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不同耐药型的结核分枝杆菌hspX基因序列与表达的比较
2023年
目的比较不同耐药型的结核分枝杆菌(MTB)热休克蛋白基因hspX序列与表达,初步探讨hspX与MTB的耐药是否存在相关性。方法选取4种一线抗结核药物全部敏感株(S)、同时对异烟肼和利福平耐药(MDR)和一种耐药[单耐利福平(MTB^(R+))、单耐异烟肼(MTB^(H+))、单耐链霉素(MTB^(S+))和单耐乙胺丁醇(MTB^(E+))]的菌株各10株,采用改良的十二烷基苯磺酸钠裂解法和TRIzol法分别提取各组菌株的DNA和RNA,使用特异性引物进行PCR和实时荧光定量PCR确定hspX基因的存在及其表达。对PCR产物进行测序以检查正向和反向的多态性,并用DNAman软件进行与标准株H37Rv序列比对。以敏感菌株(S)组为对照组进行两两对比分析不同耐药型的MTB菌株hspX表达的差异。结果PCR成功获得各组特异性的hspX基因,与H37Rv序列比对具有97%~99%的同一性,无存在明显差异;以相对定量2^(-ΔΔCt)法计算获得S、MDR、MTB^(R+)、MTB^(H+)、MTB^(S+)和MTB^(E+)菌株hspX的表达分别为0.98(0.89,1.23)、1.49(1.10,2.04)、1.41(0.55,2.80)、1.37(0.68,2.71)、0.91(0.59,1.62)和0.70(0.48,1.18)。以敏感菌株(S)组为对照组,不同耐药型菌株组与其比较,hspX表达差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论hspX基因在MTB中是保守的。在自然状态下,hspX基因在MTB的耐药性方面无明显相关性。
杨瑜王楠李华吴玲王琪谢贝刘志辉孟繁荣
关键词:结核分枝杆菌热休克蛋白
含结核分枝杆菌潜伏期分泌抗原HspX的亚单位疫苗
本发明涉及生物医药技术领域,尤其涉及含结核分枝杆菌潜伏期分泌抗原HspX的亚单位疫苗。结核亚单位疫苗包括:如SEQ ID NO.1所示的EsxH蛋白、如SEQ ID NO.2所示的CFP10蛋白、以及如SEQ ID NO...
万康林刘海灿范雪亭李马超于晋杰
结核分枝杆菌H37Ra株HspX蛋白的表达条件优化、纯化和鉴定被引量:1
2023年
以结核分枝杆菌H37Ra菌株基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增获得HspX基因,通过DNA无缝克隆技术将其克隆至pET28a质粒中,构建重组表达质粒pET28a-HspX。将pET28a-HspX转化至大肠埃希菌表达菌株BL21(DE3),采用不同温度、IPTG浓度和时间诱导HspX蛋白表达。使用Ni-IDA亲和层析柱纯化目的HspX蛋白,透析去除咪唑,通过Western blot检测HspX抗原特异性。最终确定表达重组蛋白HspX的最佳诱导条件为:诱导温度37℃、IPTG浓度0.2 mmol/L、诱导时间8 h。结果表明,获得了高纯度和被特异性识别的可溶性Hsp X蛋白,为未来Hsp X蛋白用于结核病诊断试剂和疫苗奠定基础。
魏婧郑如明李康生李柏青李柏青汪洪涛
关键词:结核分枝杆菌HSPX原核表达纯化
结核分枝杆菌休眠相关蛋白HspX的生物信息学分析、制备及对大肠埃希菌生长抑制探究被引量:1
2023年
目的分析HspX蛋白的基本性质及其编码基因对大肠埃希菌(E.coli)生长的影响,为将其作为结核病疫苗候选分子和临床检测生物标志物的可行性提供实验依据。方法应用生物信息学方法分析HspX蛋白基本生化性质;构建原核重组表达载体并在E.coli中表达,用金属螯合层析法纯化HspX蛋白,观察该蛋白及其编码基因对宿主菌E.coli-BL21(DE3)和E.coli-DH5α生长的影响。结果生物信息学分析HspX蛋白由144个氨基酸残基组成,相对分子质量为16.22728×10^(3),等电点为5.00;该蛋白无信号肽,含有14个磷酸化位点,为亲水性细胞壁蛋白。其在大肠埃希菌中以可溶性表达,经镍金属螯合填料一步纯化得到纯度为86.9%的重组蛋白。重组质粒(pET28a-Rv2031c)能显著抑制其表达宿主菌E.coli-BL21(DE3)的生长,但不会抑制其克隆宿主菌E.coli-DH5α的生长。结论HspX蛋白能抑制E.coli-BL21(DE3)宿主菌的生长,其可能是结核分枝杆菌在宿主体内滞留发挥作用的效应物之一。
马锐马金花杨壤李雅婷赵志浩马国荣
关键词:HSPX生物信息学分析
HspX的功能及其在结核疫苗研制中的应用进展被引量:1
2020年
研制安全有效的结核疫苗一直是结核病研究的重点,因此,有必要对其主要致病菌结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)抗原进行科学合理的评价。本文综述了潜伏性结核感染重要抗原HspX的致病机制及其在结核疫苗研制中的应用进展,探讨了HspX抗原在不同类型疫苗研制中的作用,旨在为将来研制有效的结核疫苗提供较准确的信息。
梁正敏宋银娟董玉慧屈孟锦周向梅
关键词:HSPX结核分枝杆菌结核疫苗
结核分枝杆菌PstS1和HspX蛋白的免疫反应性及诊断价值评价被引量:1
2020年
