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国家烟草专卖局基金(110201002002): 作品数：17 被引量：97H指数：6; 相关作者：罗成刚杨爱国冯全福耿锐梅王元英更多>>; 相关机构：中国农业科学院烟草研究所中国农业科学院中国农业科学院中国水稻研究所更多>>; 发文基金：国家烟草专卖局基金公益性行业科研专项四川省烟草专卖局(公司)科技项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>

普通烟草WRKY基因家族的鉴定及表达分析被引量：25: 2016年; WRKY 基因家族编码产物是一类含有 WRKY 保守结构域的转录因子（Transcription factors, TFs），在植物的生长发育、胁迫应答等过程中起着重要的作用。目前，已在多种植物中鉴定了 WRKY 基因家族，但在普通烟草（Nicotiana tabacum L.）中 WRKY 家族的系统鉴定与分析还未见报道。本研究利用 WRKY 保守域全蛋白序列 PF03106检索普通烟草蛋白序列，获得 WRKY 家族候选序列共164个。利用多种生物信息学软件对该家族成员进行了系统进化树、保守结构域、亚细胞定位预测、染色体定位和组织表达等分析。分组鉴定和进化树分析结果显示，可将164个候选 NtWRKY 蛋白分为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ3个亚家族。其中，Ⅱ亚家族又可细分为Ⅱ-a、Ⅱ-b、Ⅱ-c、Ⅱ-d 和Ⅱ-e 共5个亚组。WRKY 结构域分析结果显示，多数基因由2~5个外显子组成，各成员间的核心结构域高度保守，含有 WRKY 盒和锌指结构。亚细胞定位预测结果显示，大部分 NtWRKY 成员都定位在细胞核中，参与核基因的转录调控；而第Ⅲ亚家族的大部分成员（74%）定位于细胞质基质中，可能参与细胞质基因的转录调控。染色体定位结果显示，共有154个 NtWRKY 基因能够定位于24条染色体中，且呈不均匀分布，6号染色体上分布最多，含16个候选基因，10号染色体上分布最少，只有1个候选基因。组织表达分析结果显示，大部分 NtWRKY 基因在烟草根、茎、叶中都有表达，但不同基因间的表达模式存在差异，这暗示了烟草 NtWRKY 家族的不同成员在功能上可能具有多样性。研究还发现基因 NtWRKY26、NtWRKY30、NtWRKY32的表达模式受黑胫病原菌（Phytophthora parasitica var. nicotianae）诱导，可能与烟草-黑胫病菌互作机制相关。本研究不仅为研究普通烟草 WRKY 转录因子在调控生长发育过程中的作用奠定了相关理论基础，也为进一步分析普通烟草 WRKY 基因; 向小华吴新儒晁江涛杨明磊杨帆陈果刘贯山王元英; 关键词：普通烟草 WRKY 基因家族转录因子生物信息学基因表达

烟草细胞质雄性不育线粒体基因sdh3和sdh4的生物信息学分析被引量：8: 2013年; 线粒体基因异常可能导致烟草细胞质雄性不育。sdh3、sdh4是编码线粒体电子传递链复合体II亚基的重要基因,为探讨线粒体基因sdh3、sdh4与细胞质雄性不育的关系,从3个普通烟草不育系品种及其保持系中提取线粒体DNA,根据GenBank报道的烟草线粒体DNA序列设计特异引物扩增目的基因并克隆测序,应用生物信息学方法,分析烟草雄性不育系及保持系的sdh3、sdh4基因在其核苷酸、编码蛋白各结构层次上存在的差异。结果显示,不育系的sdh4基因第28位碱基发生了改变;不育系的sdh3基因发生10个碱基的缺失,以致其编码蛋白改变,这极可能成为干扰线粒体琥珀酸脱氢酶亚基3功能的关键因素,从而成为可能导致烟草CMS的根本原因之一。; 张长静李凤霞贾兴华李尊强冯全福; 关键词：烟草细胞质雄性不育线粒体

