公共文化服务平台

共 8 条记录，以下是 1-8

全选清除导出

排序方式：

牛乳中致病性金黄色葡萄球菌快速检测胶体金免疫层析方法研究被引量：8: 2013年; 为建立快速检测牛乳中致病性金黄色葡萄球菌(S.aureus)的胶体金免疫层析方法,本研究将鼠抗S.aureus IgG进行胶体金标记,并喷涂于玻璃纤维上制备金标垫,分别以兔抗S.aureus nEBPS重组蛋白IgG和羊抗鼠IgG作为检测线和质控线,组装制备快速检测牛乳中致病性S.aureus胶体金免疫层析试纸条。结果表明:试纸条对致病性S.aureus具有高度特异性,与沙门氏菌、大肠杆菌、布氏杆菌无交叉反应;试纸条最低检出1.0×105cfu/mL的S.aureus。试纸条批内及批间检测试验均具有良好的重复性。试纸条与S.aureus分离鉴定法符合率为90.0%、与PCR试剂盒符合率为83.3%。表明本研究建立的牛乳中致病性S.aureus免疫层析检测方法具有特异、敏感、稳定、操作简单、快捷等特点,适合于牛乳中致病性S.aureus的现场快速检测。; 布日额任晓峰吴金花锡林高娃王学理刘燕孙立杰刘洋; 关键词：牛乳胶体金免疫层析试纸条

牛乳腺炎无乳链球菌表面蛋白pgk抗原优势区的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立被引量：12: 2013年; 为评价牛乳腺炎无乳链球菌重组表面蛋白(pgk)免疫原性,并通过建立检测抗体的间接ELISA方法对免疫抗体效价进行评价,本研究根据GenBank登录的无乳链球菌pgk基因序列,设计一对引物,以临床分离菌株基因组DNA为模板PCR扩增出pgk蛋白抗原优势区的编码基因序列。将其插入pET-30a(+)中,并在大肠杆菌中表达。Western blot鉴定表明,表达的重组蛋白与阳性血清具有良好的反应原性。采用纯化的表达产物作为包被抗原建立了检测无乳链球菌抗体的间接ELISA方法,确定抗原最佳包被浓度为3.115μg/mL,血清最佳稀释度为1∶160,酶标二抗最适稀释度为1∶4 000。初步应用于检测无乳链球菌、化脓性链球菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌小鼠阳性血清的检测。结果表明牛乳腺炎无乳链球菌pgk亚单位抗原具有良好的抗原性,抗体检测灵敏度达到1∶4 000,同时表现良好的特异性。; 布日额任晓峰吴金花王学理刘燕锡林高娃孙立杰刘洋; 关键词：无乳链球菌

牛乳腺炎金黄色葡萄球菌肠毒素A基因的克隆及序列分析被引量：4: 2011年; 根据GenBank上公布的金黄色葡萄球菌肠毒素A(staphylococcus enterotoxin A,SEA)基因的全序列,设计一对特异性引物扩增内蒙古分离株的SEA基因序列。经基因克隆和序列测定,表明扩增的基因片段长度为582 bp,与标准菌株ATCC13565的SEA基因片段序列相似性为100%,与GenBank上公布的金黄色葡萄球菌菌株(EF520720.1)SEA基因相似性达到99.14%。本研究结果为进一步研究建立牛乳中SEA分子检测技术奠定了实验基础。; 唐吉思吴金花布日额张海宝薛晓阳刘洋张忠祥; 关键词：金黄色葡萄球菌克隆

内蒙古中东部地区乳源性大肠埃希菌PCR检测及其耐药性分析: 2012年; 目的分离牛乳源性大肠埃希菌(E.coli)并进行PCR检测及耐药性分析。方法根据GenBank上公布的牛源致病性大肠埃希菌基因序列,利用Primer5.0和DNAMAN生物信息学软件,根据该致病菌基因组序列16S～23SrRNA间隔区保守序列设计并合成1对引物,对牛乳中分离的大肠埃希菌进行基因扩增和序列测定,同时利用琼脂平板扩散方法分析阳性菌株的耐药状况。结果大肠埃希菌基因PCR扩增产物为396bp,与预期片段大小相符;测序结果与GenBank上公布的牛源大肠埃希菌(X80731.1)基因序列相似性为97.22%,与标准菌株大肠埃希菌(CVCC247)基因序列相似性为100%。分离菌株普遍对卡那霉素、氧氟沙星、氟哌酸高度敏感,对四环素、氨苄青霉素高度耐药。结论成功分离出牛乳源大肠埃希菌菌株,该组分离菌对四环素和氨苄青霉素高度耐药,为进一步建立牛乳中致病性大肠埃希菌的分子检测方法及指导临床用药提供了依据。; 刘洋刘洋布日额吴金花郭闯锡林高娃刘燕; 关键词：大肠埃希菌药物敏感性