目的:评价结核分枝杆菌PstS1和HspX蛋白的体液和细胞免疫反应性,为结核病免疫学诊断和疫苗候选抗原的筛选提供参考。方法:利用分子克隆表达和Ni 2+亲和层析技术纯化获得重组目的蛋白PstS1和HspX。收集健康志愿者和结核分枝杆菌感染志愿者血液样本及其背景流行病学资料,以重组PstS1和HspX蛋白作为抗原,进行酶联免疫吸附试验(ELISA)和酶联免疫斑点试验(ELISPOT)分别检测特异性IgG抗体和分泌IFN-γ的抗原特异性T淋巴细胞。对数据进行统计学分析,评价重组PstS1和HspX蛋白的体液和细胞免疫反应性。 结果:重组PstS1和HspX蛋白均能特异性刺激结核分枝杆菌感染者体内较多的效应T细胞分泌IFN-γ,结核分枝杆菌感染组与健康对照组的检测结果差异有统计学意义( P<0.01);重组PstS1和HspX蛋白作为ELISPOT诊断抗原的特异度和灵敏度分别为92.11%(35/38)和65.96%(31/47),68.42%(26/38)和91.49%(43/47)。重组PstS1和HspX蛋白也具有一定的体液免疫反应性,但仅HspX蛋白特异性抗体水平在结核分枝杆菌感染组与健康对照组间的差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:重组PstS1和HspX蛋白均具有较好的细胞免疫反应性,属于细胞免疫优势抗原。两者均具有较好的细胞免疫诊断性能,同时也是较好的潜在抗结核疫苗候选抗原。
李娜李马超肖彤洋闫宇涵李晓琴刘海灿万康林
关键词:结核分枝杆菌HSPX
HspX protein as a candidate vaccine against Mycobacterium tuberculosis: an overview被引量:1
2018年
BACKGROUND: Tuberculosis (TB) is a contagious infectious disease caused by Mycobacterium tuberculosis (Mtb). This disease with two million deaths per year has the highest mortality rate among bacterial infections. The only available vaccine against TB is BCG vaccine. BCG is an effective vaccine against TB in childhood, however, due to some limitations, has not proper efficiency in adults. Also, BCG cannot produce an adequately protective response against reactivation of latent infections. OBJECTIVE: In the present study we will review the most recent findings about contribution of HspX protein in the vaccines against tuberculosis. METHODS: Therefore, many attempts have been made to improve BCG or to find its replacement. Most of the subunit vaccines for TB in various phases of clinical trials were constructed as prophylactic vaccines using Mtb proteins expressed in the replicating stage. These vaccines might prevent active TB but not reactivation of latent tuberculosis infection (LTBI). A literature search was performed on various online databases (PubMed, Scopus, and Google Scholar) regarding the roles of HspX protein in tuberculosis vaccines. RESULTS: Ideal subunit post-exposure vaccines should target all forms of TB infection, including active symptomatic and dormant (latent) asymptomatic forms. Among these subunit vaccines, HspX is the most important latent phase antigen of M. tuberculosis with a strong immunological response. There are many studies that have evaluated the immunogenicity of this protein to improve TB vaccine. CONCLUSION: According to the studies, HspX protein is a good candidate for development of subunit vaccines against TB infection.
