刘勇
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：北京大学生命科学学院更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- MNDA及MNDA-HIN200片段在大肠杆菌中克隆、表达及纯化被引量：1
- 2011年
- MNDA蛋白是与免疫反应相关的HIN-200家族成员之一,可作为模式识别受体来识别外源性双链DNA,它在人类免疫性疾病中发挥重要作用。通过PCR扩增获得的MNDA全长cDNA和MNDA-HIN200基因片段克隆到原核表达载体pET-28a中,使其N端带有一个His标签,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)表达菌株,经IPTG诱导后,分别经过亲和层析和分子筛层析对MNDA和MNDA-HIN200进行纯化。DNA测序表明,构建的重组质粒正确,筛选了蛋白最适表达菌株BL21(DE3);由于PYD(88 aa)结构域之间的相互作用影响MNDA的表达量及聚集状态,因此设计了PYD缺失的只含有HIN-200结构域的突变体MNDA-HIN200,最终获得了大量的、均一性好、高纯度的MNDA-HIN200蛋白,为MNDA的蛋白的晶体筛选和结构解析奠定基础。
- 李智刘勇郑晓峰张飞云
- 关键词：基因克隆原核表达纯化
- 人源STK3蛋白截短突变体的克隆、表达及纯化
- 2011年
- 人源STK3蛋白(serine/threonine-protein kinase3)是一种促凋亡激酶,能与多种肿瘤相关蛋白相互作用,主要功能为应激活化,能入核介导染色质凝集,导致核小体间DNA碎片化。为了进一步研究STK3蛋白结构与功能,对其进行了克隆、蛋白提取及纯化。由于在表达全长STK3蛋白时很难获得可溶性表达蛋白,基于此蛋白序列特点设计了6个STK3蛋白截短突变体,对其进行克隆、表达及纯化,最终得到了纯度较高的STK3蛋白C端截短突变体(327-491),为下一步进行蛋白结晶和结构测定奠定基础。
- 朱文壮刘勇张飞云
- 关键词：克隆纯化