荧光定量PCR检测牛乳中金黄色葡萄球菌肠毒素A基因方法的建立被引量：13: 2012年; 为建立检测牛乳中金黄色葡萄球菌(S.aureus)肠毒素A基因(SEA)定性定量的检测方法,本研究针对S.aureus SEA基因片段设计1对引物,将构建的重组质粒作为阳性对照,建立了S.aureus SEA DNA的SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法。结果显示,特异性产物Tm值为78.2℃～78.5℃,最低可检测到49.5 fg/μL(16.5拷贝)的阳性质粒。标准曲线的相关系数为0.99。与其他常见的产SEB的S.aureus、产SEC的S.aureus、无乳链球菌、大肠杆菌、嗜热链球菌、伤寒沙门氏菌、大肠杆菌DH5α及JM109均无交叉反应。该检测方法具有较好的特异性和敏感性,为牛乳中S.aureus的快速检测提供了新的技术手段。; 唐吉思布日额吴金花孙立杰薛晓阳刘洋丁铲; 关键词：牛乳金黄色葡萄球菌肠毒素A 荧光定量PCR

牛乳腺炎金黄葡萄球菌弹性纤维结合蛋白N端蛋白基因的克隆及序列分析被引量：1: 2012年; 目的克隆牛乳腺炎金黄葡萄球菌弹性纤维结合蛋白N端蛋白基因,并进行序列分析。方法根据Gen-Bank上公布的金黄葡萄球菌弹性纤维结合蛋白N端蛋白(nEBPS)基因的全序列,利用生物学软件Primer5.0和Oligo6.0设计了1对特异性引物,采用PCR方法扩增临床分离株nEBPS基因片段。结果扩增的基因片段长度为720bp,与标准菌株(CMCC26074)的nEBPS基因片段序列相似性为100%,与GenBank上公布的金黄葡萄球菌菌株(U48826.2)nEBPS基因相似性为97.36%,核苷酸序列共有19处出现碱基突变。结论成功克隆出牛乳腺炎金黄葡萄球菌SEB基因,为建立快速检测牛乳中金黄葡萄球菌的PCR检测方法奠定了基础。; 薛晓阳吴金花布日额王学理刘洋刘洋刘洋刘燕锡林高娃孙立杰; 关键词：金黄葡萄球菌克隆

牛乳腺炎金黄葡萄球菌肠毒素B基因的克隆及序列分析被引量：2: 2011年; 目的克隆牛乳腺炎金黄葡萄球菌B(SEB)基因,并进行序列分析。方法根据GenBank公布的金黄葡萄球菌基因的全序列,利用生物学软件Primer5.0和Oligo 6.0设计1对特异性引物,扩增临床分离菌株的SEB基因片段。结果扩增的基因片序列长度为466bp,与标准菌株(CMCC26074)的SEB基因片段序列相似性为100%,与GenBank公布的金黄葡萄球菌菌株(AB479118.1)SEB基因序列相似性为99.93%。结论成功克隆出牛乳腺炎金黄葡萄球菌SEB基因,为建立相应的PCR快速检测牛乳SEB基因方法奠定了基础。; 薛晓阳布日额吴金花刘洋; 关键词：金黄葡萄球菌克隆

牛乳源性金黄色葡萄球菌nEBPS蛋白表达鉴定及多克隆抗体制备被引量：3: 2013年; 利用PCR方法扩增乳源致病性金黄色葡萄球菌nEBPS全基因,将其定向克隆至原核表达载体pET30a(+)中,鉴定正确后,转化BL21表达菌,经IPTG诱导获得了以可溶性表达的重组蛋白。通过Ni NTA Purification System纯化重组蛋白,纯化蛋白质量浓度为2.16g/L。纯化蛋白经免疫印迹检测显示重组蛋白能够被牛源金黄色葡萄球菌阳性血清识别,具有良好的反应性。将纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,间接ELISA测定抗体效价为1∶25 600,凝集试验测定抗体效价为1∶128。; 布日额任晓峰吴金花王学理刘燕锡林高娃孙立杰刘洋; 关键词：金黄色葡萄球菌多克隆抗体

全选清除导出

共1页<1>

刘洋

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

刘洋

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