割靶基因或翻译抑制实现其调控功能。主要综述植物miRNA的特点,并介绍miRNA的获得方式、靶基因预测及验证方法。; 周立敬高飞马亭亭刘冉马玲姚尧周宜君; 关键词：植物小RNA MICRORNA 研究方法

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