一个抗赤星病基因的SSR标记连锁群被引量：6: 2013年; 为筛选到与抗赤星病基因连锁更加紧密的SSR标记,并绘制出抗病基因的SSR标记连锁图。本研究以一个位于M号连锁群上且与净叶黄抗赤星病基因有连锁关系的SSR标记为基础,将高密度遗传连锁图谱中位于M号连锁群上的130对SSR引物进行合成及扩增筛选,通过数据分析,获得了一个抗赤星病基因的SSR标记连锁群。该连锁群包括12个标记,全长181.5cM,平均间距15.1cM,抗性基因被定位在标记J4与J9之间,其中与J9的遗传距离仅为4cM,为下一步抗性基因的精细定位奠定了良好的基础。; 蒋彩虹王元英任民张兴伟杨爱国程立锐冯全福罗成刚; 关键词：烟草赤星病连锁群 SSR

Effects of Spores and Crude Toxins of Helminthosporium gramineum Rabenh f.sp.echinochloae on the Activity of Defensive Enzymes in Barnyardgrass被引量：1: 2012年; [Objective] This study aimed to explore the effects of spores and crude toxins of Helminthosporium gramineum Rabenh f. sp. echinochloae（HGE） on the ac- tivity of defensive enzymes of barnyardgrass [Echinochloa crus-galli （L.） Beauv.]. [Method] The effects of spores and crude toxins of HGE, as well as the mixture of spores and crude toxins on the activity of defensive enzymes in barnyardgrass were determined under laboratory conditions. [Result] Spores and crude toxins of HGE had varying degrees of effects on PAL and POD activity, and no obvious effect on SOD activity in barnyardgrass. In addition, spores and toxins had some similar im- pacts on the defensive enzymes in barnyardgrass. [Conclusion] Since toxins have similar effects on the hosts as spores of fungal pathogen do, they can be a substi- tute for the fungal pathogen in studying the partial pathogenic mechanism of this pathogen due to its complexity in pathogenic process.; 耿锐梅余柳青罗成刚李彦东曹长代无

一种从非变性聚丙烯凝胶中回收小片段DNA的方法被引量：2: 2015年; 利用高分辨率的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离、纯化特异性小片段DNA的首选方法,也是开展后续多种分子生物学试验的前提。本试验比较了改良煮沸法(液氮研磨+煮沸+低温浓缩)、煮沸法及直取法回收小片段DNA,以回收样品模板进行第二次PCR扩增,结果表明:改良方法回收的DNA的纯度高,特异性好,回收率与经典煮沸法相当。在保证回收产物的特异性时,用低温浓缩法替代乙醇/醋酸钠共沉淀也具有可行性及一定的创新性。; 向小华焦禹顺吴新儒程亚增侯烁刘贯山王元英; 关键词：二次PCR

黑胫病菌诱导的烟草SSH文库构建及其分析被引量：11: 2011年; 黑胫病是危害严重的世界性烟草主要病害之一,探究烟草对黑胫病的抗病机制,可以为该病的综合防治提供理论依据。本研究以烟草黑胫病抗性品种革新3号为材料,利用黑胫病0号生理小种诱导其水平抗性,分别在接种后0.5、1、3、6、10和16d取样,通过抑制差减杂交技术(SSH)构建cDNA文库,获得了960个阳性克隆。利用反向Northern斑点杂交技术对其中240个阳性克隆进行杂交筛选,筛选出57个表达差异明显的基因,序列拼接后获得33条高质量EST,测序及其比对分析表明,革新3号对烟草黑胫病抗性相关基因主要涉及抗病防卫、光合作用、信号传导和能量代谢等方面。进一步基因功能分析显示,病程相关PR1b蛋白、半胱氨酸蛋白、延伸因子1-α、α-微管蛋白、细胞色素P450、精胺合成酶、水通道蛋白、过氧化物酶体膜蛋白、甘氨酸延伸因子等可能参与了烟草与黑胫病菌非亲和互作过程。; 苏振刚杨爱国孙玉合罗成刚刘贯山周佳李元元杨帆赵百英王元英; 关键词：烟草抑制差减杂交

