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人源pEGFP-C1-p38γ真核表达质粒的构建及其功能研究被引量：1: 2021年; 目的构建人源pEGFP-C1-p38γ表达质粒,并观察其对乙醇刺激的L0-2肝细胞的增殖和凋亡及炎症因子分泌的影响。方法在人源L0-2肝细胞中提取RNA并且逆转录为{1}DNA,同时将引物稀释到10μmol/L,其余作为储液备用。采用PCR技术扩增p38γ并鉴定,使用AxyPrep DNA凝胶回收试剂盒进行PCR产物的纯化回收,再对PCR产物及载体进行酶切回收,酶切片段连接后,进行连接产物的转化、挑菌、摇菌、质粒小抽。酶切鉴定后,进行测序鉴定。将构建好的质粒转染至乙醇刺激的人源L0-2细胞中,通过MTT实验和流式细胞术检测对其增殖和凋亡的影响,并用Western blot技术检测炎症因子白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在L0-2肝细胞中的表达。结果测序显示pEGFP-C1-p38γ真核表达质粒构建成功。同时,MTT实验显示,乙醇刺激L0-2细胞24 h后p38γ过表达组细胞的增殖率为(0.42±0.08)%,低于转染空载体的对照组(0.60±0.03)%;流式细胞术检测结果显示,p38γ过表达组细胞的凋亡率为(17.46±1.52)%,高于转染空载体质粒的对照组(13.18±1.34)%;Western blot检测显示p38γ过表达组中的IL-6和TNF-α表达较对照组升高。结论 p38γ能够抑制乙醇刺激的L0-2肝细胞的增殖,并促进其凋亡。同时,p38γ能够促进乙醇刺激后的L0-2肝细胞中IL-6和TNF-α的表达。; 胡爽杨莉陈晨潘林鑫李良云杨俊发周焕徐涛; 关键词：白细胞介素-6 肿瘤坏死因子-Α

鼠源pEGFP-C1-TMEM88真核表达质粒的构建及其功能研究被引量：1: 2019年; 目的构建鼠源真核表达载体pEGFP-Cl-跨膜蛋白88质粒(pEGFP-Cl-TMEM88),并观察其对RAW264.7细胞中炎症因子分泌的影响和对RAW264.7细胞增殖和凋亡的影响。方法在小鼠正常肝细胞株(AML-12)中提取RNA并且逆转录为cDNA,同时将引物稀释到10 pmol/F,其余作为储备液。采用PCR技术扩增跨膜蛋白88(TMEM88)并鉴定,使用AxyPrep DNA凝胶回收试剂盒进行PCR产物的纯化回收。再对PCR产物及载体进行酶切回收,酶切片段连接后,进行连接产物的转化、挑菌、摇菌、质粒抽提。酶切鉴定后,送至测序鉴定。将构建好的质粒转染至小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7细胞中,通过MTT实验和流式细胞术检测其对细胞增殖和凋亡的影响,并用ELISA技术检测炎症因子:白细胞介素6(IIC)、肿瘤坏死因子c(TNF-t)在RAW264.7细胞中的表达。结果测序结果显示pEGFP-Cl-TMEM88真核表达质粒构建成功;MTT实验结果显示:48 h后过表达TMEM88组细胞的增殖率为(0.71±0.04),显著低于对照组(0.94±0.06)(F=21.55,P<0.01);流式细胞术结果显示:过表达TMEM88组细胞的凋亡率为(11.52±1.43)%,显著高于对照组(7.78±1.67)%(F=10.07,P<0.05);ELISA检测结果显示:转染pEGFP-Cl-TMEM88质粒后的RAW264.7细胞中的HT'TNF-/表达较对照组升高&结论TMEM88能够显著抑制RAW264.7细胞的增殖并促进其凋亡,TMEM88在RAW264.7细胞中炎症因子HIL-6、TNF-a的表达升高,为进一步了解TMEM88的功能奠定了基础。; 李良云潘林鑫杨俊发胡爽张濛李俊徐涛; 关键词：RAW264.7细胞