Arshid Yousefi-AvarvandMohsen TafaghodiSaman SoleimanpourFarzad Khademi
关键词:VACCINE
牛分枝杆菌FixB、HspX和MPB83基因的原核表达及鉴定
2017年
为了给原核表达牛分枝杆菌Fix B、Hsp X和MPB83基因并纯化Fix B、Hsp X和MPB83蛋白,进一步研究它们在牛结核病诊断中作为特异性抗原的诊断价值及应用奠定基础,试验用PCR方法从牛结核分枝杆菌AF2122/97基因组中扩增出Fix B、Hsp X和MPB83基因片段,构建p ET-28a-Fix B、p ET-28a-Hsp X和p ET-28a-MPB83重组质粒,克隆到DH5ɑ感受态细胞,提取测序正确的阳性重组质粒,转化BL21(DE3)感受态细胞,用1 mmol/L IPTG于37℃诱导表达,SDS-PAGE分析目的蛋白的表达形式,Western-blot分析鉴定并用Ni-NTA层析柱纯化蛋白。结果表明:成功扩增了大小依次约为957 bp、435 bp和663 bp的Fix B、Hsp X和MPB83基因,将其连接p ET-28a原核表达载体,原核表达的Fix B、Hsp X和MPB83重组蛋白均以包涵体形式存在,分子质量依次约为37 ku、21 ku和28 ku。经Western-blot鉴定表达产物为Fix B、Hsp X和MPB83重组蛋白,Ni-NTA成功洗脱出目的蛋白。说明试验成功构建了牛分枝杆菌Fix B、Hsp X和MPB83基因的原核表达载体,并纯化了Fix B、Hsp X和MPB83重组蛋白,可用于进一步的应用研究。
陈爽许芳张林波张喜悦范伟兴
关键词:牛分枝杆菌HSPX原核表达纯化
结核分枝杆菌HspX基因真核表达载体构建
2015年
为构建结核分枝杆菌Hsp X基因与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因的真核表达载体,文章采用PCR法扩增Hsp X基因,定向插入到质粒p EGFP-N1的多克隆位点。结果显示,融合基因真核表达载体,经双酶切鉴定、基因测序鉴定克隆片段大小和序列正确。文章成功构建了p EGFP-N1-Hsp X融合基因真核表达载体。
髙莉莉徐苏娟张继明王建杰
关键词:结核分枝杆菌HSP真核表达
表达结核分枝杆菌融合抗原TB10.4-HspX的重组酵母免疫效果研究
2015年
结核病是一种严重危害人类健康的传染病,其防治难点主要在于抗药性菌株的出现以及唯一的抗结核疫苗——卡介苗的效果不理想.为发展新型抗结核疫苗,本研究中构建了表达结核分枝杆菌融合抗原TB10.4-HspX(TB10H)的重组酿酒酵母,分别以皮下注射和滴鼻两种方式免疫小鼠,检测免疫效果.结果显示,该重组酿酒酵母通过皮下注射的方式免疫后刺激小鼠产生TB10H特异性抗体IgG,分泌Th1型细胞因子IFN-γ,而且重组酵母免疫后在一定程度上刺激小鼠树突状细胞的成熟分化和抗原递呈作用.一系列结果表明,表达融合抗原TB10H的重组酿酒酵母能够有效激发小鼠抗原特异性免疫应答.
张宇飞陆健刘建平王洪海
关键词:结核病疫苗重组酿酒酵母HSPX

相关作者

李召东
作品数:53被引量:159H指数:7
供职机构:浙江大学医学院
研究主题:结核分枝杆菌 HSPX 融合蛋白 耐药 肺结核
祝秉东
作品数:132被引量:173H指数:6
供职机构:兰州大学
研究主题:结核分枝杆菌 亚单位疫苗 融合蛋白 结核 结核病疫苗
吴玉敏
作品数:6被引量:2H指数:1
供职机构:兰州大学
研究主题:HSPX MTB8.4 结核分枝杆菌 基因克隆及表达 结核杆菌培养
王秉翔
作品数:80被引量:146H指数:6
供职机构:兰州生物制品研究所有限责任公司
研究主题:融合蛋白 炭疽杆菌 鼠疫 亚单位疫苗 结核分枝杆菌
刘万波
作品数:10被引量:7H指数:2
供职机构:兰州大学
研究主题:亚单位疫苗 佐剂 HSPX MTB8.4 结核杆菌