烟草MADS-box家族基因保守片段的克隆与序列分析被引量：4: 2011年; MADS-box家族基因在植物的生长发育过程中具有重要功能。在烟草生产中出现的早花现象与MADS-box家族基因相关,为了能从烟草中克隆出与开花时间相关的基因,根据不同植物MADS-box家族基因的保守区序列,设计简并引物,采用RT-PCR技术从烟草品种NC82茎尖中成功分离出27条cDNA片段,长度在122～146 bp之间。序列分析表明,其中有16条具有MADS_MEF2类保守结构域,其推导的氨基酸序列与拟南芥等MADS-box家族基因具有同源性,相似性平均能达到76%,并具有15个保守的氨基酸位点,其中7个位点参与蛋白与DNA的相互作用,4个位点具有蛋白二聚化功能。系统发育分析结果表明,这些保守片段分别和拟南芥9个不同的MADS-box家族基因亚类最近似,其中许多亚家族与成花相关,说明NC82中存在具有调控开花的MADS-box家族基因表达,并可能与NC82低温敏感,易早花特性相关。; 李元元杨爱国王鲁罗成刚贾兴华刘贯山苏振刚王元英; 关键词：烟草 RT-PCR

烟草CHS基因RNA干扰载体的构建及其遗传转化被引量：2: 2013年; 类黄酮化合物是烟草香气形成的重要前体物质,其形成需要多个调控基因的参与,查尔酮合成酶基因(CHS)是类黄酮物质合成途径中的关键基因,它的突变或沉默可能影响香气物质的形成。为了探讨CHS基因的下调表达对烟草香气的影响以及为选育优良的高香气品种提供技术,采用GATEWAY技术经BP反应和LR反应将CHS基因片段重组到表达载体pH7GWIWG2(I)上,成功构建了具有反向重复序列的CHS基因的RNAi表达载体,并通过农杆菌介导法转染烟草‘大白筋599’,以期为研究CHS基因在烟叶香气物质方面的作用奠定基础。经过鉴定,获得24株阳性转基因‘大白筋599’。; 李尊强杨爱国常爱霞张长静郑吉云冯全福; 关键词：烟草查尔酮合成酶 CHS 基因 RNAI载体

烟草DXS基因的克隆及其亚细胞定位分析被引量：6: 2013年; [目的]从烟草cDNA中扩增出1-脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶(DXS)基因(去除终止密码子TAA),并对其进行亚细胞定位分析。[方法]利用RT-PCR技术分离、克隆DXS,将烟草DXS基因与绿色荧光蛋白(GFP)基因重组构建亚细胞定位表达载体,转入根癌农杆菌LBA4404后注射侵染本氏烟烟草幼苗进行瞬时表达;并利用激光共聚焦扫描显微镜观察转GFP植株的表达情况。[结果]显微镜观察发现,DXS和GFP融合蛋白仅在本氏烟叶肉细胞(尤其是保卫细胞)的叶绿体中产生绿色荧光,DXS基因在叶绿体中特异表达。[结论]DXS定位在叶绿体中,为接下来对DXS基因功能研究提供了理论依据。; 李尊强王春军杨爱国丁安明冯全福徐剑焦惠鹏商堃宇; 关键词：亚细胞定位叶绿体

植物MicroRNA研究进展及其在植物与病原菌互作中的作用被引量：2: 2011年; 针对植物MicroRNA研究进展进行综述,主要阐释植物MicroRNA的分子进化、功能及调控机制;同时,指出植物MicroRNA在植物与病原菌互作中的作用。今后应加强MicroRNA在植物抗性机制中的研究,从而为植物抗病性机制研究提供理论基础。; 耿锐梅杨宏伟曹长代冯全福陈志强罗成刚; 关键词：植物 MICRORNA 病原菌抗病性育种

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