pEGFP-C1-MCH真核表达载体的构建及其在HEK293细胞系中的表达: 2018年; 目的:构建pEGFP-C1-MCH真核表达载体,并将其转染入HEK293细胞中,筛选阳性细胞克隆,为研究MCH基因在能量代谢中的功能及机制提供细胞模型.方法:提取脑组织总RNA,反转录为cDNA,参照Genbank中提供的序列设计引物扩增MCH基因全长.再将该基因全长cDNA克隆至质粒pEGFP-C1,经菌落PCR筛选及双酶切和DNA测序鉴定,成功构建了含有目的基因MCH的重组质粒pEGFP-C1-MCH.并利用脂质体2000介导其转染HEK293细胞,用荧光显微镜和RT-PCR检测EGFP和MCH在细胞中的表达.结果:克隆的pEGFP-C1-MCH质粒序列中的MCH与Gen Bank相符;细胞转染72 h后,转染成功的细胞在荧光显微镜下表达较强的绿色荧光,MCH基因稳定表达.结论:pEGFP-C1-MCH真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的稳定表达,为研究MCH基因在能量代谢中的功能及作用机制提供了实验模型.; 徐婧侯赋园王德彬李竣胡鑫杨光忠; 关键词：绿色荧光蛋白 PEGFP-C1 HEK293

pEGFP-C1-ApoE真核表达载体的构建及在HEK-293T细胞中的表达: 2018年; 载脂蛋白E是决定血浆胆固醇水平的重要遗传因素之一,其作为多种脂蛋白的结构蛋白,在脂类的运输和代谢中起着非常重要的作用。本文以脂肪型小型猪从江香猪为研究对象,通过克隆从江香猪载脂蛋白E（ApoE）基因CDS区,构建携带有绿色荧光蛋白的p EGFP-C1-ApoE重组质粒,转染HEK-293T细胞,旨在研究ApoE基因表达产物在真核细胞中的表达情况。序列比对结果表明,从江香猪ApoE基因与Gen Bank上公布的野猪序列相比,有8处发生了碱基突变,其中7处发生在C和G之间,另一处103位T→C的碱基突变,导致丝氨酸（S）突变为稀有密码子脯氨酸（P）,使ApoE基因稀有密码子由23个增加到24个;生物信息学分析发现,突变后从江香猪ApoE基因二级、三级结构,蛋白理化性质均发生了改变。信号肽预测软件发现,ApoE蛋白在1-18位氨基酸残基位具有信号肽。荧光共定位实验结果表明,ApoE蛋白在细胞中表达部位与软件预测结果一致,均在细胞质中表达。相关研究为进一步构建ApoE基因转基因动物模型奠定基础。; 赵佳福嵇辛勤杨远青段志强龚婷; 关键词：从江香猪细胞转染基因表达

重组pEGFP-C1-CXCL1真核表达载体构建及其对内质网应激下人肝癌细胞HepG2的增殖作用被引量：1: 2017年; 目的构建pEGFP-C1-CXCL1真核表达载体,研究过表达CXCL1对内质网应激(ERS)下肝癌细胞增殖作用。方法以Hep G2细胞的c DNA文库为模板,通过PCR扩增CXCL1编码序列,并将其插入pEGFP-C1空载体,构建pEGFP-C1-CXCL1真核表达载体,随后将其瞬时转染到293T细胞中,通过荧光显微镜和蛋白质免疫印迹法检测CXCL1在真核细胞中的表达情况,将pEGFP-C1-CXCL1转染至Hep G2细胞中,CCK8检测CXCL1对TM诱导下的ERS肿瘤增殖的抑制作用。结果菌液PCR和测序结果均证实得到pEGFP-C1-CXCL1真核表达载体,其转染293T细胞后,在荧光显微镜下可观察到绿色荧光,免疫印迹表明CXCL1在293T细胞中表达,CCK8实验表明,ERS条件下肿瘤的增殖受到抑制,而过表达的CXCL1可降低ERS下的Hep G2细胞的增殖抑制。结论成功构建了真核表达质粒pEGFP-C1-CXCL1,并在人胚肾293T细胞中瞬时表达成功,过表达的CXCL1可有效降低由ERS造成的肝癌细胞的增殖抑制。; 毛瑞涛陈伟李自慧邹岭叶甲舟白涛陈洁陈健康王翠刘宁杨晓莉魏从文钟辉吴飞翔; 关键词：趋化因子类

人pEGFP-C1-IL-8真核表达载体的构建与表达: 2017年; 【目的】构建人pEGFP-C1-IL-8真核表达载体,为研究白介素8(interleukin-8,IL-8)在卵巢癌及其他肿瘤中的作用奠定基础。【方法】PCR法扩增IL-8全基因序列后,将其克隆入含增强型绿色荧光蛋白(enhenced green fluorescent protein,EGFP)表达载体pEGFP-C1,通过菌落PCR鉴定、双酶切鉴定及测序鉴定后,将构建好的表达载体与其空载体分别转染至人卵巢癌细胞系A2780中,荧光显微镜下观察转染效率,用RT-PCR和ELISA法检测细胞转染后细胞IL-8的表达水平。【结果】经过菌落PCR鉴定、双酶切鉴定及测序鉴定,重组人IL-8真核表达载体构建正确。pEGFP-C1-IL-8和pEGFP-C1分别转染入A2780细胞后,转染成功的细胞能够表达GFP,转染效率约为75%~80%。转染空载体的A2780细胞未检测到IL-8 m RNA表达,而转染重建载体的A2780细胞表达水平较高,细胞上清液IL-8蛋白表达水平约为前者的2.91倍(P<0.05)。【结论】成功构建了真核表达载体pEGFP-C1-IL-8,重组质粒能使人卵巢癌细胞系A2780过表达IL-8。; 黄素辉马晓霞屈野郭小芹王越; 关键词：白介素8 绿色荧光蛋白真核表达载体卵巢癌细胞系

Experimental research of pEGFP-{1}1-wtp53 plasmid transfecting to murine glioma {1}6 cell by Ultrasound-mediated SonoVue microbubbles: Objective:To discusses the feasibility of ultrasound-mediated SonoVue microbubble irradiation enhanced pEGFP-C...; Zhang Ruifangliu haiyan; 关键词：ULTRASOUND MICROBUBBLES GLIOMA; 文献传递

兔病毒性出血症3C基因荧光表达载体的构建及其在293 T细胞中的表达: 2016年; 目的：构建EGFP与3C融合表达的真核表达质粒，为研究RHDV 3C蛋白在病毒感染中的作用提供基础。方法 RHDV 3C基因的片段经过反转录成cDNA，纯化的PCR产物经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切后克隆到pEG-FP－C1载体，构建EGFP与3C融合表达的真核表达质粒。 pEGFP－C1－3C真核表达载体转染293T细胞，24 h后荧光显微镜检测及Western blot检测EGFP－3C融合蛋白表达情况。结果24 h后荧光显微镜及Western blot检测表明RHDV 3 C基因全长编码序能够成功插入到pEGFP－C1载体。结论 EGFP－3 C融合表达质粒能够被成功构建，从而有助于探索RHDV 3C蛋白在RHDV感染过程中的功能，为深入探讨RHDV的防治提供基础。; 刘鹏陈全刚袁红花张锦萍吴连连胡安康陈仁金朱孝荣; 关键词：兔病毒性出血症病毒真核表达载体

重组表达载体IDO/pEGFP-C1的构建被引量：2: 2015年; 【目的】构建表达IDO重组表达载体IDO/p EGFP-C1。【方法】RT-PCR扩增IDO c DNA,连接于表达载体p EGFP-C1,酶切鉴定及序列分析证实后将载体转染至TC-1细胞,RT-PCR和Western blotting实验观察IDOm RNA和蛋白表达。【结果】酶切鉴定及序列分析证实IDO成功连接于表达载体p EGFP-C1上,转染至TC-1细胞后可见IDOm RNA和蛋白表达。【结论】IDO重组表达载体IDO/p EGFP-C1构建成功。; 陈琬玲李臣范立师娟甘泉李永芬苏瑾蒋璧谦; 关键词：基因重组

猪β干扰素真核表达载体pEGFP-C1-IFN-β的构建及在CHO细胞中的表达被引量：4: 2015年; 为了获得重组猪β干扰素,并实现其在CHO-K1细胞中的表达,根据GenBank中登录的IFN(JN391525.1)核苷酸序列,设计并合成目的基因的检测引物,并将合成的目的基因克隆至pEGFP-C1载体上,构建重组真核表达质粒pEGFP-C1-IFN-β,通过PCR、酶切鉴定及测序确认,将重组质粒转染到CHO-K1细胞中。经SDS-PAGE检测,获得了约25ku的表达产物,与预期的猪β干扰素蛋白的分子质量大小一致。Western-blot分析表明,表达产物与抗β干扰素阳性血清发生反应,证实表达产物具有良好的反应原性。本试验成功地在CHO-K1细胞上表达了猪β干扰素,为猪β干扰素的后续研究及生产提供了技术支持。; 徐雷冯若飞李向茸张海霞谢晶莹包晓婧马玉梅马忠仁; 关键词：真核表达免疫活性

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